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文档简介

1、实验一 家兔血浆中头孢呋辛分析方法的建立药代动力学实验实验目的加深理解药代动力学实验中体内药物分析的理论知识、定量分析方法及原理。掌握血浆生物样本前处理方法。掌握高效液相色谱法（HPLC）的操作方法和注意事项。掌握标准曲线的制作方法及绘制注意事项。熟悉生物样本分析方法验证的流程。实验原理头孢呋辛酯在体内水解后释出头孢呋辛而发挥其抗菌活性。头孢呋辛酯脂溶性强，口服吸收良好，吸收后迅速在肠粘膜和门脉循环中被非特异性酯酶水解为头孢呋辛，因此，建立HPLC法测定血浆中头孢呋辛的浓度。实验原理内标法根据SFDA对生物样本分析方法确证的指导原则，对本方法的专属性、准确度、精密度及回收率、线性和稳定性等指标

2、进行了考察本次实验主要考察线性和准确度实验操作一、溶液配制1、头孢呋辛标准储备液：精密称取头孢呋辛10 mg，加入溶液10 mL（甲醇：水=1:1）溶解，得头孢呋辛浓度为1.0 mg/mL的储备液，放4冰箱储存。2、内标物标准液：精密称取对乙酰氨基酚15 mg，加入溶液10 mL（甲醇：水=1:1）溶解，得浓度为1.5 mg/mL的储备液，放4冰箱储存。取对乙酰氨基酚储备液100 L，加入溶液900 L（甲醇：水=1:1），得浓度为150 g/mL的内标液。按下表取不同体积头孢呋辛储备液于EP管中，用稀释液溶液（甲醇：水=1：1）进行梯度稀释，制备一系列不同浓度的标准工作液（1000 L）。取

3、6份空白血浆（80 L），加入不同浓度的头孢呋辛标准工作液20 L，对乙酰氨基酚内标液（150 g/mL）10 L，涡旋10s混匀。标准曲线血浆样本制备按照以下表格制备低、中、高三个浓度的质控标准液。取不同浓度的质控标准液20 L，分别加入80 L空白血浆中，加入乙酰氨基酚内标液（150 g/mL）10 L，涡旋10s混匀。每个浓度制备两份质控样本。质控血浆样本制备（1）待测样本（标准曲线和质控血浆样本）涡旋10 s，加入甲醇300 L，涡旋1min，静置3 min。（2）12000 rpm离心5 min，取上清液200 L常温真空干燥12小时。（3）待溶剂挥干后，加入100 L甲醇水溶液（水：甲醇 = 8：2）溶解，涡旋1min，12000 rpm离心5 min。（4）取上清液60 L至有内称管的进样瓶（需检查内称管底部是否有气泡，否则底部有气泡影响进样，有气泡需甩一下），进样20 L。血浆样本预处理色谱条件 流动相：0.05M磷酸二氢钾：甲醇梯度洗脱，设置如下： 检测波长：271 nm 结果记录：分别记录各浓度标准样品及内标峰的面积。绘制标准曲线。数据处理：待实验四结束后，一起完成计算获得标准曲线和质控样本的相应数据。注意事项注意有机溶剂的安全使用。注意对EP管进行编号，避免不同浓

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