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文档简介

1、动物组织中核酸的提取及其组成成分的鉴定生物化学与分子生物学实验 CQMU1【实验目的】了解本实验设计思路学习离心技术，掌握离心机的正确使用2【实验思路】动物肝组织核酸水解核酸核酸沉淀物糖、磷酸、碱基分别鉴定3 生物大分子制备方法的选择是以生物大分子的性质（如分子大小、形状、溶解度、带电性质等）为依据，对于结构和理化性质不同的生物大分子，所选用的分离提纯方法也不相同。 生物化学常用实验手段：比色、层析、电泳和离心四大技术。【实验原理】4【实验原理】一、动物细胞中核酸的存在形式二、核酸分离 肝匀浆 三氯醋酸沉淀出核蛋白 95%乙醇加热除去附着在沉淀上的脂类杂质5【实验原理】10%氯化钠从核蛋白中分

2、离出核酸(钠盐形式) 乙醇沉淀核酸钠三、核酸水解 核酸（DNA+RNA） 硫酸 碱基（嘌呤、嘧啶）+戊糖（核糖、脱氧核糖） +磷酸6【实验原理】四、鉴定1磷酸：用钼酸铵与之作用可生成磷钼酸，磷钼酸可被氨 基奈酚磺酸还原形成蓝色钼蓝。2戊糖 核糖：用硫酸使之生成糠醛，糠醛与3,5-二羟甲苯缩合而成为一绿色化合物： 7【操作】1.制备匀浆 猪肝2.分离抽提肝匀浆倒入刻度离心管4ml立即加入2%三氯醋酸4ml搅匀搅匀后离心（3000转/分，3分钟）倾去上清液，沉淀中加入95%乙醇4ml搅匀在沸水浴中加热至沸2分钟取出流水冷却后离心（3000转/分，3分钟）8倾去上层酒精液，离心管倒置于滤纸上，倒干乙

3、醇沉淀物中再加入10%NaCl溶液4ml搅匀再置于沸水浴中加热5分钟，用玻棒不断搅拌取出流水冷却后再离心（3000转/分，3分钟）将上清液倒入小烧杯内取等量95%乙醇，逐滴加入小烧杯白色沉淀物，静置2分钟，转入离心管再离心（3000转/分，5分钟）倾去上清液，即得到核酸钠的白色沉淀93.核酸水解含有核酸离心管加入5%H2SO4溶液3ml用玻棒搅匀，在沸水中加热8-10分钟核酸水解液104.RNA和DNA成分鉴定1）磷酸的鉴定：试剂（滴）水解液5硫酸钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸观察变化测定管101020沸水浴加热至变色对照管101020112.核糖的鉴定试剂（滴）水解液5硫酸3、5二羟甲苯观察变化测定管106沸水浴加热至变色对照管10612离心机使用注意事项：1.记住离心管编号；2.离心管必须先平衡后才对称放入离心机；3.避免

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