环境工程微生物学试验试验一微生物细胞数的计数课件

1、环境工程微生物学实验实验二： 培养基的制备和灭菌适用范围：环境工程专业实验教师：李宁 顾彦一、目的1、熟悉玻璃器皿的洗涤和灭菌前的准备工作。2、掌握培养基和无菌水的制备方法。3、掌握高压蒸气灭菌技术。二、基本原理二、基本原理二、基本原理二、基本原理全自动立式灭菌锅三、仪器和材料2、器材：培养皿（直径90mm）10套，试管(15 mm150 mm)5支，(18 mm180 mm)5支，移液管(10 mL)1支，(1 mL)2支，锥形瓶(250 mL)2个；烧杯(300 mL)1个，玻璃珠30粒、纱布、棉花、牛皮纸（或报纸）、精密pH值试纸6.48.4、高压蒸气灭菌锅、烘箱、酒精灯。1、药品：牛肉

2、膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂或市售营养琼脂培养基、蒸馏水、10%HCI、10%NaOH四、实验内容（1）洗涤玻璃器皿在使用前必须洗涤干净。培养皿、试管、锥形瓶等可用洗衣粉加去污粉洗刷并用自来水冲净。移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗干净。洗刷干净的玻璃器皿自然晾干或放入烘箱中烘干、备用。1、玻璃器皿的洗涤和包装四、实验内容1、玻璃器皿的洗涤和包装（2）包装移液管棉塞的制作（试管和锥形瓶）培养皿四、实验内容2、培养基的制备-以牛肉膏蛋白胨培养基为例(供测定细菌总数和细菌分离培养)称量溶解调pH过滤分装封口灭菌牛肉膏 1.0g；蛋白胨 2.0g；氯化钠 1.0g；琼脂 4.0g；蒸馏水 200mL；pH

3、7.2-7.4 用精密pH试纸测培养基的pH值，按pH值的要求用质量浓度100g/L的NaOH或体积百分数10% 的HCl调整至所需的pH值。四、实验内容分装 ： 按图所示，将培养基分装于试管或锥形瓶中（注意防止培养基玷污管口或瓶口，避免浸湿棉塞引起杂菌污染），装入试管的培养基量视试管的大小及需要而定，一般制斜面培养基时，每支试管装的量为试管高度的1/41/3。2、培养基的制备-以牛肉膏蛋白胨培养基为例(供测定细菌总数和细菌分离培养)牛肉膏 1.0g；蛋白胨 2.0g；氯化钠 1.0g；琼脂 4.0g；蒸馏水 200mL；pH 7.2-7.4 称量溶解调pH过滤分装封口灭菌四、实验内容2、培养

4、基的制备-以牛肉膏蛋白胨培养基为例(供测定细菌总数和细菌分离培养)牛肉膏 1.0g；蛋白胨 2.0g；氯化钠 1.0g；琼脂 4.0g；蒸馏水 200mL；pH 7.2-7.4 称量溶解调pH过滤分装封口灭菌瓶口用棉塞住，并用报纸、小绳捆好瓶口，挂上标签，注明何种培养基，制作人，时间等。最后放入高压无菌器中，待灭菌。四、实验内容3、无菌稀释水的制备（1）取一个250mL的锥形瓶装90（或99）mL蒸馏水，放30颗玻璃珠（用于打碎活性污泥、菌块或土壤颗粒）于锥形瓶内，塞棉塞、包扎，待灭菌。（2）另取5支18mm180mm的试管，分别装9mL蒸馏水，塞棉塞、包扎，待灭菌。四、实验内容4、灭菌干热灭菌法：培养皿、移液管及其他玻璃器皿可用干热灭菌。先将已包装好的上述物品放入恒温箱中，将温度调至160后维持2h，把恒温箱的调节旋扭调回零处，待温度降到50左右，才可将物品取出。请注意：灭菌时温度不得超过170，以免包装纸烧焦。灭菌好的器皿应保存好，切勿弄破包装纸，否则会染菌。 四、实验内容4、灭菌高压蒸气灭菌法：该法使用高压灭菌锅，微生物实验所需的一切器皿、器具、培养基（不耐高温者除外）等都可用此法灭菌。加水装锅启动关闭排气阀升压、升温中断热源取出灭菌物待培养基冷却后置于37恒温箱内培养24h，若无菌生长则放入冰箱或阴凉处保存