去甲斑蝥素钠小鼠体内组织分布研究

1、去甲斑蝥素钠小鼠体内组织分布研究【摘要】本文建立快速灵敏的HPLC-MS/MT法测定血浆和组织中去甲斑螫素钠的浓度，研究去甲斑蝥素钠小鼠体内组织分布。【关键词】去甲斑蝥素钠 体内组织 分布实验方法仪器与试药仪器 Agilent 1200 Series/6410 Series HPLC/MS/MS高效液相色 / 质谱仪（安捷伦科学技术公司） ; 梅特勒 - 托利多 AX -205 电子天平（梅特勒- 托利多仪器上海有限公司）；PROIND离心机（贺立氏）；XW-80A型旋涡混合器（上海精科实业有限公司）；PK514BP超声清洗器（德国 BANDEL , BHW-IV型电热恒温水温箱（北京医疗设备

2、 厂）。药品 去甲斑蝥素钠，实验室自制，纯度99.4%; 去甲斑蝥素标准品由山东莒南制药厂提供 ; 利巴韦林标准品（纯度），中国药品生物制品检定所。试剂乙腈，批号501287; 乙酸铵，批号 110020; 甲酸，批号406014; 丙酮，批号405160均为色谱纯，美国 TEDIA COMPANYINC生产。标准溶液的制备去甲斑蝥素钠和利巴韦林储备液及标准系列的配制同前。实验动物昆明种小白鼠，体重252克，雌雄各半，购于山东大学实验动物中心。实验设计于给药后 0.25 ， 1， 2， 4， 8 h 经摘眼球取血后脱颈处死小鼠，取出心、肝、脾、肺、肾、脑、肠、胃、睾丸/ 子宫，组织用生理盐水冲

3、洗干净后用滤纸吸干，- 20保存待测。样本分析色谱条件C18色谱柱（150X 4.6 mm, 5 （成；流动相乙睛-水（20: 80, 2 mM乙酸镂, 含0.1%甲酸）；在线脱气，流速1.0 mL min-1;柱温25C;进样量10八。质谱条件AP-ESI离子源，正离子模式，干燥气（N2）流速12.0 L min-1 ,干燥气 压力50 psi ,干燥气温度为350C,毛细管电压 4000 V,多级反应监测（MRM模式，选 择性离子对（M/Z）为16g 123 （去甲斑螫素钠）和 267.1-135.1 （内标利巴韦林），碎 片电压分别为 120 V 和 170 V ，碰撞能分别为5 eV

4、和 13eV。组织样品处理 取动物脏器，精密称重，剪碎后按2 mg-1比例加入生理盐水，冰浴条件下用组织匀浆机进行匀浆。取组织匀浆液0.3 mL,置离心管中，加10 (g-mL1利巴韦林溶液30 (L (心、脾、脑组织加 1 (g-mL-1利巴韦林溶液30 (L),涡旋30 秒，加入100 (L 1MHC1,涡旋30秒，然后加入1 mL丙酮涡旋1 min , 5000r min-1离 心10 min ,取上清液1 mL置离心管中，40c氮气吹干，残留物用100 (L水复溶，取10( L 进样测定。数据处理组织分布参数计算根据计算得到的组织中药物浓度- 时间数据，计算药时曲线下面积AUC MRT

5、结合Cmax Tmax等参数考察药物在体内组织分布情况及动力学过程。结果组织称重及处理将给药后 0.25 ， 1， 2， 4， 8 h 采集的组织样本经生理盐水冲洗，滤纸吸干后用电子 天平精密称量，称重原始数据。小鼠组织中去甲斑蝥素钠浓度- 时间数据根据HPLC-MS/MSfe测定得到的组织中去甲斑螫素钠的浓度和精密称量的组织重量， 计算每克组织中药物含量(w g - g -1 ) =C测V/W称，其中C测为测定得到组织匀浆中去 甲斑螫素钠浓度(g mL-1 ) ;V为所加生理盐水体积(mD ;亚称为组织重量。由结果看出，小鼠灌胃给予去甲斑蝥素钠溶液后，在各组织中分布广泛，给药后不同时间点各组

6、织中药物浓度依次为：0.25h，小肠 子宫胃 肾睾丸 月肺心脾脑;加，胃小肠子宫肾肝睾丸肺 心脾 脑;2h，小肠 胃子宫 肾睾丸 月脾肺心脑;4卜， 肾小肠 肝子宫 胃睾丸 肺心脾脑;8 h ，小肠子宫 胃肝睾丸 肾肺脾心脑。组织中药物浓度- 时间分布图根据各组织平均浓度- 时间数据绘制组织中药物浓度- 时间分布图。由结果可知，除脾脏是1 h 达峰外，去甲斑蝥素钠在其他组织均在15 min 达到最高浓度，然后随时间逐渐降低; 给药后 4 h ，在心、肝、肺、肾的浓度再次升高，随后降低;而脑、胃、睾丸、子宫随时间浓度逐渐降低。去甲斑蝥素钠在肠、胃和子宫的分布最高，肾和睾丸次之，在心、肝、脾和肺的

7、分布 较低，脑中药物量极低。组织药 - 时曲线下面积和平均滞留时间数据根据DAS 2.0计算小鼠灌服去甲斑螫素钠溶液后各组织药-时曲线下面积（AUC和平均滞留时间（MRT ,以AUE指标进一步分析去甲斑螫素钠在小鼠组织的分布，以 MRT 为指标分析去甲斑蝥素钠在小鼠组织的消除情况。由结果可知，给药后各组织药时曲线下面积依次为：小肠胃 子宫 肾 睾丸 肝肺 脾心脑。给药后各组织体内平均滞留时间依次为：肺肝睾丸 脑脾肾子宫 心胃小肠。讨论给药后各组织药时曲线下面积依次为：小肠胃 子宫 肾 睾丸肝肺 脾 心脑。给药后各组织体内平均滞留时间依次为：肺肝睾丸脑脾肾子宫心胃小肠。由此可以看出，去甲斑蝥素钠

8、在胃、小肠等消化道组织中分布最高，为其在消化道癌症的临床应用提供药动学理论依据; 其次，子宫中去甲斑蝥素钠的分布较多，体外实验证实去甲斑蝥素对宫颈癌（HeLa）具有较强的抗癌作用，但临床在子宫癌或宫颈癌的应用较少，可以此为理论基础增加其临床适应症; 去甲斑蝥素钠在肾中的分布仍较高，临床表现为泌尿系统刺激性 ; 去甲斑蝥素钠在临床主要用于肝癌的治疗，但实验结果表明肝中去甲斑蝥素钠的浓度较低 ; 药物在睾丸、肺、脾、心和脑的分布较低，特别是脑组织中的浓度极低，说明 其不易透过血脑屏障，与其极性大、脂溶性低有关。给药后各组织体内平均滞留时间依次为：肺肝睾丸 脑脾肾子宫心胃小肠，其在肺和肝中的滞留时间较长，消除比较慢，可以增强药物的疗效，因此临床常用于肝癌的治疗。从两项结果可以看出，去甲斑蝥素钠在分布较高组织滞留时间较短，分布较低的组织 滞留时间较长，决定其在临床上作用广泛。参考文献：董成 .