实验三-医学微生物学-精品课程

1、.：.；实验三 物理要素、化学要素对细菌的影响和药物敏感实验目的要求1、掌握消毒、灭菌、防腐、无菌的概念。 2、熟习常用物理灭菌法的原理、方法及用途。 3、熟习化学消毒剂的根本原理、了解常用药物的作用机制。 物理要素对细菌的影响结合实物在消毒室中引见1.热力灭菌：1干热灭菌：干烤160170，2h、熄灭易燃、废弃物品、烧灼不易燃的物品，如取菌环、试管口、红外线：0.771000mm电磁波,110 mm效应最强。2湿热灭菌巴氏消毒法：61.162.8 30min；71.7 1530s，后一种方法最常用。煮沸法：100 5min可杀死普通细菌的繁衍体，水中参与2%碳酸氢钠，沸点可到达105。流通蒸

2、汽法：100，1530min，可杀灭细菌的繁衍体。高压蒸汽灭菌法：高压锅-在103.4kPa1.05kg/cm2、15磅/英寸2蒸汽压下，温度可达121.3，维持1520min，可杀灭芽孢在内的一切微生物。干热灭菌与湿热灭菌的比较：穿透性；湿热穿透性强。潜热；由气体转变为液体时释放热量。菌体蛋白在液体中经加热易变性。2.辐射杀菌法：1紫外线UV：200300nm100+380nm;265266nm杀菌作用最强;使一条链上相临的嘧啶构成二聚体。具有光复活作用，不能用紫外线制备灭活菌苗。紫外线穿透力差，只能用于空气和物体外表的杀菌。紫外线对人体皮肤、视网膜均有损伤。不能开着紫外线灯任务。 2电离辐

3、射：射线、X射线3微波：11000mm的电磁波3. 滤过除菌法：滤菌器filtration薄膜滤菌器0.25nm、玻璃滤菌器G1G6、石棉滤菌器K、EK、EKS型、Seitz滤菌器。适宜于不耐热的液体血清、细胞因子、抗生素、毒素等及气体的滤过。化学要素对细菌的影响常用消毒剂：酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、外表活性剂、烷化剂。作用机理：1、促进菌体蛋白量变性或凝固；2、干扰细菌的酶系统和代谢；3、损伤细菌的细胞膜1%龙胆紫、2.5%碘酒、75%乙醇、0.1%新洁尔灭红汞如今已取消。影响消毒剂灭菌效果的要素：1、消毒剂的性质、浓度与作用时间-乙醇例外，70%乙醇消毒效果最好；2、微生物的种类与数

4、量；3、温度；4、pH；5、有机物。消毒剂对人体毒性太大，只能外用，不能口服或注射。问题：消毒剂浓度越高杀菌效果越好？为什么？药物敏感实验资料1、菌种：大肠杆菌、葡萄球菌2、药敏纸片、接种环、镊子、酒精灯、培育箱等原理在已接种被测细菌的琼脂平板上，平贴含有一定量抗菌药物的药敏纸片，由于培育基中含大量的水分，所以抗菌药物很快溶解于培育基内，并向周围分散，药物在琼脂中的浓度随分开纸片的间隔 增大而降低，当低于MIC时细菌那么生长而构成抑菌环。在药物浓度恰高于该药物对该菌的最低抑菌浓度的琼脂中，该细菌的生长就遭到抑制，在药物浓度低于该药物对该菌的最低抑菌浓度的琼脂中，细菌可以生长。孵育后，在含药纸片

5、的周围构成透明的抑菌环，量取该抑菌环的直径，可测得该细菌对相应药物的敏感度。 培育基：水解酪蛋白琼脂M-H琼脂抑菌环的直径与最低抑菌浓度MIC呈负相关。方法：同延续划线接种法密集接种细菌改良的K-B法。用无菌镊子夹取药敏制片，分别贴于平板上，各药敏纸片之间的间隔 应根本相等，普通每个平板贴四个药敏纸片。37、培育24h后测定抑菌圈，作出结果断定。敏感程度判别规范：15mm-敏感非检验专业质量控制：培育基M-H琼脂、纸片性质与直径吸水纸、直径6mm、每张纸片吸水2l，抗生素含量青霉素10、红霉素15g、接种细菌的量相当于1/2 0.5麦氏比浊管浓度，即0.75108。琼脂厚度为4mm土lmm 平板直径？9cm。耐药敏感 定量实验有：试管稀释法、E-实验定性实验可指点临床医生运用什么药物，定量实验可指点临床医生该药物运用多少量，根据半衰期决议每天给几次药。实验成果：不做实验报告，根据药敏实验操结果给以实验成果划线7分、贴纸片2分、学号标