《药物分析》3药物杂质检查剖析-共106页课件

1、第三章 杂质检查药物中杂质的来源及其种类一般杂质检查特殊杂质检查无治疗作用：Cl-、SO42-影响药物的稳定性和疗效：水分（青霉素钠）对人体健康有害的物质： 砷、重金属杂质的概念第一节 药物中杂质的来源及其种类（一）药物纯度及化学试剂纯度 纯度：纯净程度 杂质是影响纯度的主要因素 纯度检查即杂质检查一、杂质的来源安全性有效性稳定性生理作用试剂规格药用规格适用范围目的稳定性等合 格不合格化学纯CP分析纯AR优级纯GR基准试剂光谱纯试剂色谱纯试剂一、杂质的来源考虑因素级别一、杂质的来源硫酸钡（BaSO4）试剂或药用检查项目试剂规格氯化物、铁、灼烧失重等药用规格酸溶性钡盐、重金属、砷盐等。存在可溶性

2、钡盐则导致医疗事故 一、杂质来源1.生产中引入2.贮存中引入原料，中间体，副产物；试剂，溶剂，催化剂；器皿，装置，管道；制剂过程中产生；保管不当；贮藏时间过长；温度、湿度、光、空气；微生物作用；A.原料不纯或部分未反应完全的原料造成B.合成过程中产生的中间体或副产物分离不净造成C.需加入的各种试剂产生吸附，共沉淀生成混晶等造成D.所用金属器皿及装置等引入杂质E.由于贮藏不当，日光曝晒使产品发生分解引入的杂质 互动：生产过程中引入杂质的途径为二、杂质的种类分类方法杂质种类代表成分按性质分类影响药物稳定性金属离子、水毒性杂质重金属、砷盐信号杂质氯化物、硫酸盐按来源分类一般杂质广泛，附录特殊杂质特殊

3、，正文三、药物的杂质检查方法杂质限量：在不影响药物疗效、稳定性及不发生毒性的前提下，药物中所含杂质的最大允许量。表示方法：百分之几（%）或百万分之几（ppm）杂质的限量检查：一般不要求测定其含量，而是检查杂质的量是否超过限量方法：对照法灵敏度法比较法三、药物的杂质检查方法（一）对照法取一定量待检杂质的对照液与一定量供试品液在相同条件下处理后，比较反应结果，从而判断供试品中所含杂质是否超过限量仪器：纳氏比色管三、药物的杂质检查方法（一）对照法特点：需要对照品，不能准确测定杂质含量注意：平行原则；正确比浊、比色；结果不合格应复检两份结果判断：比色或比浊有色白色沉淀或浑浊白色衬底黑色衬底样品管对照管

4、合格三、药物的杂质检查方法（一）对照法限量计算：注意单位统一！取本品2.0g，加水100ml，加热溶解后，冷却、滤过，取滤液25ml，依法检查，与标准硫酸钾溶液1.0ml（100g/ ml SO4）制成的对照液比较，不得更浓。计算硫酸盐的限量。对乙酰氨基酚中硫酸盐的检查三、药物的杂质检查方法（二）灵敏度法以检测条件下反应的灵敏度来控制杂质限量特点：不需对照品纯化水中氯化物的检查50ml纯化水中加入硝酸5滴及硝酸银试液1ml，要求不得发生浑浊三、药物的杂质检查方法（三）对照法取供试品一定量依法检查，测得待检杂质的吸收度或旋光度等与规定的限量比较，不得更大特点：不需对照品；能准确测定杂质含量硫酸阿

5、托品中莨菪碱的检查取本品，按干燥品计算，加水溶解并制成每1ml中含50mg的溶液，依法测定，旋光度不得过-0.40。三、药物的杂质检查方法（二）灵敏度法肾上腺素中肾上腺酮的检查规定：A310nm0.05取本品0.20g，置100ml量瓶中，加盐酸溶液(92000)溶解，并稀释至刻度，摇匀，在310nm处测定吸光度，不得超过0.05，E为453，求酮体的限量。肾上腺素中肾上腺酮的检查第二节 一般杂质检查一般杂质：在自然界中分布较广，多数药物的生产和贮存过程中容易引入的杂质方法：多采用对照法注意：遵循平行原则（一）检查原理一、氯化物检查白色浑浊（二）检查方法一、氯化物检查供试品稀HNO310mlH

6、2OAgNO31ml标准溶液稀HNO310mlH2OAgNO31ml暗处放置5min(避免AgCl分解)（三）注意事项一、氯化物检查注意事项内 容标准氯化钠溶液临用现配，浓度：10gCl-/ml，用量：5.08.0ml加入稀硝酸目的：加速氯化银混浊的生成,避免产生碳酸银、氧化银、磷酸银沉淀。稀硝酸10ml为宜先中和为中性后再检查避免硝酸银在碱性条件下生成氢氧化银和氧化银。反应，观察方式暗处反应，黑色背景，从上向下观察（三）注意事项一、氯化物检查注意事项内 容供试品处理药物不溶解：有机氯：溶液有颜色：内消色法水或水，加热使所含氯化物溶解过滤除去不溶物药物取滤液检查适当的有机方法破坏药物无机氯，依

7、法检查供试品2倍量量量样品 过滤至澄清对照二者平行试验，比较对照与样品的浑浊程度内消色法（倍量法）：20ml稀硝酸1ml硝酸银标准Cl-和1ml硝酸银1ml硝酸银一、氯化物检查（三）注意事项：1mlAgNO3过滤对照管样品管2倍HNO31mlAgNO31mlAgNO32倍量样品1/21/2一、氯化物检查（三）注意事项：内消色法示意图标准Cl-（三）注意事项一、氯化物检查注意事项内 容碘（溴）化物中氯化物的检查A. 所用比色管需配套B. 稀硝酸酸性下(10ml/50ml)C. 避光放置5分钟D. 用硝酸银标准溶液做对照E. 在白色背景下观察 互动：下列哪些为药物中氯化物检查的必要条件（一）检查原

8、理二、硫酸盐检查白色浑浊（二）检查方法二、硫酸盐检查供试品标准溶液稀HCl 4ml稀HCl 4mlH2OH2O25%BaCl21ml25%BaCl21mlH2OH2O摇匀，放置10min（三）注意事项二、硫酸盐检查注意事项内 容标准硫酸钾溶液标准硫酸钾溶液：0.1mgSO42-/ml比浊范围：0.1-0.5mg/50ml标准硫酸钾溶液取量：1.0-5.0ml酸性条件加入盐酸，防止CO32-、PO43-与Ba2+生成沉淀干扰，以50ml中含稀盐酸2ml为宜，酸度超过，灵敏度会下降A. 标准氯化钡B. 标准醋酸铅溶液C. 标准硝酸银溶液D. 标准硫酸钾溶液 E. 以上都不对 互动：药物中硫酸盐检查

9、时，所用的标准对照液三、铁盐检查法 （一）原理：HCl防止Fe3+水解氧化Fe2+ 为Fe3+防止硫氰酸铁受光照还原或分解 过量（二）检查方法三、铁盐检查供试品显色，立即与同法制成的对照溶液比较加水溶解25ml稀HCl 4ml过硫酸铵 50mg加水稀释35ml30%硫氰酸铵溶液3ml加水定容三、铁盐检查（三）注意事项注意事项内 容标准铁溶液用硫酸铁胺FeNH4(SO4)212H2O配制贮备液，加入硫酸防止水解。标准铁溶液：10g/ml。10-50gFe/50ml为宜，应取1.0-5.0ml。酸性条件盐酸4ml为宜，防止铁水解过硫酸胺将Fe2+氧化成Fe3+，防止硫氰酸铁光照还原或分解处理样品加

10、硝酸不再加过硫酸胺，但必须加热除去一氧化氮 A. 使药物中铁盐都转变为Fe3+ B. 防止光线使硫氰酸铁还原或分解褪色 C. 使产生的红色产物颜色更深 D防止干扰 E便于观察、比较 互动：中国药典规定，硫氰酸铵法检查铁盐时，加入过硫酸铵的目的四、重金属检查重金属：在实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠试液作用而显色的金属杂质。以铅为代表 方法适用范围硫代乙酰胺法无需有机破坏，在酸性条件下可溶解的无色药物中的重金属检查炽灼法含芳环、杂环以及不溶于水、稀酸及乙醇的有机药物中的重金属检查硫化钠法溶于碱而不溶于稀酸或在稀酸中即生成沉淀的药物中重金属杂质的检查四、重金属检查黄色至棕黑色混悬液（一）检查原理第

11、一法和第二法：第三法：四、重金属检查（二）操作方法：第一法供试品标准溶液醋酸盐缓冲溶液2mlH2O硫代乙酰胺试液2ml供+标醋酸盐缓冲溶液2mlH2O醋酸盐缓冲溶液2mlH2O甲乙丙当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检查四、重金属检查（二）操作方法：第二法 缓缓炽灼 放冷 H2SO4 0.5-1.0ml供试品 炭化 加热 HNO3 500-600H2SO4 除尽 放冷 完全灰化 蒸干HCl 2ml 水15ml 中性 按第一法检查 蒸干 氨试液注意：做空白试验 四、重金属检查（二）操作方法：第三法供试品标准溶液Na

12、OH5ml20mlH2O5滴Na2S试液摇匀NaOH5ml20mlH2O5滴Na2S试液（三）注意事项注意事项内 容反应环境醋酸盐缓冲液 (pH 3.5) 标准铅溶液Pb(NO3)2 10g/ml炽灼温度在用第二法检查时, 炽灼温度控制在500600，温度太低灰化不完全，温度过高重金属挥发损失硫化钠临用现配第三法中，显色剂硫化钠试液对玻璃有一定的腐蚀性，而且久置会产生絮状物，应临用前配制四、重金属检查 A. 硫化氢试液 B. 硫代乙酰胺试液 C. 硫化钠试液 D. 氰化钾试液 E. 硫氰酸铵试液互动：重金属检查法中，所使用的显色剂A. 用硫代乙酰胺为标准对照液B. 用10ml稀硝酸/50ml酸

13、化C. 在pH3.5醋酸盐缓冲溶液中D. 用硫化钠为试液E. 结果需在黑色背景下比较互动：葡萄糖中进行重金属检查时，适宜的条件 现有一药物为苯巴比妥，欲进行重金属检查，应采用中国药典上收载的重金属检查的哪种方法？互动：重金属检查方法选择（一）古蔡法 五、砷盐检查法 ：毒性杂质1、原理：三价As五价AsZn+HClAsH3HgBr2试纸砷斑五价砷的反应较慢，需先还原为三价砷 古蔡法 二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 黄棕色中国药典 醋酸铅棉花药物避免硫化物的干扰HgBr2试纸HCl+SnCl2+KI5min+ZnAsH3砷斑（一）古蔡法 2.操作方法五、砷盐检查（一）古蔡法3.注意事项

14、注意事项内 容碘化钾、氯化亚锡作用As5+还原成As3+，加快反应速度醋酸铅棉花排除硫化物的干扰标准砷溶液三氧化二砷，1g/ml，取用量2ml五、砷盐检查（一）古蔡法3.注意事项注意事项内 容砷斑遇光、热、湿褪色反应完毕立即比色供试品若为硫化物加HNO3处理，使氧化成硫酸盐 供试品若为铁盐 事前处理，先加酸性SnCl2试液，使Fe3+成Fe2+环状药物有机破坏（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 1、原理：加入有机碱三乙胺有利于反应向右进行 红色胶态银三价As五价AsZn+HClAsH3五、砷盐检查目视比色法510nm 测定A值（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 2.

15、检查方法Ag(DDC)红色胶态银五、砷盐检查（二）二乙基二硫代氨基甲酸银法（Ag-DDC法） 3.优点：（1）灵敏度高（2）Sb干扰小：实验条件下，500g锑不干扰（3）可限量（对照法）、可定量（比较法）五、砷盐检查A. 除去I2 B. 除去AsH3C. 除去H2S D. 除去HBrE. 除去SbH3互动：在用古蔡法检查砷盐时，导气管中塞入醋酸铅棉花的目的 A将As5+还原为As3+ B有利于AsH3生成反应 C抑制SbH3的生成 D形成Zn-Sn齐以均匀而连续地发生氢气 E催化加速生成AsH3互动：Ag-DDC法检查砷盐时，加入碘化钾和酸性氯化亚锡的作用干燥失重：药物在规定的条件下，经干燥至

16、恒重后所减失的重量，通常以百分率表示。控制对象：药物中水分以及挥发性物质，如乙醇等六、干燥失重测定法（一）常压恒温干燥法适用范围：受热较稳定的药物操作方法：扁形称量瓶(W1)、干燥箱（烘箱）供试品（研细）平铺于扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定(W2)。干燥温度一般为105，达指定温度后干燥24小时，取出置干燥器中放冷至室温,称重，再干燥（1h），直至恒重，称重W3。六、干燥失重测定法（一）常压恒温干燥法六、干燥失重测定法 干燥失重%=W2-W3W2-W1100%六、干燥失重测定法（一）常压恒温干燥法1.药物含有较大量的水分，熔点又低硫代硫酸钠Na2S2O35H2O先在4050加热，使结

17、晶水缓缓释去；然后逐渐升高温度，在105干燥至恒重，减失重量不得超过32.0 37.0%2.药物含有较大量的水分，熔点较高枸橼酸钠（2个结晶水）：180 干燥特殊情况六、干燥失重测定法（二）干燥剂干燥法适用范围：受热易分解或易挥发的药物操作方法：将供试品置于干燥器内，利用干燥器内的干燥剂（变色硅胶，硫酸和五氧化二磷 ）吸收供试品中的水分，干燥至恒重六、干燥失重测定法（三）减压干燥法1.减压恒温干燥法适用范围：熔点低，受热不稳定、能耐受一定温度及水分难赶除的药物2.减压室温干燥法适用范围：熔点低并且不能加热的药物六、干燥失重测定法（三）减压干燥法减压干燥器真空干燥箱甲睾酮，熔点：163167Ch

18、.P规定取本品，在105干燥2h，减失重量不得超过1.0%。 苯佐卡因，熔点：8891Ch.P规定在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重，减失重量不得超过0.5%。布洛芬，熔点：74.577.5Ch.P规定在五氧化二磷干燥器中减压干燥至恒重，减失重量不得超过0.5%。 互动：干燥失重测定方法选择六、干燥失重测定法（四）热重分析法热重法是在程序控制温度下，测量物质质量与温度关系的一种技术记录质量变化对温度的关系曲线即热重曲线。G七、水分测定法干燥失重与水分测定区别项目概念对象干燥失重药品在规定条件下干燥至恒重后所减 失重量的百分率吸湿水、结晶水和挥发性物质水分测定测定供试品中的水分水（一）测定原理：费休

19、法非水溶液中的氧化还原滴定费休试液：碘、二氧化硫、吡啶和甲醇终点指示：自身指示法（I2浅黄色出现） 永停法 七、水分测定法（二）操作方法 七、水分测定法A:供试品消耗滴定液体积，mlB:空白实验消耗滴定液体积，mlW:供试品取样量F:滴定度（三）注意事项吡啶和甲醇的作用： 由于反应是可逆的，为使反应向右进行完全，加入无水吡啶定量地吸收HI和SO3，形成氢碘酸吡啶（C5H5NHI）和硫酸酐吡啶（C5H5NSO3） 但生成的硫酸酐吡啶不够稳定，加入无水甲醇可使其转变成稳定的甲基硫酸氢吡啶（C5H5NHSO4CH3） 七、水分测定法 精密称取本品0.7540g，置干燥具塞玻瓶中，加无水甲醇5ml充分

20、振摇后，用费休试液滴至溶液由浅黄色变为红棕色，消耗费休试液2.15ml；另取无水甲醇5ml，同法测定，消耗费休试液0.15ml，求青霉素钠的含水量（已知每1ml费休试液相当于3.52mg的水）。互动：注射用青霉素钠水分测定炽灼残渣：检查非金属有机药物中的非挥发性无机杂质(主要是金属氧化物、无机盐) 八、炽灼残渣检查法炽灼至完全炭化 加硫酸，700800炽灼使完全灰化 八、炽灼残渣检查法注意事项：1.重金属在高温下易挥发，如供试品需将残渣留作重金属检查，则炽灼温度须控制在5006002.含氟药物对瓷坩埚有腐蚀，需用铂坩埚0.1%0.2%检查药物中遇H2SO4易炭化或易被氧化呈色的微量有机杂质方法

21、：药物加H2SO4炭化后与对照液比较，同置白色背景前，平视观察比较对照液： “溶液颜色检查”项下的标准比色液；由比色用氯化钴液，比色用重铬酸钾液，比色用硫酸铜液按规定方法配成的对照液；高锰酸钾液九、易炭化物检查法 控制药物在生产过程或贮藏过程中产生有色杂质限量的方法（一）目视比色法K2CrO7、CoCl2、CuSO4溶液5种色调标准贮备液5种色调各10个色号标准比色液十、溶液颜色检查法 不同比例不同量水稀释十、溶液颜色检查法 对乙酰氨基酚乙醇溶液的颜色检查 取本品1.0g，加乙醇10ml溶解后，如显色，与棕红色2号或橙红色2号标准比色液比较，不得更深（二）分光光度法单一波长定量（三）色差计法全

22、波长范围定量本法是通过色差计直接测定溶液的透视三刺激值，对其颜色进行定量表述和分析的方法测色仪器一般为光电积分型色差计 十、溶液颜色检查法 检查药物中的微量不溶性杂质，用作注射剂的原料药一般应作此项检查检查方法：对照法对照液：浊度标准液十一、澄清度检查法 （一）酸碱滴定法十二、酸碱度检查法 NaCl酸碱度检查溴麝香草酚兰2dNaCl5g水50mlpH=6.07.6黄色蓝色NaOH（0.02M）0.10ml蓝色HCl（0.02M）0.2ml黄色（二）指示剂法十二、酸碱度检查法 纯化水的酸碱度检查10ml纯化水甲基红2滴溴麝香草酚兰2滴pH=4.2-6.2不得显红pH=6.0-7.6不得显蓝10m

23、l纯化水（三）pH测定法 药典中规定注射液、注射用水、灭菌注射用水必须用酸度计测定pH值 5%葡萄糖注射液pH值应为3.26.5 而原料药规定用滴定法十二、酸碱度检查法 残留溶剂：原料药或辅料生产以及制剂制备过程中使用的、在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂测定方法：GC十三、残留溶剂测定法 中国药典规定：某些中药及其制剂需要进行灰分检查生理灰分：将纯净而无杂质的中药或其制剂经粉碎后高温炽灼至灰化，其细胞组织及其内含物（各种盐类 ）成为灰烬而残留在生理灰分相对稳定的前提下，如果总灰分含量超限，则说明药品含有过多的泥沙（主含硅酸盐）等外来杂质十四、灰分检查法 灰分检查：总灰分和酸不溶性灰分总灰分：

24、主要为生理灰分和少量允许存在的外来无机杂质（泥沙等）酸不溶性灰分：总灰分加盐酸处理后，得到的不溶于盐酸的灰分十四、灰分检查法 按化学成分分为：有机氯化合物、有机磷化合物、氨基甲酸酯、有机氮化合物、拟除虫菊酯、有机氟化合物、有机锡化合物等采用气相色谱法测定中药及其制剂中部分有机氯类、有机磷类和拟除虫菊酯类农药的限量十五、农药残留量检查法 第三节 特殊杂质检查（一）杂质检查项目确定的原则1.新药中的杂质检查项目 新药质量标准中杂质检查的项目应包括经质量研究和稳定性考察检出的，并在批量生产中出现的杂质和降解产物。制剂中主要控制在制备和贮藏过程中产生的降解产物等杂质，一般不再检查原料中已检查的杂质。一

25、、杂质检查项目与限度（一）杂质检查项目确定的原则2.仿制药中的杂质检查项目 根据已有标准确定，如发现其杂质检查模式与其原始开发药品不同或与已有法定质量标准不同，需增加新的杂质检查项目，并申报一、杂质检查项目与限度（一）杂质检查项目确定的原则3.确定药品中的杂质检查项目的原则 （1）对于表观含量在0.1%及其以上的杂质以及表观含量在0.1%以下的具强烈生物作用的杂质或毒性杂质，予以定性或确证其结构。一、杂质检查项目与限度（一）杂质检查项目确定的原则3.确定药品中的杂质检查项目的原则 （2）共存的异构体和抗生素多组分一般不作为杂质检查项目，作为共存物质，必要时规定其比例。对于单一对映体，其可能共存

26、的其他对映体应作为杂质检查。消旋体药物，当已有其单一对映体药物的法定质量标准时，应在该消旋体药物的质量标准中设旋光度检查项目。一、杂质检查项目与限度（一）杂质检查项目确定的原则3.确定药品中的杂质检查项目的原则 （3）对残留的毒性溶剂，应规定其检查项目一、杂质检查项目与限度（二）质量标准中杂质限度制订依据1.应考虑的因素 杂质及含一定限量杂质的药品的毒理学研究结果；给药途径；每日剂量；给药人群；杂质药理学可能的研究结果；原料药的来源；治疗周期；在保证安全有效的前提下，药品生产企业对生产高质量药品所需成本和消费者对药品价格的承受力一、杂质检查项目与限度（二）质量标准中杂质限度制订依据2.药品质量标准对毒性杂质和毒性残留溶剂应严格规定限度3.药品质量标准中一般应有单个杂质限量和总杂质限量的规定一、杂质检查项目与限度杂质限量：专属性强、灵敏度和准确度高杂质定量：准确度、精密度、专属性、定量限、线性、范围和耐用性二、检查方法的选择与要求（一）物理法1.臭味及挥发性的差异（乙醇中检查杂醇油）2.颜色的差异（维生素C溶液颜色检查：加水溶解应澄清无色）三、常用的检查