实验七、革蓝氏染色法

1、Exp. 4 Gram StainAimLearn and practice Grams stainLearn the principle of Grams stainKnow its importance in Bacteria taxonomyIntroduction of Gram stainDevelopment of Gram stainthe principle of Gram stainImportance of Gram stain for MicrobiologyMaterial菌种:参考菌：G+：Staphylococcus aureus, G-: Escherichia

2、coli 待测菌：Bacillus thuringiensis, Bacillus cereus仪器 显微镜；材料 载玻片，香柏油，二甲苯，擦镜纸，吸水纸，染色缸等。染料 草酸铵结晶紫染色液，路哥氏(Lugol)碘液，95%乙醇，0.5%番红染色液；Methods涂片初染媒染脱色复染镜检Development of Gram stainGram stain was developed by CGram a Denmark pathologist in1884.Bacteria can be divided into two group: one is Gram positive bacteri

3、a, the other is Gram negative bacteria.革蓝氏阳性和阴性菌细胞壁成分比较成分 占细胞壁干重的% 革蓝氏阳性菌 革蓝氏阴性菌肽聚糖 含量很高（50-90） 含量很低（10）磷壁酸 含量较高（50） 无类脂质 一般无（ 2） 含量较高（20）蛋白质 无 含量较高Principle G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇或丙酮脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径

4、缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。革蓝氏染色的意义细菌分类鉴定指导临床用药微生物分类鉴定的特征形态学和生理生化特征血清学实验和噬菌体分型氨基酸序列和蛋白质分析核酸碱基组成和序列分析形态学特征培养特征、菌落的形状、大小、颜色、表面特征、光泽等细胞形态：形状、大小、排列方式特殊结构：鞭毛、芽孢、孢子、荚膜等细胞内涵物染色反应：革蓝氏染色、抗酸性染色运动性涂片要用活跃生长期的幼培养物作革兰氏染色;注意练习无菌操作；在载玻片上滴半滴生理盐水；取菌不要贪多，接种环上肉眼可见菌苔痕迹即可；菌苔在生理盐水中涂片要均匀，局部不宜过厚,以免脱色不完全造成假阳性。初染 将玻片置于玻片搁架上，加草酸铵结晶紫染色液(加量以盖满菌膜为度)，染色1-2min。倾去染色液，用自来水小心地冲洗。媒染 滴加(Lugol)碘液，染1-2min，水洗。脱色 滴加95%乙醇，脱色20-25s立即水洗，以终止脱色。复染 滴加蕃红，染色2-3min，水洗。最