75%乙醇、0.1%新洁尔灭消毒效果验证方案

1、75%乙醇、0.1%新洁尔灭消毒效果验证方案验证编号：QC-VAL-535-01苏州万庆药业有限公司2010年月验证方案确定报告确定部门姓名签名日期起草QC复核QC审核QCQA批准QualityDirector目录TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark10 验证方案介绍、目的、范围、相关文件1 HYPERLINK l bookmark12 验证准备.1 HYPERLINK l bookmark14 验证内容3 HYPERLINK l bookmark16 变更与偏差7 HYPERLINK l bookmark18 5验证结论8 HYPERLINK l bookma

2、rk20 附件8 HYPERLINK l bookmark22 参考文献8苏州万庆药业有限公司QC-VAL-535-01苏州万庆药业有限公司QC-VAL-535-01第 页共8页第 页共8页验证方案简介、目的、范围、相关文件1.1验证方案简介：本验证共分三部分：第一部分是对验证方案的介绍，包括验证目的、范围以及相关验证、文件的介绍。第二部分是验证的相关内容：75%乙醇及0.1%新洁尔灭的喷洒消毒效果试验。验证在微生物实验室阳性菌对照室完成。第三部分是验证结论及再验证。1.2目的通过喷洒消毒的方法验证75%乙醇及0.1%新洁尔灭在实验室条件下对各种载体上已知菌的消毒效果，为其正确使用提供保障。范

3、围本验证方案适用于本公司微生物实验室及其他洁净环境需要外表面清洁消毒的物料。1.4验证相关文件序号文件名称文件号执行日期1微生物实验室管理规程QC546-012007-11-262菌种菌液的制备、储存、使用操作规程QC505-012007-11-263洁净区空气洁净度监测操作规程QC510-042010-11-014培养基缓冲液配及无菌包装棉拭子管理规程QC506-022010-11-065微生物实验室洁净区清洁消毒规程QC548-012007-12-28验证准备2.1试验仪器和设备设备型号编号校验有效期至生化培养箱(3035C)霉菌培养箱(2025C)精密移液器生物安全柜咼压蒸汽火菌柜2.2

4、试验用品试验用品批号来源有效期至尢菌塑料吸头（1.0ml）无菌空平皿（90mm）大豆胰蛋白琼脂（TSA）大豆胰蛋白肉汤（TSB）萨布罗琼脂（SDA）萨布罗肉汤（SDB）TSA培养皿表面接触性培养皿pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液2.3菌种及菌液菌种名称菌种代号菌种批号菌液批号金黄色匍萄球菌(Staphylococcusaureus)大肠埃希菌(Escherichiacol)铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginos)枯草芽抱杆菌(Bacillussubtilis)白色念珠菌(Candidaalbicans)黑曲霉(Aspergill

5、usniger人表皮匍萄球(Staphylocococcushominis)2.4消毒剂名称来源原始批号有效期至配制浓度配制批号自制消毒剂效期75%乙醇0.1%新洁尔灭2.5载体软塑料（自封袋、取样袋），硬质塑料（桶、校验仪器外壳、喷壶、计算器、写字板），不锈钢（桶、盒、器具），纸张（标示卡），玻璃（玻璃瓶），洁净服面料（布袋），橡胶（橡胶手套），铝合金。验证内容3.1菌液制备：3.1.1将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌接种至大豆胰蛋白肉汤培养基（TSB）中，在3035C培养1824小时；枯草芽抱杆菌划线接种至大豆胰蛋白琼脂培养基（TSA）上,在3035C培养1824小时后洗脱琼脂表

6、面菌苔；白色念珠菌接种于萨布罗葡萄糖肉汤培养基（SDB）中，在2025C培养4872小时；黑曲霉菌划线接种至萨布罗葡萄糖琼脂培养基（SDA）上,在2025C培养57天，洗脱琼脂表面抱子；吸取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌增菌后的培养物各1ml加入到9mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，充分混匀后作为10-1稀释级，依次10倍稀释至10-7稀释级计数确认菌数，同时预留10-2稀释级作为菌片制备使用；吸取白色念珠菌增菌后的培养物及黑曲霉抱子液各1ml加入到9mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，充分混匀后作为10-1稀释级，依次10倍稀释至10-5稀释级计数确认菌数，同时预留

7、浓菌液作为菌片制备使用。3.1.2菌液计数：吸取1ml上述菌液置无菌空平皿中，倾倒温度不超过45C的TSA或SDA培养基，平行倾到2个平板，细菌用TSA培养基在30-35C培养72h后观察最终结果，真菌用SDA培养基在20-25C培养5天后观察最终结果。3.1.3菌液计数结果：试验菌稀释级计数结果cfu/皿平均值浓菌液菌数cfu/ml金黄色匍萄球菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉3.2菌片的制备：3.2.1试验中使用的菌片是以菌悬液滴加于载体上制成。载体是根据消毒对象选择常用材质如软塑料（自封袋、取样袋），硬质塑料（桶、校验仪器外壳、喷壶、计算器、写字板），不锈钢（桶、盒、器

8、具），纸张（标示卡），玻璃（玻璃瓶），洁净服面料（布袋），橡胶（橡胶手套），铝合金，规格均为5X5cm；3.2.2所用载体于染菌前，应进行脱脂处理。脱脂方法如下：将载体放在含肥皂的水中煮沸30min；而后以自来水洗净；用纯化水煮沸10min；用纯化水漂洗；晾干备用。3.2.3载体经压力蒸汽灭菌（耐湿热灭菌载体）或用75%乙醇浸泡消毒后晾干（不耐湿热灭菌载体），统一使用滴染法：将经灭菌的载体片平铺于无菌平皿内，逐片滴加菌液。菌液滴加量每片为0.1ml，细菌选择10-2稀释级，真菌选择原菌液。用精密移液器接无菌吸头，滴染菌液，并用接种环涂匀整个载体表面。滴染菌液后置室温下自然阴干后再使用。每种菌对

9、应的一种载体制备4片。注：菌片含菌量应为5x103-fu/片。3.3菌片菌数确定：3.3.1取一片已制备好的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、人表皮葡萄球菌菌片，完全浸泡于100mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中反复荡洗15分钟，将此荡洗液作为10-2稀释级，然后吸取1ml荡洗液加入到9mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，混匀作为10-3稀释级，同法再进行10倍至10-5稀释级，吸取1ml置无菌空平皿中，倾倒融化的温度不超过45C的TSA培养基，平行倾到2个平板，先置于在20-25C培养3天，再置于30-35C培养2天，观察最终结果；取一片已制备好的白色念珠菌菌片，完全浸

10、泡于100mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中反复荡洗15分钟，将此荡洗液作为10-2稀释级，然后吸取1ml荡洗液加入到9mlpH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，混匀作为10-3稀释级，同法再进行10倍至10-4稀释级，吸取1ml置无菌空平皿中，倾倒融化的温度不超过45C的TSA培养基，平行倾到2个平板，先置于在20-25C培养3天，再置于30-35C培养2天，观察最终结果；取一片已制备好的黑曲霉菌片，完全浸泡于100ml含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中反复荡洗15分钟，将此荡洗液作为10-2稀释级，然后吸取1ml荡洗液加入到9ml含0.05%聚山梨酯80的pH7.0氯化钠蛋

11、白胨缓冲液中，充分混匀后作为10-3稀释级，吸取1ml置无菌空平皿中，倾倒融化的温度不超过45C的TSA培养基，平行倾到2个平板，先置于在20-25C培养3天，再置于30-35C培养2天，观察最终结果。3.3.2菌片菌数确定结果：试验菌载体结果金黄色葡萄球菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌枯草芽抱杆菌白色念株菌黑曲霉表皮匍萄球菌软塑料细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌数硬质塑料细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌数不锈钢细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌数纸张细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌数玻璃细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均

12、菌片菌数试验菌载体结果金黄色葡萄球菌大肠埃希菌铜绿假单胞菌枯草芽抱杆菌白色念株菌黑曲霉表皮匍萄球菌洁净服面料细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌数橡胶细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌数铝合金细菌10-5Ca:10-4An:10-3平均菌片菌数3.3.3合格标准：回收菌片的含菌量应应不小于105cfu/片。3.4载体喷洒消毒杀菌效力试验：3.4.1选择常用于喷洒消毒的物料材质进行试验。3.4.2每种菌所染菌片应分开进行试验，试验时，每种载体菌片各取1片，每次喷雾量于实际试验操作要求一致且距离和压力保持相同，使喷到物料载体上的雾粒大小和数量一致。3.4.3待喷洒载体

13、表面充分挥发至干。3.4.4按照QC510-04洁净区表面的微生物监测程序对平整光滑的表面进行接触碟取样。3.4.5接触碟取样：取样时打开碟盖，使无菌培养基表面与取样表面直接接触，均匀按压接触碟底板确保全部琼脂表面与取样点表面均匀接触10秒钟左右，再盖上碟盖，做好标记；接触碟先在2025C培养箱培养3天，然后在3035C培养箱培养2天，观察最终结果。3.4.6试验重复3次，计数各组的活菌量（cfu/片），计算杀灭对数值。（结果保留到小数点后两位）杀灭对数值=试验前菌片活菌浓度的对数值一试验后菌片活菌浓度的对数值3.4.7合格标准：要求各次试验的杀灭对数值均三3，可判定消毒合格。3.4.8载体擦

14、拭消毒杀菌效力试验结果：（载体：软塑料，硬质塑料，不锈钢，纸张，玻璃，洁净服面料，橡胶，铝合金。）、结果试验菌f消毒剂批号载体结果cfu/皿杀灭对数值阴性对照结论金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus大肠埃希菌Escherichiacoli铜绿假单胞菌Pseudomonasaeruginosa枯草芽抱杆菌Bacillussubtilis白色念珠菌Candidaalbicans黑曲霉Aspergillusniger表皮匍萄球菌Staphylocococcushominis变更与偏差4.1在执行验证过程中，检测人员需要及时记录出现的任何偏差，并按照相关操作规程处理。4.2本验证方案批准实施之后，任何的变更需要按照相关操作规定，由申请人提出书面申请，交由验证小组审核，批准之后，方能执行变更。验证结论5.1验证完成之后，汇总所有检测数据，进行统计分析。由验证部门起草验证报告，总结验证结论，并交由相关部门审核，批准。5.2当检测数据满足下列规定时，方可认为验证合格：5.3统计数据表明所有的检测数据均在规定的范围内；5.4如果检测数据不符合规定标准，经偏差调查发现是由与验证人员无关的因素造成的，并经审核批准。附件6.1原始记录1菌液制备；6.2原始记录2载体制备；6.3原始记