一轮复习 苏教版 发酵工程的培养基与无菌技术（118张） 课件

1、发酵工程的培养基与无菌技术第1课时课标要求1.概述培养基的类型及用途。2.阐明无菌技术的操作方法。3.概述利用平板划线法和稀释涂布平板法，进行微生物分离和纯化。考点一发酵工程的培养基考点二发酵工程的无菌技术内容索引重温高考 真题演练课时精练发酵工程的培养基考点一培养基(1)概念：主要是指为人工培养微生物等而制备的，适合微生物等_ 的营养基质。梳理归纳 夯实必备知识生长、繁殖或积累代谢产物(2)类型按成分分类培养基种类成分优点缺点用途天然培养基 或_ 以及它们的提取物或粗消化物取材便利、_ 、配制简便营养成分难以控制，实验结果的重复性较差工业化生产合成培养基准确称量的高纯度 加_化学成分 ，实验

2、可重复性好配制过程繁琐，成本较高研究与育种动植物组织微生物细胞营养丰富化学试剂蒸馏水明确按物理状态分类培养基种类特点用途 培养基不含 ，呈 状态工业生产 培养基或半固体培养基含 ，呈 或半固体状态微生物的分离、鉴定，活菌计数，菌种保藏凝固剂液体液体固体凝固剂(如琼脂)固体按用途分类： 培养基和特殊培养基基础特殊培养基种类选择培养基鉴别培养基 培养基用途将某种或某类 从混杂的微生物中分离出来快速 不同微生物，也用于 和筛选产生某种_的菌种用于培养营养要求比较苛刻的 微生物。可增加所需微生物的_微生物分类鉴定分离代谢产物加富异养数量(3)成分成分含义作用来源碳源_构成生物体的细胞的物质和一些代谢产

3、物，有些也是异养生物的能源物质无机碳源：CO2、NaHCO3等；有机碳源：糖类、牛肉膏等氮源_无机氮源：N2、NH3、铵盐、硝酸盐等；有机氮源：蛋白胨等提供碳元素的物质提供氮元素的物质合成蛋白质、核酸等物质无机盐为微生物提供除碳、氮之外的各种重要元素，包括大量元素和微量元素为微生物提供无机营养，调节培养基的pH等无机化合物：KH2PO4、K2HPO4、NaCl等水生物体含量最高的无机化合物良好的溶剂，参与化学反应等培养基、代谢产物考向培养基配制及其作用1.(多选)现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分和含量如下表，假设用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，甲、乙适合分离的微生物是考向

4、突破 强化关键能力成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖纯淀粉甲培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%A.甲培养基适于分离自养型自生固氮菌B.甲培养基适于分离异养型自生固氮菌C.乙培养基适于分离自养型自生固氮菌D.乙培养基适于分离异养型自生固氮菌成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖纯淀粉甲培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%甲培养基中含有的葡萄糖和淀

5、粉是有机物，可以作为碳源和能源，适用于异养微生物生长，由此推出该培养基适于分离异养型的自生固氮菌，A错误、B正确；乙培养基中不含有机碳源，不含氮源，可用来分离培养自养型的自生固氮菌，C正确、D错误。成分KH2PO4MgSO47H2ONaClCaSO42H2OCaCO3葡萄糖纯淀粉甲培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%0.5%2%乙培养基0.02%0.02%0.02%0.01%0.5%2.在微生物培养的过程中，需要通过选择培养或鉴别培养的方法来筛选出目标菌种。下列与之相关的叙述中，不正确的是A.纤维素分解菌能够分解刚果红染料，从而使菌落周围出现透明圈B.尿素分解菌能够将尿素分解

6、为氨，从而使酚红指示剂变红C.在培养基中加入抗生素能够筛选出具有相应抗性的菌株D.在含有碳酸钙的培养基上生长的乳酸菌菌落周围会出现“溶钙圈”纤维素分解菌能够分解纤维素，在培养基中加入刚果红，可与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，红色复合物不能形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，A错误；尿素分解菌能够将尿素分解为氨，使培养基呈碱性，从而使酚红指示剂变红，B正确。3.如表所示为某培养基的配方，下列叙述错误的是成分NaNO3K2HPO4MgSO47H2O(CH2O)蒸馏水青霉素含量3 g1 g0.5 g30 g定容至1 000 mL0.1万单元A.根据物理性质划分，该培

7、养基属于液体培养基B.微生物无法在该培养基表面形成肉眼可见的菌落C.根据培养基的配方可知，该培养基培养的微生物的同化作用类型是异 养型D.固体培养基中加入少量水即可形成液体培养基成分NaNO3K2HPO4MgSO47H2O(CH2O)蒸馏水青霉素含量3 g1 g0.5 g30 g定容至1 000 mL0.1万单元液体培养基中加入凝固剂(如琼脂)可形成固体培养基，题表所示的培养基配方中没有加凝固剂，因此属于液体培养基，A正确、D错误；微生物在固体培养基表面或内部生长，形成肉眼可见的菌落，B正确；该培养基中的(CH2O)可作为有机碳源，因此其培养的微生物的同化作用类型是异养型，C正确。发酵工程的无

8、菌技术考点二1.发酵工程的灭菌方法(1)化学试剂灭菌法：采用 灭菌的方法。一般不用于培养基灭菌。(2)射线灭菌法：利用紫外线等产生的 进行灭菌的方法。(3)干热灭菌法：包括 灭菌法和 法等。(4)湿热灭菌法：利用 进行灭菌的方法。(5)过滤除菌法：通过 从而达到除菌目的的方法。梳理归纳 夯实必备知识灭菌剂高能粒子干热空气火焰灼烧饱和蒸汽过滤阻留微生物2.发酵工程的灭菌设备(1)电热鼓风干燥箱： 灭菌设备常用于空的 、金属工具和其他耐高温的物品的灭菌。(2)高压蒸汽灭菌锅： 灭菌设备，其使用包括加水、 、加热、排空冷空气、 、出锅等步骤。(3)空气除菌设备。干热玻璃器皿湿热装锅保温保压3.发酵工

9、程的无菌操作器具(1)接种器工具接种：是指在 条件下将微生物接入 的操作过程。常用的工具有 等，在涂布平板接种时要用 ，穿刺接种时要用接种针，在 或在固体培养基平板上进行 时要用接种环。(2)转移器具移液管：用来准备移取一定 的溶液或 化学试剂的量器。微量取液器：取液量 时使用，分为固定容量的和可调容量的两种。玻璃涂布器、接种针、接种环无菌培养基玻璃涂布器斜面接种划线接种体积分装很少超净工作台：是一种经过空气净化而形成 操作环境的设备。优点是操作 。4.微生物接种和传代的无菌技术(1)穿刺接种：常用于 微生物。(2)斜面接种：常用的菌种传代和低温下 菌种的方法。(3)斜面接种和培养酵母菌主要目

10、的： 、扩大培养和 等。主要步骤：准备接种 试管口灭菌挑取少许菌种 培养。高洁净方便厌氧保存菌种转移保存纯净菌种接种环灭菌划线接种5.微生物分离、纯化和培养的无菌技术(1)两种纯化方法的比较项目平板划线法稀释涂布平板法分离结果关键操作接种环在固体培养基表面连续划线一系列的梯度稀释；涂布平板操作接种用具接种环涂布器优点可以观察菌落特征，对混合菌进行分离可以计数，可以观察菌落特征缺点不能计数操作复杂，需要涂布多个平板共同点都要用到固体培养基；都需进行无菌操作；都会在培养基表面形成单个的菌落；都可用于观察菌落特征(2)酵母菌纯培养的操作步骤1520 g琼脂湿热灭菌(高压蒸汽灭菌)干热灭菌酒精灯火焰灼

11、烧灭菌平板划线法恒温培养箱28请思考以下问题：平板冷凝后，要将平板倒置的原因是什么？提示因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，平板倒置后，既可避免培养基表面的水分过快地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。在接种前随机取若干个灭菌后的未接种的平板，先行培养一段时间，这样做的目的是 。检测培养基平板灭菌是否合格平板划线第二次及其以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，这样做的目的是什么？提示能使微生物的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个微生物繁殖形成的纯培养物。平板划线时最后一次划线为何不能与第一次划线相连？提示最后一次划线已经将酵母菌稀释成单个细胞，如果与第一次划线相连，则

12、增加了酵母菌数目，得不到纯化的效果。(3)土壤中分解尿素的细菌的分离与计数分离原理：土壤中的细菌之所以能分解尿素，是因为它们能合成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起到 作用。统计菌落数目一般用 法。脲酶催化涂布平板计数：统计菌落数目时，培养基表面生长的1个菌落，来源于样品稀释液中 个活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。130300公式： 。(平均菌落数涂布的稀释液体积)稀释倍数延伸应用筛选能高效降解尿素的细菌(目的菌)的培养基成分如下表所示：KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O葡萄糖尿素琼脂H2O1.4 g2.1 g0.2 g10.0 g1.0 g15.0

13、 g定容至1 000 mL延伸应用(1)该培养基是如何实现对分解尿素的细菌的筛选的？提示该培养基中唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能够分解尿素，而不能合成脲酶的微生物不能分解尿素，会因缺乏氮源而无法生长繁殖，所以用该培养基能够筛选出分解尿素的细菌。(2)如何证明该选择培养基的确起到了筛选作用？提示同时设置牛肉膏蛋白胨培养基并进行接种后培养，观察两种培养基上的菌落数目；若牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数明显多于选择培养基上的菌落数，则证明了选择培养基的确起到了筛选作用。延伸应用(3)如何证明所用的选择培养基没有受到环境污染？提示将未接种的上述培养基与接种的上述培养基同时培养，观察是否有菌落的

14、产生；若未接种的培养基无菌落产生，则证明培养基没有受到环境污染。延伸应用(4)若甲、乙两位同学用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的该细菌数。在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下两种统计结果。甲同学在该浓度下涂布了一个平板，统计的菌落数为230，该同学的统计结果是否真实可靠？为什么？提示不可靠。为增强实验的说服力与准确性，应设置重复实验，在同一稀释度下涂布至少3个平板，统计结果后计算平均值。延伸应用乙同学在该浓度下涂布了3个平板，统计的菌落数分别为21、212、256，该同学将21舍去，然后取平均值。该同学对实验结果的处理是否合理？为什么？提示不合理。微生物计数时，如果实验中出现重复实验结

15、果不一致的情况，应分析实验过程中可能的影响因素，找出差异的原因，需重新实验，而不能简单地舍弃。考向一发酵工程灭菌的方法设备与无菌技术操作器具4.下列有关使用高压蒸汽灭菌锅的操作，错误的是A.加水时，水面应与三角搁架平齐B.加盖时，将排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内C.加热时，待冷空气完全排尽后关上排气阀D.切断电源后，打开排气阀使压力表降到零后开盖考向突破 强化关键能力在使用高压蒸汽灭菌锅灭菌时，加水时的水面应与三角搁架平齐，A正确；加盖时，应该将排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内，B正确；加热时，应该等冷空气完全排尽后再关上排气阀，C正确；切断电源后，应该等压力表降到零后再打开排气阀并开盖，D

16、错误。5.(2022南通高三月考)微生物培养时常利用无菌技术避免杂菌的污染，下列相关叙述错误的是A.配制好的培养基应放入干热灭菌箱中进行干热灭菌B.实验中避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触C.接种前后的接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧D.实验结束后对实验室喷洒石碳酸同时配合紫外线照射对培养基灭菌的方法是高压蒸汽灭菌法，A错误；为避免杂菌污染，实验中应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触，B正确；为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，C正确；紫外线能破坏DNA结构，密闭空间内的空气常采用紫外线照射消毒，喷洒石碳酸同时配合紫外线照射可提高对密闭空间的消毒效果，D正确。考向二

17、微生物接种和传代、分离、纯化和培养的无菌技术6.穿刺接种是用接种针蘸取少量的菌种，沿半固体培养基中心向管底作直线穿刺，如某细菌具有鞭毛而能运动，则在穿刺线周围能够生长。下列叙述错误的是A.与平板划线法所用的培养基相比，穿刺接种 所需的培养基添加的琼脂较少B.穿刺接种可用于样品中活菌数量统计C.穿刺接种可用于保藏厌氧菌种或研究微生物的运动D.穿刺接种可用于鉴定微生物的呼吸作用类型由于是半固体培养基，因此与平板划线法所用的培养基相比，穿刺接种的培养基添加的琼脂较少，A正确；穿刺接种不可用于样品中活菌数量统计，因为接种是不定量的，B错误；由于是半固体培养基，所以穿刺接种可用于保藏厌氧菌种或研究微生物

18、的运动，C正确；由于穿刺接种后微生物可以分布于培养基的各个部位，因此可用于鉴定微生物的呼吸作用类型，D正确。7.(2022苏州高三期中)酵母中的蛋白含量高，可用作饲料蛋白，且有些酵母能利用工业废甲醇作为碳源进行繁殖。研究人员拟从土壤中分离该类酵母并大量培养，操作流程如下图。下列相关叙述正确的是A.土样、培养基、培养器皿和接种工具等都必须严格灭菌B.只有过程中使用的培养基需以甲醇作为唯一的碳源C.过程扩大培养时需要保证充足的营养并营造无氧环境D.通过逐步提高培养基中甲醇的浓度可获得甲醇高耐受菌株土样中含有要分离的酵母，如果对其灭菌会杀死酵母，无法得到该类酵母，因此不能对其灭菌，A错误；扩大培养时

19、也需要以甲醇作为唯一的碳源，不是只有过程，B错误；酵母是兼性厌氧型真菌，在有氧条件下可大量繁殖，酵母扩大培养时，需保证充足的营养和氧气等条件，C错误；逐步提高培养基中甲醇的浓度，能筛选出其中的耐受菌，获得甲醇高耐受菌株，D正确。8.菌落总数可作为判定食品被污染程度的标志，也可以用于观察细菌在食品中繁殖的动态，以便对送检样品进行卫生学评估提供证据。下图是某样品培养简化流程图，请分析回答下列问题：(1)该营养琼脂培养基配制过程中，其基本步骤包括按照培养基配方准确计算、称量、溶化、调节pH、 法灭菌等。高压蒸汽配制培养基时应按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的pH，并进行高压

20、蒸汽灭菌；然后将培养基放入47 水浴锅保温，用手触摸不烫手还便于操作，并能保证培养基处于溶化状态，且在凝固之前接种不致将培养物烫死。(2)实验过程中须将样品剪碎并使用均质器10 000 rmin1处理1 min，其目的是 。样品稀释时取1mL原液加入_ 中，稀释10倍。涂布器一般是在酒精中浸泡，然后酒精火焰上引燃灭菌，不用灼烧灭菌的原因 。尽量使样品中的微生物细胞分散9 mL无玻璃涂布器灼烧后不易降温菌水(蒸馏水不对)实验过程中要将样品剪碎并使用均质器10 000 rmin1处理1 min，尽量使样品中的微生物细胞分散；将1 mL样品稀释10倍，需加入9 mL无菌水，玻璃涂布器灼烧后不易降温，

21、所以涂布器灭菌时，将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却810 s再用。(3)本实验用菌落计数的原理是基于 ，运用这种方法统计的结果往往较实际值偏 ，原因是_ 。通常对获得的纯菌种可以依据菌落的 等菌落特征对微生物进行初步鉴定(或分类)。一个菌落代表一个活菌小当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落形状、大小、颜色、隆起程度当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，因此一个菌落可代表一个活菌。但在培养过程中，可能是两个或多个活菌形成一个菌落，因此运用这种方法统计的结果往往较实际值偏小；通常对获得的纯菌种可以依据菌落的形状、大小

22、、颜色、隆起程度等菌落特征对微生物进行初步鉴定。(4)用菌落计数的具体培养结果如下表。选取菌落数30300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当只有一个稀释梯度的平均菌落数符合此范围，以该培养皿菌落数稀释倍数报告。当有两个梯度菌落值在30300之间，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低(稀释次数越多，稀释度越高)的培养皿菌落数。请填写例次2、3中“？”处的菌落总数分别为 、 。37 75027 100例次不同稀释度平均菌落数两稀释度菌落数之比菌落总数CFU/mL(g)10110210311 3651642016 40022 760295461.6

23、？32 890271602.2？结合题干可知，报告菌落总数时，应选取菌落数30300的培养皿作为菌落总数的测定标准。当有两个梯度菌落值在30300之间时，报告结果由二者菌落数比值决定，若比值不大于2，则取平均数；若比值大于2，则报告稀释度较低的培养皿菌落数。因此例次2应选择102和103的菌落数求平均，该培养皿菌落数为(29.546)237.75，故例次2的菌落总数为该培养皿菌落数稀释倍数，既37.751 00037 750，例次3应选取102的菌落数报告，则3菌落总数为27110027 100。重温高考 真题演练1.(2021山东，14)解脂菌能利用分泌的脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸并吸收

24、利用。脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色。将不能直接吸收脂肪的甲、乙两种菌分别等量接种在醇溶青琼脂平板上培养。甲菌菌落周围呈现深蓝色，乙菌菌落周围不变色，下列说法错误的是A.甲菌属于解脂菌B.实验中所用培养基以脂肪为唯一碳源C.可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比D.该平板可用来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力1234512345根据题干信息“甲菌菌落周围呈现深蓝色”，说明甲可以分泌脂肪酶将脂肪分解成甘油和脂肪酸，脂肪酸会使醇溶青琼脂平板变为深蓝色，因此甲菌属于解脂菌，A项正确；乙菌菌落周围没有出现深蓝色，说明乙菌不能产生脂肪酶，不能利用脂肪为其供能，但乙菌也可以在培养基上生存，说明该培养

25、基不是以脂肪为唯一碳源，B项错误；可将两种菌分别接种在同一平板的不同区域进行对比，更加直观，C项正确；可以利用该平板来比较解脂菌分泌脂肪酶的能力，观察指标可以是菌落周围深蓝色圈的大小，D项正确。2.(2021山东，20)含硫蛋白质在某些微生物的作用下产生硫化氢导致生活污水发臭。硫化氢可以与硫酸亚铁铵结合形成黑色沉淀。为探究发臭水体中甲、乙菌是否产生硫化氢及两种菌的运动能力，用穿刺接种的方法，分别将两种菌接种在含有硫酸亚铁铵的培养基上进行培养，如图所示。若两种菌繁殖速度相等，下列说法错误的是A.乙菌的运动能力比甲菌强B.为不影响菌的运动需选用液体培养基C.该实验不能比较出两种菌产生硫化氢的量D.

26、穿刺接种等接种技术的核心是防止杂菌的污染1234512345从图中可以看出甲菌在试管中分布范围小于乙菌，说明了乙菌的运动能力比甲菌强，A正确；为不影响菌的运动需选用半固体培养基，B错误；该实验可以根据黑色沉淀的多少初步比较细菌产生硫化氢的能力，但不能测定产生硫化氢的量，C正确；微生物接种技术的核心是防止杂菌的污染，D正确。3.(2020江苏，19)为纯化菌种，在鉴别培养基上划线接种纤维素降解细菌，培养结果如图所示。下列叙述正确的是A.倒平板后需间歇晃动，以保证表面平整B.图中、区的细菌数量均太多，应从 区挑取单菌落C.该实验结果因单菌落太多，不能达到菌种纯化的目的D.菌落周围的纤维素被降解后，

27、可被刚果红染成红色12345123温度降低后，培养基易凝固，因此倒平板后要及时轻轻晃动，以保持均一性，A项错误；由题图可见，随着划线次数增多，细菌密度减小，区开始出现单菌落，应从区挑取单菌落，B项正确；菌落是由单个微生物细胞或多个同种细胞繁殖到一定程度后形成的，能得到单菌落即可以达到菌种纯化的目的，C项错误；刚果红与纤维素形成红色复合物，菌落周围的纤维素被降解后红色消失，出现透明圈，D项错误。454.(2020江苏，31)产脂肪酶酵母可用于含油废水处理。为筛选产脂肪酶酵母菌株，科研人员开展了相关研究。请回答下列问题：(1)常规微生物实验中，下列物品及其灭菌方法错误的是 (填编号)。123编号物

28、品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧45(2)称取1.0 g某土壤样品，转入99 mL无菌水中，制备成菌悬液，经_ 后，获得细胞密度不同的菌悬液。分别取0.1 mL菌悬液涂布在固体培养基上，其中10倍稀释的菌悬液培养后平均长出了46个酵母菌落，则该样本中每克土壤约含酵母菌 个。编号物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧梯度稀释4.6105(或460 000)12345利用稀释涂布平板法统计活菌数目时，需要将制备的菌悬液进行梯度稀释，以获得细胞密度不同的菌悬液，一般来说，菌落数在30300个的平板最适于计数。0.1 mL菌悬液中含有46个酵母菌落，则1

29、 mL菌悬液中含有460个酵母菌落；1.0 g土壤样品首先稀释100倍，然后稀释10倍，共稀释了1 000倍，因此样本中每克土壤约含酵母菌4601 0004.6105(个)。12345(3)为了进一步提高酵母菌产酶能力，对分离所得的菌株，采用射线辐照进行 育种。将辐照处理后的酵母菌涂布在以 为唯一碳源的固体培养基上，培养一段时间后，按照菌落直径大小进行初筛，选择直径 的菌落，纯化后获得A、B两突变菌株。编号物品培养基接种环培养皿涂布器灭菌方法高压蒸汽火焰灼烧干热臭氧诱变脂肪较大12345采用射线辐照引起酵母菌基因突变，此种方法属于诱变育种。检查诱变酵母菌产脂肪酶的能力，需要把酵母菌接种到以脂肪

30、为唯一碳源的培养基上，按照产生菌落直径大小进行初步筛选，直径大的说明产酶能力强，利用的脂肪(碳源)多，直径小的说明产酶能力弱，利用的脂肪(碳源)少。12345_。(4)在处理含油废水的同时，可获得单细胞蛋白，实现污染物资源化。为评价A、B两菌株的相关性能，进行了培养研究，结果如图。据图分析，应选择菌株 进行后续相关研究，理由是B该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；降解脂肪能力强，净化效果好12345通过分析题图可知，相同时间内，菌株B细胞密度大，说明该菌株增殖速度快，单细胞蛋白产量高；相同时间内，菌株B利用的脂肪多，脂肪剩余量少，说明该菌株降解脂肪的能力强，净化效果好。123455.(2020

31、全国，37)某种物质S(一种含有C、H、N的有机物)难以降解，会对环境造成污染，只有某些细菌能降解S。研究人员按照下图所示流程从淤泥中分离得到能高效降解S的细菌菌株。实验过程中需要甲、乙两种培养基，甲的组分为无机盐、水和S，乙的组分为无机盐、水、S和Y。12345回答下列问题：(1)实验时，盛有水或培养基的摇瓶通常采用 的方法进行灭菌。乙培养基中的Y物质是 。甲、乙培养基均属于 培养基。高压蒸汽灭菌(湿热灭菌)琼脂选择12345微生物培养过程中，培养基的灭菌通常采用高压蒸汽灭菌(湿热灭菌)的方法。乙培养基为固体培养基，因此培养基中加入的是可使液体培养基凝固的琼脂。甲、乙两种培养基都是为了分离出

32、可降解S的细菌，因此是选择培养基。12345(2)实验中初步估测摇瓶M中细菌细胞数为2107个/mL，若要在每个平板上涂布100 L稀释后的菌液，且保证每个平板上长出的菌落数不超过200个，则至少应将摇瓶M中的菌液稀释 倍。104设稀释倍数为A，1 mL1 000 L，可得(2107/A)0.1200，解得A104。12345(3)在步骤的筛选过程中，发现当培养基中的S超过某一浓度时，某菌株对S的降解量反而下降，其原因可能是_ (答出1点即可)。S的浓度超过某一值时会抑制菌株的生长1234512345在筛选降解S物质的细菌的过程中，如果培养基中的S浓度过高，会导致细菌培养基的渗透压增大，细菌失

33、水而代谢活性降低，对S的降解量反而下降(或者S改变了培养基的pH，导致细菌代谢活性降低)。(4)若要测定淤泥中能降解S的细菌细胞数，请写出主要实验步骤：_。取淤泥加入无菌水中，涂布(或稀释涂布)到乙培养基上，培养后计数测定淤泥中能降解S的细菌细胞数的主要步骤是淤泥取样，即取少量的淤泥加入无菌水中；用涂布平板法涂布到乙培养基上；微生物培养与观察计数。12345(5)上述实验中，甲、乙两种培养基所含有的组分虽然不同，但都能为细菌的生长提供4类营养物质，即 。水、碳源、氮源和无机盐培养基中含有细菌生长所需要的4类基本营养物质，即水、碳源、氮源、无机盐。12345一、易错辨析1.消毒的原则是既杀死材料

34、表面的微生物，又减少消毒剂对细胞的伤害()2.倒平板就是等待培养基冷却凝固后，将培养皿倒过来放置()3.倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上()4.为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落()5.分解尿素的细菌在分解尿素时，可以将尿素转化为氨，使得培养基的酸碱度降低()五分钟查落实二、填空默写1.培养基的化学成分包括 等。2.选择培养基是_ 。3.平板冷凝后，要将平板倒置的原因是_。水、无机盐、碳源、氮源一种能将某种或某类微生物从混杂的微生物群体中分离出来的特殊培养基平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以减少培养基中的水分

35、过快地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染4.在灼烧接种环之后，要等其冷却后再进行划线的原因是_ 。5.在第二次以及其后的划线操作时，总是从上一次划线的末端开始划线的原因是_。6.同一稀释度下，应至少对 个平板进行重复计数，然后求出平均值。以免接种环温度太高，杀死菌种 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落37.绝大多数微生物都能利用葡萄糖，但是只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素。利用以 作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。8.当 ，统计的菌落数往

36、往比活菌的实际数目少。尿素两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落课时精练一、单项选择题1.下列有关培养基的叙述，不正确的是A.纯化微生物和植物组织培养时常用的是固体培养基B.在固体培养基中加入无菌水稀释，可直接用于扩大化培养细菌C.根据培养基上菌落的特征可初步判断和鉴别细菌的类型D.用高压蒸汽灭菌法对培养基灭菌时，初期需排气12次，否则压力达 到温度达不到123456789101113121234567891011纯化微生物需要获得单个菌落，用固体培养基，而植物组织培养一般用固体培养基，因为植物需要固定，A正确；大量培养微生物要用液体培养基，固体培养基用于分离纯化微生物，B错误；

37、不同细菌的菌落形态，颜色，大小等菌落特征不同，因此根据培养基上菌落的特征可初步判断和鉴别细菌的类型，C正确；用高压蒸汽灭菌法对培养基灭菌时，初期需排气12次，排出灭菌锅内的冷空气，否则压力达到温度达不到，D正确。13122.下图表示土壤中微生物为植物提供氮的过程，图中、分别代表相关物质，下列有关说法，正确的是A.是N2、是NH3，X代表的细菌异化作用类型是需氧型B.是NH3、是 ，固氮菌在生态系统中属于消费者C.是NH3、是 ，X代表的细菌以有机物作为碳源D.在实验室培养固氮菌可用二氧化碳为碳源的无氮培养基123456789101113121234567891011是N2、是 ，X代表的细菌异

38、化作用方式可能是需氧型，A错误；是N2、是NH3，固氮菌在生态系统中属于消费者，B错误；是NH3、是 ，X表示土壤中的分解者，X代表的细菌以土壤中的有机物为碳源，C正确；固氮菌属于异养微生物，在实验室培养固氮菌不能用二氧化碳为碳源的无氮培养基，D错误。13123.(2022南京高三期中)下列有关以CO2为唯一碳源的自养微生物所需营养物质的描述中，错误的是A.铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生物提供必要的氮素B.碳源物质是该微生物的能源物质C.水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质D.琼脂是该微生物的营养要素之一123456789101113121234567891011铵盐和硝酸盐等无机氮为该微生

39、物提供必要的氮素，A正确；以CO2为唯一碳源的自养微生物，CO2不是该微生物的能源物质，B正确；水、无机盐也是该微生物不可缺少的营养物质，C正确；琼脂是凝固剂，不是该微生物的营养要素之一，D错误。13124.下列关于无菌操作技术的说法，正确的是A.消毒仅能杀死物体表面的芽孢和孢子B.液态的牛奶可用巴氏消毒法消毒C.培养皿、胶头吸管可用干热灭菌法灭菌D.高压蒸汽灭菌时间达到后立即排气降温123456789101113121234567891011消毒不能杀死物体表面的芽孢和孢子，A错误；牛奶用巴氏消毒法消毒，B正确；干热灭菌法适用于玻璃器皿和金属工具，胶头吸管可用高压蒸汽灭菌，C错误；高压蒸汽灭

40、菌时间达到后待压力降至零时，再打开排气阀排气，D错误。13125.下图表示培养和纯化X细菌的部分操作步骤。下列有关叙述正确的是A.步骤操作时，倒好平板后应立即将其倒 置，防止冷凝水落在培养基上造成污染B.步骤接种环和试管口应先在火焰上灼烧，接种环冷却后再放入试管中 蘸取菌液C.步骤沿多个方向划线，使接种物逐渐稀释，培养后可根据出现的单个 菌落计数D.步骤将培养皿放在恒温培养箱中培养，一段时间后所得到的都是X细 菌菌落12345678910111312倒好平板后需待培养基凝固后再倒置，A错误；接种环和试管口的灼烧都属于无菌操作，接种环冷却后才能蘸取菌液，B正确；计数一般使用稀释涂布平板法，平板划

41、线法不适合，C错误；步骤培养后得到的菌落可能还有杂菌，需要进一步纯化，D错误。123456789101113126.(2022江苏模拟预测)稀释涂布平板是分离菌种常用的方法，下列相关叙述不恰当的是A.固体培养基灭菌后，应冷却至50 左右时倒平板B.倒好的平板需立即使用，以免表面干燥，影响菌的生长C.稀释涂布平板分离到的单菌落需进一步划线纯化D.稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数123456789101113121234567891011固体培养基灭菌后，应冷却至50 左右时倒平板，固体培养基中含有琼脂，40 左右会凝固，因此温度过低会导致培养基凝固，无法倒平板，A正确；倒

42、好的未接种的培养基不能马上使用，需要在恒温箱中保存12 d，如果没有菌落生长，说明培养基的制备是成功的，这时才可以使用，B错误；稀释涂布平板分离到的单菌落仍需进一步划线纯化，以利于菌种保藏，C正确；结合分析可知，稀释涂布平板法既可用于微生物的分离，也可用于微生物的计数，D正确。13127.下列有关微生物培养的叙述，正确的是A.纯化培养时，对培养皿皿盖做标记，培养皿应倒置放在恒温培养箱内 的摇床上培养B.涂布接种时，需将涂布器蘸酒精后在酒精灯外焰上引燃，冷却后再使用C.培养基采用高压蒸汽灭菌，高压灭菌加热结束后，打开放气阀使压力 表指针回到零后，开启锅盖D.可用平板划线操作对微生物进行分离和计数

43、123456789101113121234567891011纯化培养时，培养皿应倒置放在恒温培养箱内静止培养，不需要放在摇床上培养，以免杂菌污染，A错误；涂布接种时，需将涂布器蘸酒精后在酒精灯外焰上引燃，冷却后再使用，以免高温将部分微生物杀死，B正确；高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，C错误；稀释涂布平板法和平板划线法都能对微生物进行分离纯化，但只有稀释涂布平板法可用于计数，D错误。13128.在做分离“分解尿素的细菌”实验时，甲同学从对应106培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落。下列有关叙述不正确的是A.甲

44、同学出现这种结果的原因可能是土样不同B.可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对 照，以证明培养基是否受到污染C.让其他同学用与甲同学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一样， 则可证明甲同学无误D.B选项的实验思路遵循了实验的对照原则，而C选项的没有123456789101113121234567891011甲同学出现这种结果的原因可能是土样不同，也可能是操作中污染造成的，A正确；甲同学的实验结果可能是培养基污染造成的，可以将甲同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养作为空白对照，以证明培养基是否受到污染，B正确；如果是甲同学实验操作过程中污染造成的，让其他同学用与甲同

45、学一样的土壤进行实验，如果结果与甲同学一样，则可证明甲同学无误，C正确；B、C选项的实验思路都遵循了实验的对照原则，D错误。1312二、多项选择题9.(2022南京市中华中学模拟)下列关于微生物培养和利用的叙述，正确的是A.接种前要了解固体培养基是否被污染无需接种无菌水来培育检测B.接种时连续划线的目的是将聚集的菌体逐步稀释获得单个菌落C.以尿素为唯一氮源且含刚果红的培养基可选择和鉴别尿素分解菌D.利用尿素固体培养基可迅速杀死其他微生物，而保留利用尿素的微生物123456789101113121234567891011检测培养基是否被污染，应将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培

46、养基上是否有菌落产生，A正确；平板划线法的原理是通过连续划线将聚集的菌体逐步稀释以获得单个菌落，B正确；以尿素为唯一氮源的培养基可选择尿素分解菌，用含酚红指示剂的培养基可鉴别尿素分解菌，C错误；利用尿素固体培养基可保留利用尿素的微生物，同时抑制或阻止其他微生物生长，而非杀死，D错误。131210.营养缺陷型菌株是野生型菌株经过人工诱变或自发突变失去合成某种成长因子的能力，只能在补充了相应的生长因子的基本培养基中才能正常生长的变异菌株。某研究小组对酵母菌用紫外线照射后将其接种到甲培养皿的培养基上，一段时间后将甲培养皿的菌落影印接种(不改变菌落位置)到乙、丙两培养皿的培养基中，进一步培养得到如图所

47、示结果。下列分析正确的是A.接种到甲培养皿采用的是稀释涂布平板法B.甲、丙两培养皿中的培养基是基本培养基C.甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少D.甲、乙、丙三个培养皿都可能存在营养缺陷型123456789101113121234567891011甲培养皿的菌落均匀分布，接种方法应为稀释涂布平板法，A正确；甲、丙培养基菌落数目多，包括野生型酵母菌菌株和某种营养缺陷型酵母菌菌株，乙培养皿没有生长的菌株是某种营养缺陷型酵母菌菌株，乙培养皿的培养基是基本培养基，甲和丙生长了同样的菌株，则甲和丙是加入了同种生长因子的培养基，B错误；13121234567891011由于基因突变具有不定向性，接种到

48、甲培养皿的酵母菌可能还有其他营养缺陷型，且有些菌落不一定由一个酵母菌形成，所以，甲培养皿中菌落数有可能比接种的酵母菌数少，C正确；乙培养皿的培养基是基本培养基，形成的菌落只可能是野生型菌落，D错误。131211.(2022扬州高三期末)某生物兴趣小组完成了“分离土壤中分解尿素的细菌并进行计数”的实验，具体操作流程如图所示。下列相关叙述正确的是A.在酒精灯火焰附近称取土壤并将其 倒入锥形瓶中B.梯度稀释时可用移液管或微量移液 器进行操作C.振荡的目的是为了增加尿素分解菌的浓度D.由图示菌落计数结果可知10克土样中的菌株数约为1.6107个123456789101113121234567891011酒精灯火焰附近存在一个无菌区，在酒精灯火焰附近称取土壤并将其倒入锥形瓶中，可以防止称取的土壤在倒入锥形瓶过程中，土样被污染，A正确；只用移液管，分度太低，而只用微量移液器，容量又太小，所以梯度稀释时可用移液管或微量移液器进行操作，B正确；13121234567891011振荡培养的目的是提高培养液的溶解氧的含量，使