土壤酸性磷酸酶活性测定方法_第1页
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1、土壤酸性磷酸酶活性的测定原理该方法以对硝基苯磷酸二钠（即pNPP）为基质，基质在土壤酸性磷酸酶的催化下水解生成 黄色色的对硝基苯酚（即pNP），该黄色溶液在410nm处有最大吸收光值，根据对硝基苯酚 的生成数量与黄色溶液的吸光度呈正比来进行定量分析，以此来反映土壤酸性磷酸酶的活 性，采用的是对硝基苯磷酸二钠比色法。测定方法称取壤土 0.2g、砂土 0.5g、粘土 0.1g风干土于10mL离心管中，加入0.2 mL甲苯和4 mL ph6.5磷酸缓冲液，再加1 mL 0.05 mol/L对硝基苯磷酸二钠溶液（用磷酸缓冲液配制）， 摇匀后加盖，放进3637C的培养箱中进行培养1个小时；培养完成后取出

2、加入0.5 mol/L的CaCl2 1 mL及0.5 mol/L的NaOH 4 mL，摇匀；而后在2500r/min下离心5min；取上层清夜于10ml离心管4000r/min下再离心5min.取上清液在410 nm处比色，并记录吸收光值。标准曲线的制作取13支玻璃试管，按顺序编号，并按表2加入试剂。表2对硝基苯酚标准曲线配制表离心管号0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、0.005?mol/mLpNP (mL ) 0、10、0.01、11、0.02、120.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.080.09H2O (mL )0.8、0.100.79、0.110.78、0.120

3、.77、0.76、0.75、0.74、0.73、0.720.71pNP 的含量(?mol)0、0.700.00005、0.690.0001、0.680.00015、0.0002、0.00025、0.0003、0.00035、 0.00040.000450.0005摇匀0.2mol/LpH6.5 磷酸缓冲液(mL)0.5mol/L CaCl2 (mL)0.5mol/L NaOH (mL)混匀后，转入10mL的离心管中，0.000550.0006414在2500r/min下离心5min，再在4000r/min下离心5min以0号作为对照，在A410nm波长下测光吸收值，并记录光吸收值A410。以吸光值为横坐标、对硝基苯酚的含量为纵坐标计算直线回归方程y=a+bx及相关系 数R，即对硝基苯酚含量n （?mol） =a+bX A410.计算方法土壤酸性磷酸酶的活性用每克土中的对硝基苯酚的微克数表示，即（?g/ h g W） =nXMX稀 释倍数/ （WXt）式中：n一标准曲线上查得样品中对硝基苯酚的浓度（?mol）；

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