石蜡切片制作过程

1、国家玉米改良中心河北分中心1脱水、透明第1日1.脱水前用70%的酒精浸洗两次，第一次浸洗1-2h，并抽真空15min左右，第二次换液后在室温下过夜第2日：2.在浓度分别为80%，85%，90%，95%，100%，100%的酒精中脱水，各级酒精脱水时间为90min。共需9h。3.经1/2二甲苯和1/2酒精的混合液过渡，在纯二甲苯，纯二甲苯中进行透明，过渡和两次透明的时间也都是90min。共需4.5h（建议在第二次二甲苯透明时也抽真空一次，保证材料中不存在气泡）2浸蜡第2日晚4.将装有透明好的材料的小瓶（此时小瓶中的二甲苯的量应位于小瓶的1/2处）中放入浮蜡（使用浮蜡的目的使其不与材料直接接触，否

2、则会使材料变脆），使浮蜡占据小瓶另外的1/2，盖上瓶盖，放于38烘箱过夜。5.继续向小瓶中加浮蜡或蜡末，并升高温度至45（目的是加大石蜡在二甲苯中的溶解量），若到晚上蜡末仍未溶解完全，就将温度升到50过夜。（但要注意温度过高会使材料变脆）6.晚上将干净的蜡块放于65烘箱中，便于次日直接使用融化好的石蜡蜡末和浮蜡的制作方法：需要提前制备好蜡末的制作方法：将过滤好的并凝固彻底的石蜡块在筛子上来回擦即可获得。浮蜡的制作方法：将装有干净的熔融石蜡瓶子从烘箱中拿出，不断顺时针或逆时针摇晃使石蜡液体中产生气泡，直至液体的石蜡摇晃不懂而变成固体的浮蜡，建议将浮蜡切碎后使用，加快的溶解速度。3浸蜡、包埋第3日

3、7.将烘箱温度设为68倾出1/2石蜡二甲苯，导入1/2融化石蜡倾出1/2石蜡二甲苯，导入1/2融化石蜡将材料放入纯石蜡中将材料放入纯石蜡中将材料放入纯石蜡中，每次2h。第3日晚8.将折好的包埋盒放在用10L枪头盒制作的容器内置于地面，将液体石蜡倒入包埋盒内，等1min左右，借地温使包埋盒底部稍作凝固后，镊子在酒精灯火焰上预热后，将材料从小瓶中夹入包埋盒内，并将材料在包埋盒内摆好。（此过程越快越好，如果包埋盒内蜡的表面出现薄膜时，用烧烫的镊子将其拨开）此时，也应注意小瓶内石蜡的凝固，为防止此现象的出现，应不时的在酒精灯火焰上烤下。将材料都夹入包埋盒内后，双手将包埋盒缓缓提起，并移入盛有凉水的水盆

4、中，待表层石蜡凝结一层薄膜后，迅速将包埋盒翻转使盒底向上，并用重物（筛子最好）将包埋盒压在水底。1h后即可凝固好。9.将包埋好的蜡块放入4储藏，随用随取。45蜡块的修整和切削第4日1.修蜡：将蜡块修成长宽比为3:2而且上下两边一定要尽量平行（保证切蜡时，蜡带是直的而不是弯的），材料距四周的距离约为2mm的小蜡块即可。2.切蜡：将蜡块粘在小木块上，并在-20冻几分钟（使材料和石蜡的硬度更加一致，方便切蜡），将木块固定在切片机上开始切片。6展片和贴片第4日1.展片：粘贴剂使用梅氏蛋白甘油粘贴剂1%的稀释液：在载玻片（用洗涤灵清洗干净的载玻片）上滴200L的稀释液，并涂均匀，将蜡带置于稀释液上并调整

5、位置，置于50烘箱。2.贴片：将载玻片置于50烘箱4h以上即可完成。备注：为了将染色和修蜡、切片、贴片连贯起来，建议在10:00开始修蜡至贴片的步骤，并在12:00之前完成。7染色（海氏苏木精固绿）1.第4日下午16:30开始：纯二甲苯 5 min 纯二甲苯 5 min 1/2二甲苯和1/2酒精 5 min 100%酒精 5 min 100%酒精 5 min 95%酒精 5 min 85%酒精 5 min 75%酒精 5 min 50%酒精 5 min 蒸馏水轻轻漂洗4%铁帆 4h 蒸馏水轻轻漂洗0.5%苏木精 8-12小时 2.第5日上午8:00开始：2%铁帆 20 min 蒸馏水轻轻漂洗50%酒精 5 min 75%酒精 5 min 85%酒精 5 min 95%酒精 5 min 0.1%固绿 1 min 100%酒精 30 s 10