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文档简介
1、名词解释1细胞工程:指以生物细胞或组织为研究对象,按照人们的意愿进行工程学操作,从而改变 生物性状,以获得生物产品,为人类生产和生活服务的科学。2去分化(脱分化):在某些特定条件下,分化细胞的表型不稳定,基因活动模式发生可逆 的变化,细胞脱离原状态回复到分生状态3再分化:脱分化细胞失去分化特征,但在某些特定条件诱导下,可再次开始新的分化发育 进程,最终形成各种组织、器官或胚状体等。4污染:在组织培养过程中,培养基和培养材料滋生杂菌,导致培养失败的现象。5褐变:是指组织培养中,由于材料被切割而使多酚氧化酶活化将组织中的酚类物质氧化形 成棕褐色的醍类物质,并向培养基中扩散,抑制培养物生长甚至导致其
2、死亡的现象。6玻璃化:也称超水化作用,是离体培养过程中试管苗发生形态、生理和代谢异常的现象。7植物细胞培养:在离体条件下对植物单个细胞或小的细胞团进行培养并使其增殖的技术。8看护培养:在培养中用一块活跃生长的愈伤组织来哺育单细胞,从而使其正常分裂、增殖 的方法。9植物原生质体:是指除去细胞壁后裸露的具有生命活力的原生质团。10条件培养法:在进行花粉培养时,利用预先培养过花药的液体培养基,或加入失活的花 药提取物的合成培养基进行花粉培养的方法。11植物胚胎培养:是指在无菌条件下,对植物的胚及胚器官如子房、胚珠和胚乳进行离体 培养的技术。12种质:指亲代通过生殖细胞或体细胞直接传递给子代并决定固有
3、生物性状的遗传物质。13种质保存:指利用天然或人工创造的适宜环境,借以保存种质资源,使个体中所含有的 遗传物质保持其遗传完整性,并且有强的生活力,能通过繁殖将其遗传特性传递下去。14种质资源的离体保存:指对离体小植株、器官、组织、细胞或原生质体等材料,采用限 制、延缓或停止其生长的处理措施使之保存,在需要时可重新恢复其生长,并再生植株的方 法。15同核体:由同一个生物个体的亲本细胞融合形成的含有同型细胞核的融合细胞。16异核体:由不同种属或同一种属的不同个体的亲本细胞发生融合所形成的含有不同细胞 核的融合细胞。17胚胎移植:对优秀雌性动物进行超数排卵处理,在其发情配种后一定时间内从其生殖道 取
4、出早期胚胎,移植到同期发情的普通雌性动物生殖道的相应部位,让其生产后代的技术。18胚胎工程:指以动物胚胎为研究对象而产生的一系列技术操作,如胚胎移植、胚胎冷冻 技术、胚胎分割、体外胚胎生产、动物克隆、性别控制机基因导入等。19超数排卵:在动物发情周期的适当时期,用促性腺激素进行处理,诱发其卵巢上有大量 卵泡同时发育并排卵,称为超数排卵,简称超排。20胚胎回收:也称采卵,把胚胎从供体的生殖道中冲洗出来,提供移植或其他胚胎工程研 究应用。21体外受精:指把成熟卵母细胞或未成熟卵母细胞经体外成熟培养后,与体内或体外获能 的精子在体外条件下完成受精的过程。22试管动物:体外受精胚胎移植到母体后获得的动
5、物。23胚胎分割:采用显微操作系统将步哺乳动物附植前的胚胎分成若干个具有继续发育潜力 部分的生物技术。24胚胎融合:通过显微操作使2枚或2枚以上的受精卵或胚胎发育成为一枚胚胎的技术,由此发育而成的个体称为嵌合体。25动物性别控制:通过对动物的正常生殖过程进行人为干预,使成年雌性动物产出人们期 望性别后代的一门生物技术。26克隆:在生物学中,是由一个细胞或个体以无性繁殖方式产生遗传物质完全相同的一群 细胞或一群个体;在动物繁殖学中,不通过精子和卵子的受精过程产生遗传物质完全相同新 个体的一门胚胎生物技术。27干细胞:是指具有无限或较长期的自我更新能力,并能产生至少一种高度分化子代细胞 的细胞。2
6、8转基因动物:是指通过转基因技术将目的基因导入生殖细胞、早期胚胎干细胞、早期胚 胎,使之整合到受体细胞的基因组中,经发育而产生的个体。29转基因动物的常用技术:原核期胚胎显微注射技术、反转录病毒技术、慢病毒载体技术、 精子载体技术、体细胞核移植转基因技术、胚胎干细胞介导技术。30染色体工程:指人们按照一定的设计,有计划地合成、添加、替换、削减或易位单条染 色体或染色体片段,对生物染色体组或染色体结构进行改造,以定向改变物种遗传特性的新 技术。填空1动物细胞工程实验室的组成:无菌操作室、培养室、细胞学鉴定室、制备室、储藏室、清 洗灭菌室2植物细胞工程实验室的组成:培养室、温室3常用的高压蒸汽灭菌
7、锅有:立式、卧式、手提式4常用的滤器有:不锈钢滤器、玻璃漏斗式滤器和微孔滤膜滤器。5CO2培养箱可以提供CO2的浓度是:5%作用是:保持培养液的pH稳定6细胞冷冻最常用的方法是:液氮冷冻保存法7玻璃器皿的清洗顺序:浸泡、刷洗、酸洗、冲洗8愈伤组织的形成大致可分为:诱导期、分裂期、分化期9根据组织学外观特征及再生方式,将愈伤组织分成两类:胚型愈伤组织和非胚型愈伤组 织10离体无性繁殖类型:腋生枝型、不定芽型、体细胞胚型和原球茎型。11离体培养中三大技术难题:污染、褐变、玻璃化12病毒在植株体内的扩散方式有:胞间连丝:植物细胞间短距离移动维管束输导组织 系统:长距离转移。13病毒在植株个体间的传播
8、分为:介体传播:是借助生物体的活动进行的传播非介体 传播包括自然接触、汁液传播、嫁接传播、花粉传播等。14脱除植物病毒的方法:物理方法、化学方法和生物学方法物理法脱除病毒中常用:热处理生物学法脱除病毒常采用:茎尖分生组织培养15指示植物检测病毒时可采用:汁液感染法、嫁接法16病毒检测:方法有指示植物法、血清学法、电镜检测法和分子生物学检测法。17无病毒苗的保存:离体保存和隔离保存繁殖方法:实验室离体快繁和田间隔离繁殖。18用于植物细胞大规模培养的主要有:悬浮培养和固定化培养。植物细胞悬浮培养技术有:成批培养、连续培养和半连续培养。19细胞悬浮培养时,可采用物理或化学方法实现同步化物理方法包括:
9、分选法和冷处理法 化学方法包括:饥饿法和抑制法。20植物细胞常用的固定方法有:包埋法和吸附法。21原生质体分离:机械分离和酶解分离,现在主要用酶解分离方法。22原生质体的纯化方法:过滤离心法、漂浮法和界面法。23原生质体融合过程:原生质体接触、质膜融合、细胞质融合和核融合。24诱导原生质体融合时,除了形成杂种细胞外,还出现异核体、同核体、非对称杂种和细 胞质杂种等不同的融合产物。25花药培养时,选取处于单核期的花药培养效果较好。26花药预处理方法有:温度预处理、化学预处理和物理预处理27为了得到可育的纯合二倍体植株,需要把单倍体植株的染色体组加倍,常采用秋水仙素 处理。28花粉培养是以单个花粉
10、粒作为外植体进行离体培养,需将其从花药中分离出来,一般采 用机械挤压法、自然散落法和机械游离法来分离花粉细胞。29植物胚胎培养:是指在无菌条件下,对植物的胚及胚器官如子房、胚珠和胚乳进行离体 培养的技术。它包括胚培养,胚珠培养,子房培养.广义还包括胚乳培养,离体授粉。30依据剥离胚的发育时期不同,可将胚培养分为成熟胚培养和幼胚培养。31幼胚培养的关键技术是:幼胚剥离。幼胚培养中,常见的生长方式为:胚性发育、早熟萌发和愈伤组织32胚乳培养取材的最佳时期是:旺盛生长期。花药培养时,选取处于单核期的花药培养效 果较好。33植物种质资源保存的方式:原生境保存和非原生境保存。34种质离体保存包括常温限制
11、生长保存、低温保存、超低温保存三种方法。35根据体外培养动物细胞在培养器皿中是否能贴附于支持物生长的特性,可分为贴附型生 长细胞和悬浮型生长细两大类,其中贴附型细胞大致又可分为成纤维细胞型、上皮细胞型、 游走细胞型和多形细胞型四类。36动物细胞在体外培养时,在细胞生存全过程中,经历原代培养期、传代期、衰退期三个 阶段。37常用的动物细胞原代培养方法:组织块培养法和分离细胞培养法。38采用消化分散法分离动物细胞时,常用的消化液为:胰蛋白酶,使用浓度通常为:0.25%。39动物细胞冻存和复苏的基本原则是:慢冻快融。40细胞冷冻最常用的方法是:液氮冷冻保存法41常用的诱导动物细胞融合的副黏液病毒科病
12、毒为:仙台病毒。42人工诱导动物细胞融合的方法有:病毒诱导融合、化学诱导融合和电融合。43杂交瘤技术的基本原理是将(骨髓瘤细胞)与(淋巴细胞)融合,获得杂交瘤细胞。44动物性别控制途径:XY精子分离技术、胚胎性别鉴定法45胚胎移植的基本程序:供体与受体的选择、供体超数排卵、受体同期发情、胚胎回收、 胚胎检测及质量鉴定、胚胎移植46根据细胞分化潜能大小,可将干细胞分为(全能干细胞)、(三胚层多能干细胞)、(单胚 层多能干细胞)和(单能干细胞)。47根据细胞来源不同,可将干细胞分为(胚胎性干细胞)和(成体干细胞)两类。48转基因动物新发展方向:动物乳腺生物反应器、血液生物反应器、膀胱生物反应器。4
13、9动物染色体工程主要包括:单倍体育种、多倍体育种、染色体的显微操做技术、人工染 色体技术。50人工染色体主要有酵母人工染色体、细菌人工染色体、哺乳动物人工染色体。51 染色体加倍是一种动物多倍体育种技术,可通过物理方法、化学方法和生物学的方法来 实现。物理方法包括温度休克法和水静压法;化学方法是利用秋水仙素和细胞松弛素B等化学物质通过抑制细胞分裂而获得同源多倍 体,生物学方法是主要通过动物杂交获得异源多倍体,多倍体动物具有生存能力强、生长速度 快等特点,而且还具有较好的经济性状和潜在的理论研究价值。简答题1.以升汞消毒为例简述从外植体消毒到接种的过程超净工作台:紫外灯照射20-30 min,关
14、闭后,打开风机10 min,开始操作。接种人员:洗净双手,在缓冲室换好消毒的工作服,戴口罩,换拖鞋。操作前:用酒精棉球擦拭双手、工作台、装有培养基的培养器皿及放外植体的烧杯。接种工具:用酒精擦拭接种工具,然后在酒精灯火焰上进行灼烧灭菌。外植体:75%乙醇浸泡30 s,再用0.1%的升汞中浸泡5-10 min,必要时可进行搅动, 使植物材料与消毒剂有良好的接触,然后用无菌水冲洗3-5次。接种:培养瓶瓶口在酒精灯火焰附近,并在接种前后灼烧瓶口。(夹取外植体时用力要 适当,用力过大外植体易受到伤害;用力过小外植体易脱落。)接种外植体时,不能碰到培 养瓶瓶口。将消毒后的培养材料迅速放入培养瓶,包好瓶口
15、。操作期间应经常用70%乙醇 擦拭工作台和双手,接种工具要反复灭菌,防止交叉污染。结束:清理和关闭超净工作台。2 .常用的植物激素有哪些?作用是什么?生长素类:促进细胞伸长生长和分裂的作用,用于诱导愈伤组织形成和根的分化。常 用的生长素有:(2,4-D)、(IAA)、(IBA)、(NAA)细胞分裂素类:促进细胞分裂、诱导愈伤组织或器官分化、促进侧芽增殖,抑制根的 分化。常用的细胞分裂素有:6-BA、KT、ZT、2ip赤霉素:主要添加GA3,促进幼苗茎的伸长生长,促进胚状体发育成小植株。在植物组织培养中,器官发生的方式有先分化产生芽,芽伸长后在幼茎的基部长根,形成完整植株。先分化产生根,再从根的
16、基部长出不定芽,形成完整植株。愈伤组织的不同部位分别形成根和芽,然后二者的维管组织再相连,形成完整植株。体细胞胚胎来源直接从外植体上产生体细胞胚胎;由愈伤组织产生(内部、表面);悬浮培养中由胚 性细胞复合体表面产生;由悬浮培养中游离的单细胞产生;由单倍体细胞产生;人工种子的结构如何?具有良好发育的体细胞胚,并能发育成正常完整植株:广义的体细胞胚由组织培养 中获得的体细胞胚即胚状体、愈伤组织、原球茎、不定芽、顶芽、腋芽或小鳞茎等繁殖体组 成。人工胚乳,一般由含有供应胚状体养分的胶囊组成,养分包括矿质元素、维生素、 碳源及激素等。胶囊之外的包膜称之为人工种皮,有防止机械损伤及水分干燥等保护作用。人
17、工种子的制备胚状体的诱导及同步化;人工胚乳的制备;人工种皮的制备;人工种子的包埋; 人工种子的贮存与萌发离体无性繁殖一般分为哪几个阶段?简述其操作的一般程序。答:离体无性繁殖一般可分为5个阶段。供体植株的准备:供体植株应生长旺盛、健壮、无病虫害,并尽可能生长在干净的环境中。无菌培养物的建立:获得无菌材料并诱导外植体生长和发育。包括从供体植株上采取外 植体进行消毒、接种及启动外植体生长等程序。培养物增殖:通过反复培养使获得的数量有限的嫩枝、芽苗、胚状体、原球茎等培养物的 总量增加。生根培养:将增殖阶段形成的无根芽苗转移到生根培养基上诱导产生不定根,获得健壮 的具有根、芽、茎的完整小植株。试管苗的
18、移栽及鉴定:将具根试管苗转移到土壤中,使其从离体培养逐步适应温室或田 间生长环境。鉴定主要包括商品性状、健康状况、遗传稳定性和农艺性状的鉴定。简述通过茎尖分生组织培养获得无病毒植株的一般程序。供体植株的选择:选择生长健康、感病程度轻的植株茎尖分生组织的分离:在解剖镜下分离出适合大小的茎尖,并进行简单的消毒处理茎尖分生组织的培养:方法有固体培养和滤纸桥液体培养,常采用无机离子浓度低和铵 盐、钾盐浓度高的培养基,进行恒温光照培养。病毒检测:方法有指示植物法、血清学法、电镜检测法和分子生物学检测法。无病毒苗的保存和繁殖:保存的方法有离体保存和隔离保存,繁殖方法有实验室离体快 繁和田间隔离繁殖。植物单
19、细胞的分离1)由完整的植物器官中分离单细胞:从完整的植物器官中分离单细胞可以采用机械法或 酶解法。叶肉是分离单细胞的最好材料2)由愈伤组织中分离单细胞:从培养的未分化且疏松易碎的愈伤组织中分离单细胞。植物原生质体融合方法有哪些?1)无机盐诱导融合2)高pH值-高钙法3)聚乙二醇诱导融合4) PEG-高PH-高钙5) 电融和花药培养和花粉培养的区别是什么?1)花药培养:指用植物组织培养技术将发育到一定阶段的花药剥离下来(切去花丝部 分),接种到培养基上进行培养,最终形成完整植株的过程。2)花粉培养:又称小孢子培养,或游离小孢子培养,指在无菌条件下,将花粉从花药 中游离出来,使其成为分散或游离态,
20、发育成单倍体植株。3)就培养材料而言,花药培养属于器官培养,花粉培养属于细胞培养利用秋水仙素诱导花粉植株染色体加倍的方法有哪些?1)小苗处理法:将花粉植株幼苗整体浸泡于一定浓度的无菌秋水仙素溶液中。2)茎尖 处理法:将秋水仙素均匀涂抹在单倍体植株的顶芽或腋芽上。3)培养基处理法:将秋水仙 素加入培养基中来培养单倍体外植体或细胞。简述成熟胚的培养过程。将受精后成熟或未成熟种子或果实,用70%-75%酒精表面消毒消毒几秒到几十秒用0.1%升汞溶液或饱和漂白粉溶液消毒5-15min,无菌水反复冲洗3次无菌操作台上,直接或在解剖镜下剥取胚接种在培养基上,常规培养简述幼胚培养的基本程序。1)取材:取子房,一般取球形胚至鱼雷形胚,培养成功率较高。2)常规表面消毒3)幼胚剥离:是幼胚培养的关键技术,解剖镜下,取胚珠、去珠被、取出完整幼胚,注 意剥离时要保湿、无菌、操作迅速4)接种培养:幼胚剥离后立即接种到培养基上培养,一般采用看护培养。简述动物细胞体外培养的一般过程(1)取材:在无菌环境下从机体取出某种组织细胞,经过一定的处理后接入培养器皿中;(2)原代培养和传代培养:原代培养主要采用组织块培养法和分散细胞培养法;贴壁细胞的传代大都采用酶消化法来进行;(3)细胞纯化:自然纯化法和人工纯化法(酶消化法、机械刮除法、反复贴壁法、克隆法、 流式细胞仪技术等);(4)细胞的冻存复苏及运输:细胞
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