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文档简介
1、葡萄糖氧化酶法测定(cdng)血清葡萄糖实验(shyn)九共十八页一、实验(shyn)目的 (1)了解血糖(xutng)的概念。(2) 掌握血糖的测定方法葡萄糖氧化酶法。共十八页What? 血糖及正常(zhngchng)血糖水平:血糖(xutng):指血液中的葡萄糖.正常血糖浓度: 空腹波动在3.896.7mmol/L(70110mg/dl) 餐后2h内应7.8mmol/L(140mg/dl)。 共十八页血糖的来源(liyun)、去路 共十八页共十八页血糖(xutng)水平恒定的生理意义 保证重要组织器官的能量供应,特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。脑组织不能利用脂酸,正常情况下主要以来葡萄糖
2、供能;红细胞没有(mi yu)线粒体,完全通过糖酵解获能;骨髓及神经组织代谢活跃,经常利用葡萄糖供能。共十八页测定方法无机化学(wjhuxu)法: Folin-Wu法有机化学(yu j hu xu)法:邻甲苯胺法酶法:葡萄糖氧化酶法血糖测定的常用方法HOW?共十八页 方法 类型(lixng) 原 理 用途及备注磷钼酸法 定量 G+Cu2+Cu2O 稳定、准确、但对(Folin-Wu) 分光 Cu2O +磷钼酸试剂 蓝色钼化合物 葡萄糖无特异性,(430nm) 受血中非糖还 原物 质的影响。 邻甲苯胺法 定量 G+邻甲苯胺蓝绿色的席弗(Schiff)碱 较Folin-Wu法特异(630nm) 但
3、不及酶法。 D-甘露糖能与邻甲 苯胺反应,生成类 似吸收光谱,造成 正误差。(一)化学法共十八页酶法分析是指用酶作为工具(gngj)定量测定某种物质含量的分析方法。定量分析的目标可以是酶的底物,辅酶,也可以是酶的激活剂或抑制剂。(二)酶 法共十八页酶法分析的主要(zhyo)方法: 单酶反应定量法和偶联酶反应定量法单酶反应定量法:指用一种酶为工具酶定量测定某种物质的方法。偶联酶反应定量法:当单酶反应底物或产物反应底物或产物的物理化学手段无法区分时,还可以借助另一种酶作为指示酶,通过偶联反应进行(jnxng)定量分析。共十八页方法 类型 原 理 用途及备注己糖激酶 定量 G+ATPG-6-P+AD
4、P 血清尿液脑脊液、(HK)法 分光 G-6-P + NADP+ 公认参考方法 动态 GA-6-P + NADPH 操作简便,特异 终点 (340nm) 性和灵敏性均高 推荐常规(chnggu)方法葡萄糖氧 同上 G+O2 GA+H2O2化酶(POD) H2O2 + 染料有色染料 偶联法 (还原型) (氧化型) 可制试纸片定量(Trinder) (4-氨基安替比林+酚 半定量筛选试验 红色琨类化合物505nm)共十八页葡萄糖氧化酶-过氧化物(u yn hu w)酶法原理(1)葡萄糖O2H2O(2)H2O24-氨基(nj)安替吡啉苯酚葡萄糖酸H2O2葡萄糖氧化酶(GOD)H2O 红色醌式物质过氧
5、化物酶(POD)Trinder反应505nm光吸收法测定相对血糖浓度共十八页(1)取3支试管(shgun),按下表加入试剂:试剂标准管(ml)测定管 (ml)空白管(ml)血清样品0.03葡萄糖标准液0.03蒸馏水0.03酶酚混合试剂3.003.003.00实验(shyn)步骤:充分混匀,37 水浴中保温20min;冷却至室温后,505nm处比色比色方法:以空白管调零,读取标准管及测定管吸光度值。共十八页 (2)计算 依据朗伯-比尔定律: A=KLC 血清(xuqng)葡萄糖= (mmol/L)参考值:空腹血清葡萄糖浓度:3.896.11mmolL测定管吸光度标准管吸光度标准(biozhn)液
6、浓度共十八页注意事项:本法用血量甚微,操作中应直接加标本(biobn)至试剂中,再吸试剂反复冲洗试管。此法可直接测定脑脊液葡萄糖的含量,但不能直接用于测定尿液葡萄糖含量。因为尿液中尿酸等干扰物质浓度过高,可感染过氧化物酶发硬,造成结果假性偏低。严重黄疸、溶血及乳糜样血清应先制备无蛋白血滤液,然后再进行测定。共十八页临床意义:生理性高血糖:摄入高糖食物(shw),情绪紧张病理性高血糖: 糖尿病 内分泌腺功能障碍 颅内压增高 脱水引起高血糖生理性低血糖:见于饥饿和剧烈运动病理性低血糖:特发性功能性低血糖,依次是药源性,肝源性和胰岛素瘤等。调节血糖(xutng)水平的激素:胰岛素、胰高血糖素、糖皮质
7、激素和肾上腺素。共十八页思考题:本实验原理为酶促化学反应(fnyng),为何未加终止剂终止酶的反应(fnyng)?本实验涉及显色反应,该反应与血清碱性磷酸酶活力测定中的显色反应有何异同?为何不同检测方法所提供的空腹正常血糖参考值存在差异? 葡萄糖氧化酶法: 3.896.11mmol/L Folin-Wu法: 4.46.7mmol/L 邻-甲苯胺法: 3.896.11mmol/L共十八页内容摘要葡萄糖氧化酶法测定血清葡萄糖。血糖及正常血糖水平:。空腹波动在3.896.7mmol/L(70110mg/dl)。餐后2h内应7.8mmol/L(140mg/dl)。保证重要组织器官的能量(nngling)供应,特别是某些以葡萄糖供能的组织器官。无机化学法: Folin-Wu法。有机化学法:邻甲苯胺法。(1)葡萄糖O2H2O。(2)H2O24-氨基安替吡啉苯酚。调节血糖水平
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