芪升合剂干预恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的实验分析和临床观察

1、1%肝素钠注射液：将2ml（12500个单位）肝素钠加入200ml生理盐水中充分混匀后，置于4c冰箱保存备用。15g/l的EDTA溶液:取EDTA粉末1.5g,加入100ml生理盐水中充分混匀，溶解，置于4c冰箱保存备用。4实验动物清洁级昆明种雄性小鼠60只，812周龄，体重1822g,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK（沪）2007-2005。小鼠在实验前适应性驯养3天，实验期间自由采食和饮水。5瘤株S180腹水小鼠，购于中国科学院上海细胞研究所。6药物芭升合剂水煎剂的制备：取芭升合剂（由黄茂、当归、升麻、虎杖等组成，上海瑞金医院中药房提供）饮片置煎煮容器内，加相当于药

2、材量58倍的冷水浸泡12h,煮沸30min,滤过；药渣加36倍量水继续煎煮，煮沸20min,滤过，合并两次煎出液，于水浴上浓缩至每1ml相当于药材量4g的药液，冷却装入灭菌药瓶，置于4c冰箱保存备用。二方法1S180荷瘤小鼠制备及分组用药将60只昆明小鼠随机分成6组，每组10只，分别为正常对照组，荷瘤对照组，CTX组，英升合剂高、中、低剂量+CTX组（即高剂量组、中剂量组、低剂量组）。在无菌条件下，抽取接种第7天生长良好的S180小鼠的腹水，腹水为乳白色浓稠液体，按1：3用生理盐水稀释，反复冲打，充分混匀，在显微镜下计数，用生理盐水调整细胞数为除正常对照组外，每只小鼠取0.2ml于左侧腋窝下乙

3、醇消毒后皮下接种。瘤株接种前，血细胞计数板上0.2%台盼蓝染色法计数证实活细胞数在95%以上DI。从抽取腹水时开始，到移植完最后1只小鼠的总时间控制在2小时内。接种后第1天，正常对照组、荷瘤对照组和CTX组给予生理盐水灌胃，0.2ml/只，1次/天，连续给药10天。高剂量组、中剂量组、低剂量组分别给予40、20,10g/kg.d（按生药量计算，分别为成人体质量用量的20、10、5倍）的黄升合剂汤剂灌胃，0.2ml/只，1次/天，连续10天。接种后第5天开始，除正常对照组和荷瘤对照组外，其余组均腹腔注射环磷酰胺80mg/kgd连续3天，化疗结束后次日小鼠尾尖采血检测血常规。实验第11天眼球采血后

4、处死小鼠，取瘤组织，检测各项指标。见图1-42外周血象测定实验第8天即小鼠连续化疗3天后次日，各组小鼠尾尖取血20g,加入浓度为15g/l的EDTA抗凝剂中充分混匀，用全自动血细胞分析仪分别计数外周血白细胞(WBC)数,红细胞(RBC)数、血红蛋白(HB)含量、血小板(PLT)数。实验第11天，各组小鼠眼球取血20此，使用上述同样的方法检测血常规。3体重、瘤重和抑瘤率实验第11天，将各组小鼠眼球采血后颈椎脱臼处死，称质量，用酒精消毒操作部位皮肤，完整剥取肿瘤组织，剥离干净后用电子天平称量瘤体重量，计算抑瘤率，荷瘤对照组平均瘤重lg以上可进行结果分析。抑瘤率=(荷瘤对照组平均瘤重-给药组平均瘤重

5、)/荷瘤对照组平均瘤重X100%9】。4T淋巴细胞亚群测定FACS直接免疫荧光染色法测定T淋巴细胞表型CD4、CD8+分子，每组随机取8只小鼠，每只眼球采血50微升，放入肝素抗凝管内，加入抗CD4+PE和CD8+FITC单抗各20微升，充分混匀，置4c避光30min,取出，加入红细胞裂解液裂解lOmin,离心，1500r/min,5min,弃上清，将细胞混匀,力口入2mlpBS再离心，1500r/min,5min,弃上清,加含1%多聚甲醛的PBS200微升，充分混匀,上机检测口叫5相关分析荷瘤小鼠外周血象与瘤重相关性分析。6统计分析检测结果以均数土标准差(xSD)表示，应用SPSS16.0统计

6、软件进行统计分析，多组间比较用单因素方差分析，组内两两比较用q检验，相关分析用Pearson,以P0.05为差异有统计学意义。图2腹水小鼠与正常小鼠比较图1S180腹水小鼠乳白色腹水接种实验小鼠结果-黄升合剂对S180荷瘤小鼠外周血象的影响1环磷酰胺(80mg/kg.d)化疗所致骨髓抑制小鼠的外周血象变化结果显示：实验第8天(化疗结束后次日)，CTX组、高剂量组、中剂量组和低剂量组荷瘤小鼠的WBC均明显降低，与正常对照组相比，差异有统计学意义(P0.01)。荷瘤对照组、CTX组、高剂量组、中剂量组、低剂量组的RBC和HB均明显降低，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P0.01)o各化疗组PL

7、T均有所下降，其中CTX组、低剂量组与正常对照组比较，差异有统计学意义(P0.01)o说明化疗所致骨髓抑制小鼠造模成功。见表1,图5-8表1环磷酰胺(80mg/kg.d)化疗所致骨髓抑制小鼠的外周血象(xSD,n=10)大组别WBCRBCHBplT8止用对照生9.101.907.950.69155.18.69497.8234.6荷瘤对照组9.251.976.700.95*124.817.76*516.1117.9CTX组2.060.51*6.101.14*112.921.19*307.0132.8*高剂量组2.210.62*6.020.96*103.510.97*404.5135.1中剂量组2

8、.030.19*6.070.83*103.59.56*372.0169.9低剂量组2.230.44*5.770.93*101.715.36*312.0114.6*注：与正常对照组比，*P0.01第8天WBC计数12(T/62&10正常对照组荷瘤对照组CTX组高剂量组中剂量组低剂量组注：与正常对照组比，*P0.01图5环磷酰胺(80mg/kg.d)所致骨髓抑制小鼠WBC的比较第8天RBC计数(T/e-or)正常对照组荷瘤对照组 CTX组高剂量组中剂量组 低剂量组098765432101X注：与正常对照组比，* P0.01图6环磷酰胺(80mg/kg.d)所致骨髓抑制小鼠RBC的比较第8天HB计注

9、：与正常对照组比，* P0.01o o o o o8 6 4 2 01 1 1 1 1图7环磷酰胺(80mg/kg.d)所致骨髓抑制小鼠HB的比较(Iror)编七塞 七自注：与正常对照组比，*P0.01图8环磷酰胺(80mg/kg.d)所致骨髓抑制小鼠PLT的比较2黄升合剂对S180荷瘤小鼠白细胞(WBC)的影响结果显示：实验第8天，CTX组、高剂量组、中剂量组和低剂量组荷瘤小鼠的WBC均明显降低，与正常对照组相比，差异有统计学意义(P0.05),而CTX组差异有统计学意义(P0.01)；与CTX组比较，高剂量组、中剂量组和低剂量组WBC上升明显，差异有统计学意义(P0.05)o实验第8、11

10、天，荷瘤对照组WBC均较正常对照组偏高，可能与动物荷瘤所致炎性反应有关。黄升合剂各组WBC较CTX组明显上升，且趋于正常，说明芭升合剂能升高荷瘤小鼠化疗所致的WBC减少，加快骨髓造血功能的恢复。见表2,图9表2英升合剂对S180荷瘤小鼠WBC的影响（xSD,n=10）组别动物数第8天WBC第11天WBC正常对照组109.101.908.602.02荷瘤对照组109.251.978.621.56CTX组102.060.51*3.800.51*高剂量组102.210.62*6.541.16aa中剂量组102.030.19*6.730.61aa低剂量组102.230.44*6.151.02aa注：与

11、正常对照组比，*P0.01；与CTX组比，AAP0.01注：与正常对照组比，*P0.01；与CTX组比，P0.01图9芭升合剂对S180荷瘤小鼠WBC的影响3黄升合剂对S180荷瘤小鼠红细胞（RBC）的影响结果显示：实验第8天，各荷瘤组RBC计数明显下降，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）；各化疗组之间比较差异无统计学意义（P0.05）。实验第11天，各化疗组RBC均未见明显恢复，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P0.01）；荷瘤对照组RBC较第8天下降明显，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）。提示荷瘤小鼠RBC降低可能与非化疗相关的肿瘤相关性贫血有关，并不一定

12、由化疗所致，与Weiss等【川研究结果相似。见表3,图10表3茂升合剂对S180荷瘤小鼠RBC的影响(7SD,n=10)组别动物数第8天RBC第11天RBC正常对照组107.950.697.950.97荷瘤对照组106.700.95*5.990.84*CTX组106.10i1.14*6.200.75*高剂量组106.020.96*6.080.79*中剂量组106.070.83*6.380.76*低剂量组105.770.93*6.110.96*注：与正常对照组比，*P0.01注：与正常对照组比，*P0.01图10芭升合剂对S180荷瘤小鼠RBC的影响4黄升合剂对S180荷瘤小鼠血红蛋白(HB)的

13、影响结果显示，实验第8天，各荷瘤组HB下降明显，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P0.05)；各化疗组之间HB比较差异无统计学意义(P0.05)。实验第11天，各化疗组HB均未见明显恢复，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P0.01）;且荷瘤对照组HB较第8天下降明显，与正常对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）。提示荷瘤小鼠HB降低可能与非化疗相关的肿瘤相关性贫血有关，并不一定由化疗所致。见表4,图11表4匹升合剂对S180荷瘤小鼠HB的影响（xSD,n=10）组别动物数第8天HB第11天HB正常对照组10155.18.69142.617.95荷瘤对照组10124.817.76*1

14、03.213.46*CTX组10112.921.19*113.017.93*高剂量组10103.510.97*108.513.91*中剂量组10103.59.56*110.914.62*低剂量组10101.715.36*109.819.08*注：与正常对照组比，*P0.01注：与正常对照组比，*P0.01图11黄升合剂对S180荷瘤小鼠HB的影响5黄升合剂对S180荷瘤小鼠血小板（PLT）的影响结果显示：实验第8天，各化疗组PLT均有所下降，其中CTX组、低剂量组与正常对照组比较，差异有统计学意义（P0.05）o实验第11天，各化疗组PLT明显上升，与正常对照组比较，差异无统计学意义（P0.0

15、5）；各化疗组PLT比较差异无统计学意义（P0.05）；荷瘤对照组PLT显著上升，与其余5组比较，差异有统计学意义（P0.01）,表明荷瘤小鼠有“瘀积”之征，可能与血小板聚集，血液处于高凝状态有关。见表5,图12表5甚升合剂对S180荷瘤小鼠PLT的影响（7+SD,n=10）组别动物数第8天PLT第11天PLT正常对照组10497.8234.6547.7160.6荷瘤对照组10516.1117.9911.9195.6*CTX组10307.0132.8*578.5122.7#高剂量组10404.5135.1618.4176.8#中剂量组10372.0169.9618.H182.3#低剂量组103

16、12.0114.6*631.5122.8#注：与正常对照组比，*P0.01：与荷瘤对照组比较，#P0.01注：与正常对照组比，*P0.01；与荷瘤对照组比较，#P0.05）。实验结束时，各组小鼠体重（荷瘤小鼠去肉瘤后）均有增加；其中CTX组小鼠体重增加最少，与正常对照组相比，差异有统计学意义（P0.05）；与CTX组比较，高、中、低剂量组体重虽较高，但差异无统计学意义（P0.05）。说明化疗会降低荷瘤小鼠的体重，而芭升合剂对荷瘤小鼠化疗后体重的增加具有干预作用。见表6,图13表6茂升合剂对S180荷瘤小鼠体重的影响（7+SD,n=10）组别动物数实验前实验后（去肉瘤）止常对照组1020.971

17、.1628.611.34荷瘤对照组1020.470.7428.463.80CTX组1021.150.8925.852.67*高剂量组1020.411.2427.142.26中剂量组1020.381.2726.182.79低剂量组1021.190.7026.32+3.06注：与正常对照组比，*P0.05体重正常对照组荷瘤对照组CTX组高剂量组中剂量组低剂量组实验前实验后注：与正常对照组比，*Plg,说明肿瘤模型移植成功。与荷瘤对照组相比，CTX组、高剂量组、中剂量组和低剂量组小鼠瘤重明显减少，差异有统计学意义(P0.05)；与CTX组瘤重相比，中剂量组差异有统计学意义(P0.05)oCTX对荷瘤

18、小鼠肿瘤生长有明显抑制作用，其抑瘤率达49.69%,联合黄升合剂后，高剂量组、中剂量组和低剂量抑瘤率可达60.55%,72.11%,64.48%,其中以中剂量组(20g/kg.d)的抑瘤作用最为突出。说明CTX能明显抑制荷瘤小鼠肿瘤生长，联合茂升合剂后其抑瘤效果更佳。见表7,图14表7注升合剂对S180肉瘤生长抑制情况(7SD,n=10)组别动物数瘤重抑瘤率正常对照组10/荷瘤对照组103.440.86/CTX组101.730.47#49.69%高剂量组101.350.97#60.55%中剂量组100.960.57#A72.11%低剂量组101.221.12#64.48%注：与荷瘤对照组比，#

19、P0.01；与CTX组比，PV0.05注：与荷瘤对照组比，#P0.01；与CTX组比，P0.05)。荷瘤对照组、CTX组CD8+细胞表达明显降低，与正常对照组相比，差异有统计学意义(P0.01)；与CTX组比较，高、中、低剂量组CD8+细胞表达均增加，尤以中、低剂量组明显，差异有统计学意义(P0.05)；与正常对照组比较，高、中、低剂量组CD8+细胞表达虽偏低，但差异无统计学意义(P0.05)。荷瘤对照组、CTX组CD4+/CD8+比值明显升高，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P0.05)；与CTX组比较，中剂量组CD4+/CD8+比值明显偏低，差异有统计学意义(P0.05)o说明芭升合剂

20、可以逆转S180荷瘤小鼠CD4+/CD8+比值异常增高的状况，使T淋巴细胞亚群趋于正常，调节荷瘤小鼠的免疫功能。见表8,图15-22表8黄升合剂对荷瘤小鼠T淋巴细胞亚群的影响(7SD,n=8)组别动物数CD4+%CD8+%CD4+/CD8+正常对照组1040.788.8117.281.642.360.47荷瘤对照组1031.15+5.4810.08+2.50*3.220.76*CTX组1033.82+8.2910.652.02*3.21+0.74*高剂量组1040.9812.6113.283.283.070.58中剂量组1042.078.0916.88土3.56a2.530.46A低剂量组10

21、41.80+17.9215.21+5.06A2.71+0.81注：与正常对照组比，*P0.05,*P0.01；与CTX组比较，PcO.OS免疫指标CD4+BCD8+706050403020100注：与正常对照组比，*P0.01；与CTX组比较，PO.OS图15免疫指标CD4+和CD8+的表达免疫指标注：与正常对照组比，*P0.05；与CTX组比较，AP0.05图16免疫指标CD4+/CD8+比值54535251504.3.ZL6+83AW3QuXEventsUL31384358UR330U.29454090LR10851507GtEvents3”G172012216C0SFITCA2QuadE

22、vMSUI39014840UR*053U.23533450LR11)01637Get，EwitfMGetG16820507Fig17DistributionCD4-andCD8*TlymphoclesinnormalcontrolgroupOwedEwtuUL21622850UR34OCU4775axLR6168.12GaftEvents%GMG175874916QuMEwitsUL21222S18UR38050U49306547LR4.1(1584E中心G12362Fig18DistributionCD4*andCD8*TlymphocylesinS180controlgroupYOH006

23、QuadEwxs%G1WUL267234.17UR650.3U.43345543LR748957Gait%JRG178191615YOH024CDSFITCCQuadEwnts%JEUL“23UR15027LL34166110LR冰941Gtf.Events%JEQI559111SIFig19DistributionCD4*andCD8*TlymphocytesinCTXgroupQuadEw*s%GttEUL40194747UR194217U.32433S31LR10201233.EwS%G186406QuadEwxs%UEUL33314431UR21028LL3327“为LR8381115

24、-G17517Fig20DistributionCD4-andCD8Tlymphocytesinhighdosegroup.QudEvents%GttdSOI_506UR13026U.173135.06LRW2HQ2EwMS3GM“UL531S218UR210241128743310LR125814”GateEw(s%GatedG186841506GtfEvents%Gtftd35575Tw血小板计数与瘤重的关系瘤重（g）.系列1一线性（系列1）y = 88.17x +230.9 r =0.701(601*)Fig22DistributionCD4-andCD8-Tlymphocytesinl

25、owdosegroups五血小板与瘤重相关分析经Pearson相关分析法，荷瘤小鼠血小板计数与瘤重的相关系数r=0.701,P80X109/Lo无明显肝肾功能异常者。3排除标准年龄在18岁以下或75岁以上，妊娠或哺乳期妇女，过敏体质或对本研究药物过敏者。不符合纳入标准，未按规定用药，无法判断疗效，或资料不全等影响疗效或安全性判断者。治疗前合并有心血管、脑血管、肝、肾和造血系统等严重原发性疾病，精神病患者，或有严重肝肾功能损害者。治疗期间使用除粒细胞集落刺激因子以外的其他升白细胞药物者。4目标病例入组患者均为2008年9月至2011年2月上海交通大学医学院附属瑞金医院中医科病区、外科八病区及门诊

26、经肠镜病理学检查或术后病理确诊为结、直肠癌。选择符合诊断标准及入组标准的患者60例，按随机原则分为2组：英升合剂联合化疗组（治疗组）30例，单纯化疗组（对照组）30例。两组患者在病种、性别、年龄、体重、治疗前KPS评分和肿瘤分级分期等方面差异无统计学意义（P0.05）,具有可比性。见表10-11表10两组患者治疗前一般资料统计表（xSD,n=30）组别病种（例）性别（例）年龄体重KPS结肠癌直肠癌男女对照组219151557.5010.6160.607.6180.678.68治疗组228161458.278.9861.079.5381.308.60两组比X2=0,082*0.067t=-0.3

27、02t=-0.210t=-0.299较结果P0.05P0.05P0.05P0.05P0.05表11两组患者肿瘤分级分期统计表组别II期III期IV期卡方检验对照组61410X2=0,139P0.05治疗组51411研究方法1西医化疗方案以草酸伯（L-OHP）联合氟尿喀咤（5-Fu）和亚叶酸钙（LV）或草酸伯（L-OHP）联合卡培他滨（C叩eOX）为基础的化疗方案：FOLFOX4或XELOX方案。化疗疗程以6次为标准。FOLFOX4方案：L-OHP85mg/m2静脉滴注2小时静脉滴注2小时第1天第1、2天LV200mg/m?5-Fu400mg/m2静脉推注第1、2天每2周重复5-Fu600mg/

28、m2静脉输注22小时第1、2天XELOX方案：L-OHP130mg/n?静脉滴注2小时第1天CapeOX850-1000mg/m2,口服,每日2次，持续14天每3周重复2中药治疗方案茂升合剂的组成：由黄茂、当归、升麻、虎杖等5味中药组成。中药煎煮方法：所有实验所需中药由瑞金中药房统一代煎，统一分装成袋，每袋含芭升合剂煎液约为150ml。给药方法：治疗组每次化疗（用法用量参照1西医化疗方案）结束后给予口服中药汤剂-芭升合剂，每人每日2袋，早晚各一袋，化疗期间停服，与化疗同步，共6个疗程。对照组只进行化疗（用法用量参照1西医化疗方案），不予苗升合剂，共化疗6次。三观察项目及评分标准1粒细胞集落刺激

29、因子（G-CSF）的用量观察两组患者出现骨髓抑制后使用G-CSF的总量及均量。每疗程化疗前和第6次化疗后复查时常规采血1次，若血常规3.0X103LW白细胞计数4.0X109/L,予粒细胞集落刺激因子（国产瑞白针）100ug,IH,QDXld,按时行该疗程化疗。若化疗前血常规白细胞计数（3.0X103L,予粒细胞集落刺激因子（国产瑞白针）100ug,IH,QDX2d,2天后复查血象，白细胞计数仍11095-10980-8465-794.03.0-3.92.0-2.91.0-1.92.01.5-1.91.0-1.40.5-0.910075-7950-7425-4925出血无瘀点轻度失血明显失血严

30、重失血2生活质量评定标准KPS疗效评定提高：治疗后较治疗中评分增加80分稳定：治疗后较治疗中评分增加或减少不到10分下降：治疗后较治疗中评分减少210分体重疗效评定增加：治疗后体重较治疗中增加RKg稳定：治疗后体重较治疗中增减不足IKg下降：治疗后体重较治疗中减少NlKg3中医临床症候疗效评定显效：治疗后积分值比治疗中积分值下降之70%有效：治疗后积分值比治疗中积分值下降N30%无效：治疗后积分值较治疗中积分值上升、无变化或下降分值30%总有效率=（显效例数+有效例数）/总例数X100%五统计学方法采用SPSS16.0软件进行数据处理和分析，结果以均数土标准差（xSD）表示，计量资料治疗前后比

31、较用自身配对t检验，两组间比较采用独立样本t检验，分类变量资料采用为2检验等，等级资料采用秩和检验，以P0.05为差异有统计学意义。结果-黄升合剂对化疗患者G-CSF用量及外周血象的影响1黄升合剂对粒细胞集落刺激因子（G-CSF）用量的影响结果显示：对照组治疗过程中使用G-CSF平均用量明显大于治疗组，经两独立样本t检验，差异有统计学意义（P0.05）o说明芭升合剂可以降低化疗所致白细胞下降的程度，从而减少G-CSF的使用剂量。见表16,图24表16两组G-CSF平均用量及总量比较（xSD,n=30）组别例数G-LSF平均用量G-CSF总量t值P值对照组3042/331368.692.21PV

32、T.U。治疗组30236.67291.82*7100注：与对照组比较，*P0.05注：与对照组比较，*P0.05）,具有可比性。治疗中（第4次化疗前），白细胞分度0、I、II、III、IV对照组为14、5、9、2、0,治疗组为25、4、1、0、0,两组白细胞分度经犬检验，差异有统计学意义（P0.05）。说明治疗过程中黄升合剂能减少白细胞的分度，即减少白细胞的降低，促进骨髓造血功能的恢复。见表17,图25-27对照组治疗前WBC分度治疗组治疗前WBC分度I度93%0度|1度87%表17WBC减少分度统计（单位：次）0IIIIIIIVX2检验治疗前对照组282000*0.741治疗组264000P

33、0.05治疗中对照组145920X-H-61治疗组254100P0.05图25两组WBC分度治疗前比较甲WBC0度I度.11度III度治疗组治疗中WBC分度图26两组WBC分度治疗中比较II III度 度10%0%0图27两组WBC分度治疗后比较匹升合剂对化疗患者WBC计数的影响结果显示：第1次化疗前两组白细胞计数经两独立样本t检验，差异无统计学意义(P0.05),具有可比性。两组白细胞计数均自第2次化疗前出现明显减少，其中对照组第2、3、4、5、6次化疗前及第6次化疗后复查时(第7次)白细胞计数较该组第1次化疗前白细胞计数明显减少，经自身配对t检验，差异有统计学意义（P0.01）；治疗组第2

34、、3、4、5、6次化疗前及第6次化疗后复查时白细胞计数较该组第1次化疗前白细胞计数明显降低，经自身配对t检验，差异有统计学意义（P0.01）o对照组自第2次化疗前起白细胞计数开始低于同期治疗组，两独立样本t检验结果显示，对照组第3、5、7次白细胞计数明显低于同期治疗组，差异有统计学意义（P0.05）,第4次白细胞计数降低最为明显，与同期治疗组比较，差异有统计学意义（P0.05）o说明化疗会导致白细胞减少，抑制骨髓造血功能，而黄升合剂能干预化疗对骨髓造血功能的抑制，恢复骨髓造血功能。见表18-19,图28-30表18两组患者WBC计数比较(7sd,n=30)组别第1次第2次第3次第4次对照组6.

35、472.014.741.37*4.261.35*4.051.28*治疗组6.331.815.361.43*5.181.41*#5.211.13*梆两组tt=0.269t=-1.712t=-2.584t=-3.747检验P0.05P0.05P0.05P0.01注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.01：与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05.#P0.05P0.05P0.05注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.01：与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05WBC119 8 7 6 5 4 3 2 1 0部七。8M对照组治疗组注：治

36、疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.01；与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05,#P0.01图28两组WBC计数第1、2、3、4次比较9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 照44O8M对照组治疗组注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.01；与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05图29两组WBC计数第1、5、6、7次比较10q白细胞计数变化0-1第1次第2次第3次第4次第5次第6次第7次注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.01；与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05,#P0.05）,具有可比性

37、。第4次化疗前两组患者RBC均比第1次化疗前减少，经自身配对t检验，差异无统计学意义（P0.05）；第7次两组RBC均较第1次化疗前明显减少，经自身配对t检验，对照组差异有统计学意义（P0.01）,治疗组差异有统计学意义（P0.05）。见表20,图31表20两组患者RBC计数比较（xSD,n=30）组别第1次第4次第7次对照组4.110.543.960.613.800.68*治疗组4.280.963.970.623.770.59*注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.05,P0.01RBC计数543210对照组治疗组注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），

38、*P0.05, *P0.05）,具有可比性。第4次化疗前两组患者HB均比第1次化疗前稍偏低，经自身配对t检验，差异无统计学意义（P0.05）；第7次两组HB均较第1次化疗前明显减少，经自身配对t检验，差异有统计学意义（P0.05）o见表21,图32表21两组患者HB计数比较（xSD,n=30）组别第1次第4次第7次对照组116.8019.37116.2715.91107.8315.64*治疗组117.1717.63115.8314.33107.0712.33*注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.01HB计注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.0

39、5）,具有可比性。第4次化疗前两组患者PLT均比第1次化疗前明显减少，经自身配对t检验，差异有统计学意义（P0.01）。第7次两组PLT均较第1次化疗前明显减少，经自身配对t检验，差异有统计学意义（P0.05见表22,图33表22两组患者PLT计数比较（7SD,n=30）组别第1次第4次第7次对照组216.7344.31165.8066.25*144.6359.10*治疗组211.2056.41154.4753.83*142.4754.98*注：治疗前后自身配对t检验（均与第1次数据进行比较），*P0.01300PLT计数注：治疗前后自身配对t检验(均与第1次数据进行比较)，*P0.05),具

40、有可比性。两组治疗后KPS评分均较治疗前提高，经自身配对t检验，治疗组差异有统计学意义(P0.05)。治疗后治疗组KPS评分明显高于对照组，经两独立样本t检验，差异有统计学意义(P0.05治疗组3081.338.1985.335.71*#4.370.802.262P0.05注：两组治疗前后配对t检验，*P0.05；与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05),治疗后两组t值为-2.193,P值为0.032(P0.05)KPS W注：两组治疗前后配对t检验，*P0.05；与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05)o见表24,图35表24两组患者KPS评分疗效比较n(%)对照组KPS

41、评分疗效提高卜降23%下降稳定 40%治疗组KPS评分疗效下降17%提高40%稳定43%组别例数提高稳定下降卡方检验对照组307(23.3%)12(40.0%)11(36.7%)*7.73治疗组3012(40.0%)13(43.3%)5(16.7%)P0.052黄升合剂对化疗患者体重的影响体重的比较结果显示：两组体重经独立样本t检验，差异无统计学意义(P0.05),具有可比性。对照组经治疗后体重较治疗前明显减轻，经自身配对t检验，差异有统计学意义(P0.01)；治疗组经治疗后体重较治疗前明显增加，经自身配对t检验，差异有统计学意义(P0.01);两组治疗后，治疗组体重明显高于对照组，经两独立样

42、本t检验，差异有统计学意义(P0.05)。说明黄升合剂能减轻化疗对患者机体造成的损害。见表25,图36表25两组体重比较(xSD,n=30)组别例数体重自身配对t检验治疗前治疗后差值t值P值对照组3060.607.6158.907.20*1.702.742.294P0.01治疗组3061.079.5763.838.80*#4.370.80-3.469P0.01注：两组治疗前后配对t检验，*po.oi；与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P0.05),治疗后两组t值为-2.375,P值为0.02(P0.05)体重注：两组治疗前后配对t检验，*P0.01；与对照组比较，治疗后独立样本t检验，#P

43、0.05图36两组体重治疗前后比较两组体重疗效的比较结果显示：对照组患者体重提高3例、稳定5例、下降22例，治疗组患者体重提高20例、稳定4例、下降6例。两组患者体重疗效经/检验，差异有统计学意义(P0.01)。说明黄升合剂能减轻化疗对患者机体造成的损害。见表26,图37表26两组体重疗效的比较n(%)组别例数提高稳定下降卡方检验对照组303(10.0%)5(16.7%)22(73.3%)-=21.819治疗组3020(66.7%)4(13.3%)6(20.0%)P0.05),具有可比性。治疗中，两组中医症候平均积分均比治疗前增加，经自身配对t检验，差异均有统计学意义(P0.05)。治疗后，治

44、疗组中医症候平均积分恢复治疗前水平，经自身配对t检验，差异无统计学意义(P0.05)；而对照组中医症候平均积分仍明显高于治疗前，经自身配对t检验，差异有统计学意义(P0.05),治疗组差异有统计学意义(P0.01)；治疗后两组比较，治疗组中医症候平均积分较对照组明显偏低，经两独立样本t检验，差异有统计学意义(P0.01)o说明芭升合剂能减轻化疗的毒副反应，改善患者中医临床症状。见表27,图38表27两组患者中医症候平均积分比较(xSD,n=30)组别例数中医症候平均积分治疗前治疗中治疗后对照组301.300.862.910.71*2.590.58治疗组301.280.772.250.63*1.

45、500.31#注：治疗前、中配对t检验，*P0.01；治疗中、后配对t检验，P0.01；治疗前、后配对t检验，P0.01；两组间t检验，#P0.01注：治疗前、中配对t检验，*P0.01：治疗中、后配对t检验，治疗前、后配对t检验，两组间t检验，#P0.05),具有可比性。治疗中，两组各症候积分均较治疗前有不同程度的上升，对照组各症候积分均大于治疗组，其中以乏力、咽痛最为明显，经两独立样本t检验，差异有统计学意义(P0.05)；治疗中对照组乏力、易感冒、糜、咽痛、纳差、呕吐、腹泻症状积分均较治疗前明显上升，经自身配对t检验，差异有统计学意义(P0.01)；治疗中治疗组口糜、纳差、呕吐症状积分较

46、治疗前明显升高，经自身配对t检验，差异有统计学意义(P0.01)o治疗后对照组乏力和口糜较治疗中明显降低(P0.05),而治疗组各症候积分均较治疗中均有不同程度的下降，其中乏力、口糜、呕吐、腹泻下降明显(P0.05)；治疗后对照组易感冒、口糜、纳差、腹泻症候积分较治疗前明显升高(P0.05),而治疗组乏力和呕吐较治疗前明显下降(P0.05)；治疗后治疗组乏力、易感冒、咽痛、呕吐、腹泻症候积分较对照组明显降低，经两独立样本t检验，差异有统计学意义(P0.05)o说明黄升合剂能减轻化疗所致的副反应，改善患者临床症状，尤其是对改善乏力、易感冒、咽痛、呕吐、腹泻作用明显。见表28表28两组患者各中医症

47、候积分比较(xSD,n=30)症状分组治疗前治疗中治疗后乏力对照组3.302.134.401.71*3.501.59aa治疗组3.102.013.301.44#1.901.67aa#易感冒对照组1.401.522.901.85*3.001.57翁治疗组1.201.862.001.641.601.71#口糜对照组0.701.293.101.84*2.101.78a治疗组0.801.562.301.70*1.301.70a咽痛对照组0.901.602.701.82*2.902.2国+治疗组0.801.341.501.89#1.201.49#面色对照组1.402.041.902.151.801.69

48、治疗组1.301.871.502.051.201.69纳差对照组0.901.612.602.32*2.102.25治疗组1.001.642.402.14*1.802.17呕吐对照组0.601.223.102.29*2.902.00一治疗组0.701.292.902.15*1.801.69aa#腹泻对照组1.201.692.602.19*2.42.14仝治疗组1.301.702.102.241.201.49a#注：治疗前、中配对t检验，*P0.05,*P0.01；治疗中、后配对t检验，P0.05,P0.01；治疗前、后配对t检验，P0.05,P0.01；两组间t检验，#P0.05,#P0.013

49、两组中医症候疗效两组患者中医症候疗效比较，治疗组总有效率为83.3%,大于对照组53.3%,经秩和检验，差异有统计学意义(P0.01)o说明治疗组改善中医症候的疗效优于对照组。见表29,图39表29两组患者中医症候疗效比较n(%)对照组中医症候疗效治疗组中医症候疗效组别例数显效有效无效总有效率秩和检验对照组301(3.3%)15(50%)14(46.7%)53.3%H=6.939治疗组304(13.3%)21(70%)5(16.7%)83.3%P0.05),具有可比性。治疗后两组患者CEA测值均较治疗前下降，经自身配对t检验，治疗组差异有统计学意义(P0.05)o治疗后治疗组CEA测值较对照组

50、低，经两独立样本t检验，差异无统计学意义(P0.05)o说明化疗可以降低CEA测值，芭升合剂具有一定的协同作用。见表30,图40表30两组治疗前后CEA检测值(7SD,n=30)组别例数CEA自身配对t检验治疗前治疗后t值P值对照组308.1710.545.096.991.617P0.05治疗组308.0810.243.652.69*2.789P0.01注：两组治疗前后配对t检验，*P0.05),治疗后两组t值为L015,P值为0.297(P0.05)注：两组治疗前后配对t检验，*P0.05),具有可比性。治疗后两组患者CA199测值均较治疗前下降,经自身配对t检验，治疗组差异有统计学意义(P

51、0.05)o治疗后治疗组CA199测值较对照组低，经两独立样本t检验，差异无统计学意义(P0.05)。说明化疗可以降低CA199测值，苗升合剂具有一定的协同作用。见表31,图41表31两组治疗前后CA199检测值(xSD,n=30)组别例数CA199自身配对t检验治疗前治疗后t值P值对照组3015.0917.7110.287.481.71P0.05治疗组3014.9911.127.905.79*2.967P0.01注：两组治疗前后配对t检验，*P0.05),治疗后两组t值为1.379,P值为0.173(P0.05)注：两组治疗前后配对t检验，*P0.01图41两组CA199测值治疗前后比较五黄

52、升合剂的安全性评价观察期间对照组有4例发生血谷丙转氨酶(ALT)和(或)谷草转氨酶(AST)升高，3例血肌肝(Cr)升高病例，治疗组有1例发生血ALT升高，无肾脏损害；由于以上患者均是轻度肝肾功能损害，且使用保肝或护肾药后，肝、肾功能均转正常，所以未在观察中剔除这些病例。说明在治疗过程中没有发生与使用芭升合剂有关的肝肾功能损害，该方是安全低毒的中药小复方制剂。讨论一中西医对恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的认识1现代医学对化疗所致骨髓抑制机制的认识化疗是治疗恶性肿瘤的重要手段之一，抗肿瘤药物在杀灭肿瘤细胞的同时，对人体正常细胞也有损害或毒性作用，尤其是损伤骨髓细胞造血功能。正常情况下，骨髓内细胞的增殖

53、、成熟和释放与外周血液中粒细胞的衰老死亡、破坏和排出呈相对恒定状态。某些肿瘤在其治疗过程中破坏了这种平衡，即出现白细胞减少甚至全血细胞减少。国外研究Chklovskaia等的发现化疗后病人外周血和骨髓有核细胞中Flt3配体急剧增力口，并随着造血功能的恢复而逐渐下降，与造血祖细胞的增生能力和数量成负相关性。因此，Flt3配体表达活跃可能是化疗引起骨髓抑制的机制之一。国内研究国内大多学者认为骨髓抑制大概分为急性骨髓抑制和持久性骨髓损伤，急性骨髓抑制在接受大剂量放疗或化疗后很快发生，主要是快速增殖的造血祖细胞(HPCs)发生凋亡所致；持久性骨髓损伤主要是因为造血干细胞(HSC)衰老所致，常是迟发性的

54、，在临床容易被忽视，而且缺乏有效的治疗手段。因此造血干细胞损伤机制的研究成为有效预防和治疗骨髓持久性抑制的关键。HSC具有自我更新功能和生成多个系列免疫造血细胞的多分化功能，终生维持机体造血。化疗造成HSC的DNA损伤可以导致HSC复制和自我更新能力下降，出现细胞衰老改变。介导细胞衰老发生主要有2条信号通路：一是p53-p21通路，由DNA损伤或端粒缩短激发；一是pl6-Rb通路，主要由p38MAPK级联反应激活。任一通路激活均可诱导衰老，两条通路在不同水平具有通话。介导放疗、化疗诱导HSC衰老的信号通路各有特点，但最终引起pl6升高，细胞进入不可逆功能减退。HSC发生衰老机制的研究将对降低化

55、疗毒副作用，防止辐射等环境因素的损伤提供有价值的科研资料，为药物筛选的靶点提供实验依据。都丽萍等【网认为化疗药物通过抑制巨核细胞生成或对巨核细胞产生直接毒性作用引发不良反应，大剂量应用可降低造血干细胞数量，引发造血障碍，骨髓进入抑制状态，甚至终生无法恢复，造成临床治疗的失败。因此，对化疗引起骨髓抑制机制研究的透彻与否直接影响临床用药的选择，从而影响骨髓抑制的治疗、预后及临床症状的缓解。2恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的临床表现临床上绝大多数抗肿瘤药物均可引起程度不同的骨髓抑制，表现为白细胞、血小板、红细胞和血红蛋白减少，主要是白细胞减少，尤其是粒细胞减少最为显著。三系细胞的抑制程度也决定于其生命半衰

56、期的长短，由短到长依次是：白细胞6小时，血小板5-7天，红细胞120天口刃。1白细胞减少的临床表现白细胞是机体防御系统的一个重要组成部分。它通过吞噬和产生抗体等方式来抵御和消灭入侵的病原微生物。当白细胞减少时，患者以乏力、头晕为主，常伴有食欲减退、四肢酸软、失眠多梦、低热心悸、畏寒酸软等症状；白细胞总数明显减少，甚至发展为粒细胞缺乏症时，临床以突然发病、畏寒高热、咽痛为主。2.2血小板减少的临床表现血小板的功能主要是促进止血和加速凝血，同时还能维护毛细血管壁的完整性。血小板减少的主要症状是皮肤、粘膜出血，严重者可有其他部位出血如鼻出血、牙龈渗血、妇女月经量过多或吐血、咯血、便血、尿血等症状，甚

57、至并发颅内出血。3血红蛋白减少的临床表现血红蛋白能运输氧气和维持机体的酸碱平衡。当血红蛋白减少时，会出现疲乏、头晕、面色苍白、耳鸣、下肢无力、呼吸短促、胸痛等症状。同时，动物实验表明皮下注射CTX加甲苯吸入染毒第4天开始，昆明种小鼠即出现动作迟钝，毛发蓬松脱落，耳廓及鼠尾苍白，背部及舐尾部皮肤出血感染等类似恶性肿瘤化疗后骨髓抑制表现，小鼠三系细胞均有明显下降12叫3中医古籍对骨髓抑制病名的认识骨髓抑制的研究，一般以1946年Gilman和Philips发表氮芥用于治疗淋巴瘤，即烷化剂的临床应用为开端，所以中医古籍并无骨髓抑制病名，但根据化疗后所表现的症状如头晕、头痛乏力、腰膝酸软，恶心呕吐、纳

58、差，或梦多、易醒，易外感发热及出血等，大多将其归为中医的“血虚”、“虚劳”等范畴叫储真真等m认为可将化疗后骨髓抑制归属于“虚劳”、“血证”、“外感发热”或“内伤发热”等病证门类。4中医学对化疗所致骨髓抑制病因病机的认识樊小平等22认为根据化疗造成白细胞减少的临床表现属中医“虚劳”、“血虚”范畴，中医学认为血液的化生主要与脾胃和肾、肝有密切关系。中焦受气取汁，变化而赤，是谓血”，故脾胃是气血生化之源。“肾主骨、生髓”、“肾藏精，血为精所化”、“肝藏血”、“肝肾同源”，精髓可以化生为血，精血互生。这一点同现代医学对血细胞生成的认识也有异曲同工之处。李轶群等即认为，肿瘤患者化疗后出现白细胞减少主要系

59、化疗药物造成机体脾胃失调、肝肾受损及气血两伤所致。主要表现为脾肾亏虚，“肾为先天之本，主骨生髓”、“脾为后天之本，气血生化之源”。脾气虚则气血生化无源，肾虚则精不化血，骨髓生血无权，临床表现为白细胞减少，并伴有神疲倦怠、头晕乏力、纳差等症候，属中医血虚-虚劳范畴。恶性肿瘤化疗后出现白细胞减少，主要为化疗药物造成脾胃功能失调、肝肾受损。“肾主骨、生髓”，“肾藏精”，精血同源，脾为气血生化之源，能滋养先天之肾精，为后天之本，故补脾补肾则先后天之精充实，气血生化不竭24。化疗所致骨髓抑制的病因病机复杂，归纳起来主要有：化疗药物作为邪毒可侵害机体，导致脏腑、气血损伤，尤以肾精受损、脾胃功能失调最为严重

60、。化疗后出现的白细胞减少现象以气血虚弱为主要病机和临床证候。化疗之所以能够损伤机体，应责于正气虚弱，以脾肾虚弱最为关键。化疗后白细胞减少症与心、肝、脾、肾之阳气精血不足相关。脾肾是化疗后骨髓抑制最重要的虚损器官，并由此衍生多种病理变化。药毒可伤及阴血，影响脏腑功能，从而变生多症即。二中西医治疗恶性肿瘤化疗所致骨髓抑制的特点1现代医学治疗骨髓抑制的现状造血生长因子造血生长因子是一类调节造血细胞生长的蛋白质因子，能促进不同谱系造血细胞的增殖和分化，粒细胞集落刺激因子、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、多集落刺激因子、重组人红细胞生成素、重组人血小板生成素(rhTPO)和重组人白细胞介素-11(rhIL