中药材龙胆草的质量标准检测分析研究 药学专业

1、 III中药材龙胆草的质量标准检测摘 要目的：本文将以中药材龙胆草为研究对象，制定龙胆草的质量标准检测实验。方法：拟对其进行药材性状，薄层鉴别，水分测定，灰分测定，酸不溶性灰分测定，浸出物的测定，含量检测等质量标准检测方法对龙胆进行检测。结果：此批龙胆草的质量标准检测如以下实验数据所示：龙胆草性状，表面粗糙，颜色为褐色，边缘微微卷曲，有淡淡的清香，根苦；龙胆草的水分测定结果一共为6份，12组，全部达到标准要求为小于15%；灰分检测结果此批龙胆草都没有达到标准要求的不得大于7%，此项不合格；然后酸不溶性灰分测定，在加入稀盐酸的基础上进行检测，实验结果表明，酸不溶性成分依旧大于标准要求的2.0%，

2、因此为不合格项；然后进行浸出物的实验，实验结果显示，浸出物的含量均大于标准要求的20.0%，此项检测为合格项；薄层色谱法的展开剂，我们用了两种不同浓度的展开剂进行对比实验，乙酸乙酯-甲醇-水（10:2:1）的展开剂和乙酸乙酯-甲醇-水（20:2:1）的展开剂，实验结果表明，展开剂的浓度不同就会使RF值的大小有所偏差，龙胆苦苷的含量测定结果只有一项为0.4%，小于了标准要求，其余的为合格项。结论：本实验方法简单，易懂容易操作，重复性大，能够有效的控制龙胆草的质量，为龙胆草质量评价提供参考。关键词：龙胆草;龙胆苦苷; 质量标准Abstract Objective: to establish the

3、 quality standard test of gentian grass with Chinese medicinal material Gentiana as the research object. Methods: the properties of medicinal materials, thin layer identification, moisture determination, ash determination, acid insoluble ash determination, extract determination, content detection an

4、d other quality standard detection methods were used to detect gentian. Results: the quality standard of Gentiana tenuifolia was as follows: Gentiana vulgaris, rough surface, brown color, slightly curly edge, light fragrance and bitter root; The results of moisture determination of gentian grass wer

5、e 6 samples, 12 groups, all of which met the standard requirements of less than 15%, and the ash content test results were less than 15%. This batch of gentian grass does not meet the requirements of the standard should not be more than 7%, this is not up to standard; Then the acid insoluble ash was

6、 determined and detected on the basis of adding dilute hydrochloric acid. The experimental results showed that the acid insoluble composition was still more than 2.0% of the standard, so it was an unqualified item. Then the experiment of leachate was carried out. the experimental results showed that

7、 the content of leachate was more than 20.0% of the standard, and the test was qualified. For the development of thin layer chromatography, we used two different concentrations of developing agents, ethyl acetate-methanol-water (10:2:1) and ethyl acetate-methanol-water (2). The experimental results

8、show that the RF value will be deviated when the concentration of the developer is different. The content of gentiopicrin is only 0.4%, which is less than the standard requirements, and the rest are qualified items. Conclusion: this experimental method is simple, easy to understand and easy to opera

9、te, and has great reproducibility. It can effectively control the quality of gentian grass and provide reference for the quality evaluation of gentian grass.Key words: gentian grass；gentiopicrin；quality standard 一 绪 论1.1龙胆草简介龙胆草其原名为龙胆，别名还有：胆草，草龙胆，山龙胆。拉丁文名：Gentiana scabra Bunge. 通过调查研究显示，龙胆草属于龙胆科、龙胆属

10、多年生草本，龙胆草系20世纪70年代四川省发掘的民间草药，广泛分布于我国云南、贵州、四川、广西、湖北等省区，河南和陕西也有少量分布，还有川西南、滇北山区海拔 11002500m的山原、草坡及疏林地带，四川省米易县是主产地之一全草入药，具有清热除湿，解毒泻火，止咳的功效，主要治疗肺热咳嗽，湿热黄疸和小便不利等症状1，2。龙胆草为常用的中药材，在历代的本草均有详细记载。目前以龙胆为原料的中药品种比较难能准确统计，估计大概已有 500 个。2005年版中国药典收载含龙胆的成药处方有龙胆泻肝丸、清热解毒口服液、黄连羊肝丸等6首，因此为检索词在Google上进一步引申检索可知全国有超过 580个厂(次)

11、 生产这些品种。从古至今，龙胆这一中药品种在治病救人，可见在维护人们的健康方面的作用显得十分的重要了。龙胆的现代研究，产品的开发离不开本草文献，需对龙胆的应用传承进行系统梳理，无疑能成为龙胆及其中成药的现代化，标准化研究提供理论依据1。1.1.2龙胆草分布地区四川、贵州、云南三省。主产凉山州各县。1.1.3龙胆草的生态环境生于海拔26003500m的山坡阴处灌丛下。1.1.4采收加工秋末冬初采收，除去泥沙，干燥。1.1.5龙胆草的主要成分本品含龙胆苦苷和当药苦苷等成分。1.1.6炮制方法除去泥沙，杂质，淋润，切段，干燥。1.2中药材龙胆草质量标准研究的目的与意义中医药是中华民族优秀的文化历史，

12、也是中国现代文明的重要组成部分之一，并且为中华民族的繁衍，健康都做出了不可否定的贡献1。中药是我国甚至在国际上具有竞争力的产业之一，以中国传统医药理论指导采集、炮制、制剂，说明作用机理，并且能指导临床使用的药物，统称为中药1。言而总之，中药就是指在中医理论指导下，能用于预防、医治、诊断疾病并具备病愈与保健功效的物质1。并且中药材这个行业是拥有独立知识产权的产业，由于目前中药品种，质量存在着严重的问题，许多中药缺乏科学的检测标准，严重的影响和阻碍了中医，中药的发展1，2。龙胆草做为我们常见的一种保肝药物，与人们的生活密切相关。龙胆草中最主要有效成分为龙胆苦苷，但由于不同产地不同采期的龙胆其龙胆苦

13、苷含量差异十分明显，优良不等2。内在品质不一样，并且疗效也会不同，这一问题就会造成龙胆草的入药剂量难以把握，给患者带来不良的反应2。近几年，常常有由于服用不良的中成药，导致患者肾衰竭的新闻，使传统中医药备受到人们的质疑，因此制定中药相关质量标准就显得更加刻不容缓了2。1.3龙胆草的化学研究进展现状目前经过学者们的长期研究，国内外的学者们已经从龙胆中分离出，得到多种裂环烯醚菇普类成分、多糖类成分、生物碱类成分等3。龙胆草除用于龙胆草浸膏片等药物以外，也被添加入化妆品，饲料等中1。李小斌，徐磊等采用高效液相色谱、梯度洗脱及灵敏度更高的VWD，检测建立龙胆草提取物中5种黄酮物质的测定方法，并对其精确

14、度、回收率等进行评价4。比较不同来源龙胆草提取物对其5种黄酮物质含量的影响。赵露，孟琦等用Xevo TQMS三重四级杆质谱(美国Waters公司) ，ACQUITY UPLC超高效液相色谱仪(美国waters公司) 来检测龙胆苦苷、獐牙菜苷、獐牙菜苦苷、熊果酸、齐墩果酸 5 种主要成分的含量，对表型性状与品质指标间的相关性进行分析，探讨根据表型性状进行单株选择或特征类型筛选的可能性5。苏艳芳，刘建生等采用硅胶柱层析反复分离，光谱方法测定其结构龙胆草黄酮类成分的研究从龙胆草中分得7个黄酮类化合物，根据其理化性质和光谱数据分别鉴定为芦丁 ()、槲皮素 -3-O-葡萄糖苷 ()、圣草素 ()、槲皮素

15、3,4二甲醚 ()、槲皮素 ()、5，8二羟基 7, 3, 4三甲氧基黄酮 ()和山柰酚 ()6。由此可见龙胆草具有非常有价值的研究前景。1.3.1龙胆苦苷的研究现在龙胆苦苷的检测方法有薄层色谱法、高效液相色谱法、紫外一可见分光光度法和高效毛细管电泳法1。药典中采用的是高效液相法作为龙胆苦苷的检测方法，其值不得低于百分之一1。本次实验就是参照四川中药材地方标准和药典来对龙胆苦苷标准品进行检测。其中龙胆苦苷的提取溶剂，最好是以甲醇为主，其次为水、乙醇。但是由于甲醇有毒，在进行大规模的生产中，最好选用乙醇最为良好的选择溶剂。具有较大比表面积和较小孔的非极性树脂对龙胆苦普具有很好的吸附性能，其中是以

16、水为溶媒，也可以将龙胆草中的主要活性成分龙胆苦苷有效的煎制出来，并且也具有较高的煎出率，尤其是在偏酸性条件下进行，煎出率更高7,8。由于龙胆苦苷极易被酶解，龙胆草中也存在降解龙胆苦苷的酶，在室温，或当有水存在时，这类酶的活性会较着增高，可以加快龙胆苦苷向龙胆碱或别的的成份转化。若是以水为溶媒提取龙胆苦苷，宜采用热提方式而不宜采用冷浸方式，破坏药材中酶的活性，从而避免有效成分的破坏与分解，因此龙胆草的加工最好是在采集后尽快洗净，用暴晒，烘烤等方法进行快速干燥，从而防止酶遭到损坏，龙胆药材加工饮片的时候,最好是直接将其切段，并且不宜再浸洗，以避免龙胆草中的有效成分被浸出或者酶解掉，造成龙胆药材的质

17、量下降和用药不稳定等情况的出现7,8。1.3.2龙胆草的质量评价的研究现状药典中收载了龙胆的四种原植物，无论这四种植物产地如何，戴鸣辉等人研究出中药材中的龙胆苦苷含量均超过3%, 高者可达8.39% ，都明显的高于药典规定的1%14。经由对龙胆中龙胆苦苷的含量测定，并且对其药用价值进行评价，结果表明地下的根及根茎龙胆苦苷的含量较高，是首要散布部位，另外，龙胆根中糖类、氨基酸还有苦味成份在休眠期时，与其他各时期都有所不同。龙胆苦苷的含量在生长期逐步增加，然后开花后则减少，直到果实成熟后，再重新增加17。并且龙胆的炮制古今相比有一定创新，以前的甘草的制法已经没有应用了，除酒制和炒炭以外，主要是净制

18、。但净制的过程还是要有待考察深入研究，由于现代研究的表明龙胆草的主要有效成分是龙胆苦苷，其为水溶性成分，在传统的净制过程中容易会有大量有效成分流失等问题，因此常常用浸出的方法来提取有效成分，因此本实验用的浸出法来提取龙胆草中的有效成分18。从古至今，龙胆草的用途很广，现代医学还有药理学的发展为龙胆草药材传统的保肝利胆的作用提供更加科学的支持，但是对于一些新的作用，比如：如何与中医药的辩证术语和方法结合，应用于临床，还需要继续做很多的工作。并且对龙胆草药材的其它的传统作用，包括配伍禁忌、应用禁忌还需要用现代医学，药理学等学科手段来证实9,10。1.4龙胆草的药理作用龙胆味苦，性寒，为清肝胆湿热，

19、泻下焦郁火之经常使用的中药。龙胆草有着悠久的入药历史，始载于神农本草经列为中品，具有泻胆肝火，清热燥湿的功效，用于骨寒热、湿热黄疽，寒湿脚气，咽喉痛，目赤，口苦，阴部湿痒等症状，龙胆在临床上，常用于保肝、利胆，健胃，中枢兴奋作用，抗炎、抗菌作用也很明显，龙胆是常用中药龙胆泻肝汤、泻青丸、当归龙荟丸等方剂的主药，近年来用于健胃、抗肿瘤、治疗急慢性肝炎，乙型脑炎，甲状腺机能亢进等疾病亦取得良好疗效，龙胆在国际上亦为天然药物，被收载为苦味健胃剂11，12。现代药理作用表明龙胆草除具有保肝作用外，还具有降压作用、利尿作用、抗炎作用、抗甲亢作用、对中枢神经系统的作用、提高血糖的作用、对消化系统的作用等多

20、种功效16。 二 实验药材，仪器和试剂2.1实验药材龙胆草500克，供试品：将龙胆草药材粉碎，过三号筛，均匀分成6份，命名为龙胆草-1、龙胆草-2、龙胆草-3、龙胆草-4、龙胆草-5、龙胆草-6备用。2.2实验场地与条件实验场地：重庆理工大学药生学院实验楼c315,c512。室内温度：1020，空气湿度：72%95%，设备及试剂：实验所用所有仪器设备（包括此次用到的芸峰药业有限公司里相关实验仪器设备）均正常运转，实验所有试剂均属于重庆理工大学，均属于正常合格化学试剂，能够保证此次实验研究顺利进行。2.3实验主要仪器仪器公司ZF20D暗箱式紫外分析仪巩义市予华仪器有限公司手动进样高效液相色谱日本

21、SHIMADZU电热恒温鼓风干燥箱上海齐欣科学仪器有限公司电子恒温不锈钢水浴锅上海宜昌仪器纱筛厂粉碎机武义海纳电器有限公司万分电子天平德国sartorius硬质中性毛细玻璃管0.3mm华西医科大学仪器厂超声波清理机宁波新芝生物科技有限公司马弗炉上海钜晶公司硅胶板中国烟台 HSGF2542.4实验主要试剂试剂公司龙胆苦苷（110770201716）中国食品药品检定研究院甲醇（500ml）重庆川东化工集团有限公司 乙醇（500ml）重庆川东化工集团有限公司乙酸乙酯（500ml）成都科隆化学有限公司稀盐酸（500ml）重庆川东化工集团有限公司 乙醇（500ml）重庆川东化工集团有限公司 三 实验步骤

22、3.1龙胆草的性状鉴别本品长1530cm。根茎较粗，微弯曲，长0.57cm，直径0.51cm，表面灰褐色，粗糙，有疣状冒出的茎痕和须根茎。下面具多条须根，长520cm，直径13mm，外表灰棕色或黄棕色，断面有淡黄色的木心。茎近丛生，直径13mm，紫色或黄绿色带紫晕，质脆，断面中空。叶对生，褶皱，稍厚，边缘微向背面反卷，上面绿色或黄绿色，下面色稍淡。完整的叶为宽披针形或倒披针形，长217cm，宽0.52.5cm。花簇生枝端，绿黄色或淡蓝紫色。颜色微清香，茎叶味微苦，根味极苦。见图1（Fig 1）。3.2龙胆草的薄层鉴别取龙胆草粉末大约1g，加入甲醇20mL，超声处理30min后，放冷，滤过。滤液

23、浓缩至约2mL，作为供试品溶液。另取龙胆苦苷对照品，然后加入甲醇制成每1mL含2mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法（中国药典四部 通则）试验，吸取上述两种溶液各5L，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（20:2:1）和乙酸乙酯-甲醇-水（10:2:1）分别为展开剂，展开。取出，晾干。置紫外光灯（254nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的颜色的斑点。见图2（Fig 2），图3（Fig 3）。3.3龙胆草的水分测定恒重称量瓶，两次干燥后精密称量重量差异小于0.3g者备用。取“2.1”项供试品25g，共6组，每组2平

24、行组式样，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，疏松供试品不超过10mm，电子天平精密称定。开启瓶盖在于烘箱中100105干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30 min，电子天平精密称定。再在烘箱中100105干燥1小时，移置干燥器中，放冷30min，电子天平精密称定。重复在烘箱中100105干燥1小时，移置干燥器中，放冷30min操作直至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据减失的重量，计算供试品中含水量（%）。其结果如表4（Table 4）。W（%）= （W1+W2-W3）/W2100%式中：W1为称量瓶恒重（g） W2为供试品重量（g） W3为称量瓶+样品恒重（g）

25、（干燥至连续两次称重的差异不超过5mg）要求：根据减失的重量，计算供试品中含水量（%），测得水分不得过15.0%。3.4龙胆草的灰分测定恒重坩埚，两次干燥后精密称量重量差异小于0.3g者备用。取“2.1”项供试品35g，共6组，每组2平行组式样，置于炽灼至恒重的坩埚中，电子天平精密称定（准确至0.01g)。将坩埚置于马弗炉中，缓缓炽热，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至500，使完全灰化。待其完全灰化后，用坩埚钳小心转移至100烘箱中过渡10min，再小心转移至干燥器中冷却30min，电子天平精密称定，直至连续两次称重的差异不超过5mg为止。根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%）

26、。结果见表五（Table 5）。W（%）=（W1+W2-W3）/ W2100%式中：W1为坩埚恒重（g） W2为供试品重量（g） W3为坩埚+样品恒重（g）（干燥至连续两次称重的差异不超过5mg）要求：根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量（%），测得总灰分不得过7.0%。注：如果供试品不容易灰化，可以将坩埚放冷，加热水或10%硝酸铵溶液2ml，使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，残渣照前法炽灼，至坩埚内容物完全灰化。3.5龙胆草的酸不溶性灰分测定取灰分测定项中所得的灰分，在坩埚中谨慎加人稀盐酸约10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并人坩埚中，用无灰滤纸滤过

27、，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。结果见表6（Table 6）。W（%）=（W1+W2-W3）/ W2100%式中：W1为坩埚恒重（g） W2为供试品重量（g） W3为坩埚+样品恒重（g）（干燥至连续两次称重的差异不超过5mg）要求：根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（%），测得酸不溶性灰分不得过2.0%。注：稀盐酸的配置：取盐酸234mL，加水稀释至1000mL，即得。本液含HCl应为9.5%10.5%。3.6龙胆草的浸出物测定取供试品约24g，精密称定，置100250ml的锥形瓶中。精密加稀乙醇50100m

28、l，密塞，称定重量。将上项供试品静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时。放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过。精密量取滤液25ml，置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。结果见表7（Table 7）。W（%）=（W1+W2-W3）/ W22100%式中：W1为蒸发皿恒重（g） W2为供试品重量（g） W3为蒸发皿+样品恒重（g）（干燥至连续两次称重的差异不超过5mg）要求：除另有规定外，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%），且浸出物含量不得少于20.0%。

29、3.7龙胆草的含量测定高效液相色谱仪的原理：HPLC以液体为流动相，采用的高压输送系统，将具有不同的极性的单一溶剂或者不同比例的混合溶剂，缓冲液等流动泵入装有固定相的色谱柱，在柱子内成分被分离过后，进入检测器检测，从而实现对试样的分析。色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶做为填充剂；以甲醇-水（33:67）为流动相；检测波长为254nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于2000。对照品溶液的制备，精密称取龙胆苦苷对照品适量，加入甲醇制成每1mL含50g的溶液即得。供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，浸渍1

30、2h，再超声处理45min，放冷，用甲醇补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10L，注入液相色谱仪，测定，即得。要求：本品按干燥品计算，含龙胆苦苷（C16H20O9），不得少于0.50%。3.8龙胆草HPLC分析方法建立（1）色谱条件的是依照四川省中药材地方标准作为参考文献，按照高效液相色谱法（中国药典一部 附录 VI D）测定，得到以下色谱条件。色谱柱：Welchrom C18（4.6250 mm, 5m）流动相：甲醇-水（33:67）检测波长：254nm流速：1mLmin-1进样量：10l柱温：25 （2）溶液的配置

31、A.对照品溶液的制备精密称取龙胆苦苷对照品适量，加甲醇制成每1mL含49.675g的溶液即得。B.供试品溶液的制备取本品粉末（过三号筛）约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，密塞，称定重量，浸渍12 h，再超声处理45 min，放冷，用甲醇补足减少的重量，摇匀，用微孔滤膜（0.45m）滤过，取续滤液，即得。（3）方法学考察A.专属性实验取龙胆苦苷对照品、供试品以及阴性对照溶液，在“（1）”项色谱条件下分别进样10L进行色谱分析，记录色谱图，见图8,9,10（Fig 8,9,10）。B.标准曲线的建立将198.7gmL-1对照品贮备液再一次用甲醇将其稀释2、4、8、16、

32、32倍，得到99.35、49.675、24.8375、12.41875、6.20935gmL-1的系列标准品溶液，过0.45m滤膜，在（1）项色谱柱下，分别将标准品溶液进样10L，记录色谱图，以药物浓度C（g.mL-1）为横坐标，峰面积A为纵坐标进行线性回归得回归方程，线性回归方程为：y = 0.0816x - 1.5393（R = 0.9999）并绘制出标准曲线，结果见表11（Table 11），图12（Fig 12）。C.定量限与检测限根据“（1）”项色谱条件下，把6.20935gmL-1 龙胆苦苷对照品溶液做成等比稀释的一系列标准品溶液分别进样10L，记录色谱图。以信噪比S/N=10作为

33、最低定量限浓度，信噪比S/N=3作为最低检测限浓度，见图13,14（Fig13，14）。D.精密度实验根据“（1）”项色谱条件下，将低（6.20935g mL-1）、中（24.8375gmL-1）、高（99.35gmL-1）三种浓度的对照品溶液分别进样10L，1 d进样5次，测定其峰面积，计算日内精密度，1 d进样1次，连续进样5 d，测定其峰面积，计算日间精密度，并计算RSD值，如表15，16（Table15，16）所示，日内精密度RSD为0.30%，0.24%，1.07%，日间精密度RSD为：1.13%，0.57%，0.70%，由结果表明龙胆草对照品精密度良好。E.稳定性实验按“3.8”项

34、下的方法制备供试品溶液，用微孔滤膜（0.45m）滤过，在“2.1”项色谱条件下，分别在0、1、2、3、6、9、12、18、24 h时进样10L，记录色谱图，计算药物含量，如表17（Table17），结果表明24h，测得龙胆草样品-3峰面积RSD为1.84%，即24h内龙胆草供试品测定结果稳定。F.重复性实验根据“3.8”项下的方法平行制备6份供试品溶液，用微孔滤膜（0.45m）滤过，在“1.1”项色谱条件下进行色谱分析，记录色谱图，计算药物含量，重复性RSD为1.88%，如表18（Table 18）所示，结果表明该方法重复性好。G.加样回收率实验精密量取已知含量的供试品溶液0.7mL，置于5m

35、L的容量瓶中，共9份，每3份分别精密加入浓度为193.2gmL-1的对照品溶液0.16mL、0.20mL、0.24mL（相当于其含量的80 %、100 %、120 %），根据“3.8”项下方法制备供试品溶液，用微孔滤膜（0.45m）滤过，在“2.1”项下进行色谱分析，记录色谱图，计算峰面积，计算药物浓度，并根据公式计算回收率，如表19（Table 19）。回收率（%） = (C-A)/B 100%式中 ：A为供试品所含被测成分量B为加入对照品量C为实测值。H.龙胆苦苷含量根据“3.8”项下方法制备三份样品溶液，按“2.1”项色谱条件，计算峰面积，计算龙胆苦苷含量，如表20（Table 20）。

36、 四 实验结果与分析4.1龙胆草的性状鉴别结果 图1： 龙胆草药材性状 Fig 1：Medicinal characters of Gentiana tenuifolia4.2龙胆草的薄层鉴别结果图2：乙酸乙酯-甲醇-水（20:2:1）的展开剂成像Fig 2: ethyl acetate-methanol-water (20:2:1) developing agent图3：乙酸乙酯-甲醇-水（10:2:1）的展开剂成像Fig 3: ethyl acetate-methanol-water (10:2:1) developing agent结果分析：龙胆苦苷为对照品，龙胆草样品制备成供试品，然后

37、薄层色谱法的展开剂，我们用了两种不同浓度的展开剂进行对比实验，乙酸乙酯-甲醇-水（10:2:1）的展开剂和乙酸乙酯-甲醇-水（20:2:1）的展开剂，实验结果表明，在紫外光灯（254nm）下，都有出现清晰的淡黄色斑点，展开剂的浓度不同就会使RF值的大小有所偏差。4.3龙胆草的水分检测结果表4：龙胆草的水分检测结果Table 4：Results of moisture detection of gentian grass样品名称量瓶恒重量（g）供试品重量（g）称量瓶+样品恒重（g）水分（W）龙胆草1-121.5636 2.2068 23.5511 9.94%龙胆草1-222.2325 2.214

38、1 24.2341 9.60%龙胆草2-122.8207 2.2144 24.8239 9.54%龙胆草2-220.6979 2.2068 22.6864 9.89%龙胆草3-120.1064 2.2002 22.0992 9.43%龙胆草3-221.4681 2.2007 23.4632 9.34%龙胆草4-121.7342 2.2005 23.7214 9.69%龙胆草4-220.8986 2.2003 22.8892 9.53%龙胆草5-122.5355 2.2026 24.5099 10.36%龙胆草5-222.0131 2.2029 23.9906 10.23%龙胆草6-121.40

39、14 2.2034 23.3944 9.55%龙胆草6-221.6256 2.2036 23.6186 9.56%结果分析：标准品水分要求：根据减失的重量，计算供试品中含水量（%），测得水分不得过15.0%。此批次龙胆草样品水分含量测定符合药典规定。4.4龙胆草的灰分测定结果表5：龙胆草的水分含量测定结果Table5: determination results of moisture content of gentian grass样品名坩埚恒重供试品重量坩埚+样品恒重灰分龙胆草1-166.2529 3.1922 66.5403 9.00%龙胆草1-248.9326 3.0251 49.20

40、62 9.04%龙胆草2-149.7178 3.0001 50.1084 13.02%龙胆草2-250.3937 3.0329 50.7924 13.15%龙胆草3-147.0528 3.0889 47.7780 23.48%龙胆草3-247.5753 3.0075 48.2807 23.45%龙胆草4-168.2576 3.0114 68.7658 16.88%龙胆草4-246.4448 3.0303 46.9601 17.00%龙胆草5-145.1839 3.0013 45.5126 10.95%龙胆草5-248.9458 3.0122 49.2856 11.28%龙胆草6-147.553

41、0 3.0196 47.9756 14.00%结果分析：为了保证商家在龙胆草原料药材中无掺假行为以及控制其加工过程中带来的杂质和泥沙含量，根据图五测定结果，规定标准品其灰分应该符合7%，但是此批样品其灰分测定未能达到标准。4.5龙胆草的酸不溶性灰分的测定结果 表6：龙胆草的酸不溶性灰分的测定结果 Table 6: determination of acid insoluble ash in gentian grass样品名坩埚恒重（g）供试品重量（g）坩埚+样品恒重（g）酸不溶性灰分（W）龙胆草1-166.2529 3.1922 66.3677 3.60%龙胆草1-248.9326 3.025

42、1 49.1802 8.18%龙胆草2-149.7178 3.0001 50.1069 12.97%龙胆草2-250.3937 3.0329 50.7923 13.14%龙胆草3-147.0528 3.0889 47.7780 23.48%龙胆草3-247.5753 3.0075 48.2800 23.43%龙胆草4-168.2576 3.0114 68.7654 16.86%龙胆草4-246.4448 3.0303 46.9588 16.96%龙胆草5-145.1839 3.0013 45.5118 10.93%龙胆草5-248.9458 3.0122 49.2850 11.26%龙胆草6-

43、147.5530 3.0196 47.9753 13.99%龙胆草6-271.7290 3.0137 72.1472 13.88%结果分析：根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量（%），测得酸不溶性灰分根据图6测定结果，规定标准品其灰分应该符合2%，但是此批样品其灰分测定未能达到标准。4.6龙胆草的浸出物的测定结果表7：龙胆草的浸出物的测定结果Table7: results of determination of extract from Gentian Grass样品名蒸发皿恒重（g）供试品重量（g）蒸发皿+样品恒重（g）浸出物（W）龙胆草1-148.8324 2.0040 49.04

44、45 21.17%龙胆草1-246.2805 2.0018 46.5563 27.56%龙胆草2-148.2345 2.0030 48.6225 38.74%龙胆草2-247.4307 2.0027 47.7268 29.57%龙胆草3-148.8324 2.0042 48.9469 22.85%龙胆草3-246.2805 2.0053 46.3989 23.62%龙胆草4-148.2345 2.0023 48.3498 23.03%龙胆草4-247.4307 2.0014 47.5488 23.60%龙胆草5-148.8324 2.0078 48.9665 26.72%龙胆草5-246.28

45、05 2.0048 46.4102 25.88%龙胆草6-148.2345 2.0008 48.3577 24.63%龙胆草6-247.4307 2.0014 47.5706 27.96% 结果分析：除另有规定外，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量（%），且浸出物含量不得少于20.0%，因此，如图所示，此样品的浸出物含量结果符合药典含量要求。4.7龙胆草的含量测定结果 图8：龙胆草对照品溶液色谱图Fig.8：chromatographic diagram of gentian grass reference solu 图9： 龙胆草供试品溶液色谱图Fig. 9: solution chro

46、matogram of Gentiana tenuifolia图10： 95%乙醇阴性对照溶液色谱图Fig. 10: 95% ethanol negative control solution chromatogram结果分析：由图8为龙胆草对照品溶液在“3.8”项色谱条件下，保留时间为8min左右；由图9可知龙胆草供试品溶液在“3.8”项色谱条件下，保留时间在8min左右时与图1有相同峰型，对照品和供试品保留时间一致。并且，如由图3可知，95%乙醇溶液在“3.8”项色谱条件下，于8min左右没有吸收峰。通过以上对比可知龙胆苦苷的专属性实验良好，配置溶液所用95%乙醇在“3.8”项色谱条件下对

47、龙胆草的有效含量没有干扰。 表11 ：龙胆草标准曲线实验数据Table 11: experimental data on the standard curve of rhinocerol12345峰面积12385.31210620.9315.7161.6峰面积223681228.1628.6312.4161.5AVG2376.651219.05624.75314.05161.55浓度(g/mL)193.296.648.324.212.1平均峰面积A 浓度 C （gmL-1）图12：龙胆草的标准曲线Fig 12: Standard Curve for Gentiana结果分析：根据线性回归方程：

48、y = 0.0816x - 1.5393（R = 0.9999）以及图12（Fig 12）表明龙胆苦苷的溶度浓度在6.0375g. mL-1193.2g.mL-1范围内与峰面积线性关系良好。图13： 定量限色谱图Fig 13: quantitative limited chromatogram图14：检测限色谱图 Fig 14: detection limit chromatogram表15：龙胆草的日内精密度数据Table15: intra-day precision of gentian grass标准品浓度6.20935 g mL-124.8375 g mL-199.3500 g mL-

49、1峰面积1931.1241.659.5峰面积2933.1242.657.9峰面积3931.1242.459.3峰面积4931.7243.258.9峰面积5937.6242.659.2RSD0.30%0.24%1.07% 表16：龙胆草的日间精密度数据Table 16 : diurnal precision of gentian grass标准品浓度6.20935 g mL-124.8375 g mL-199.3500 g mL-1峰面积1931.7243.258.9峰面积2947.9244.758.8峰面积3953.9245.159.6峰面积4956.3243.159.6峰面积5958.224

50、6.459.6RSD1.13%0.57%0.70%结果分析：日内精密度RSD为0.30%，0.24%，1.07%，日间精密度RSD为：1.13%，0.57%，0.70%，由结果表明龙胆草对照品精密度良好。表17：龙胆草稳定性实验数据Table 17: experimental data on the stability of rhinocerol时间0h1h2h3h6h9h12h18h24hRSD峰面积1307.41345.21351.31362.913771366.91383.11307.41385.91.84%结果分析：结果表明24h，龙胆草样品溶液的峰面积RSD为1.84%，即24h内木

51、龙胆草供试品测定结果稳定。表18：龙胆草重复性实验数据Table 18: Repeatability experimental data for Gentiana样品名峰面积1峰面积2峰面积3峰面积4峰面积5峰面积6RSD龙胆草-31403.41355.31359.41349.41329.11341.41.88%结果分析：龙胆草-3中6份平行供试品峰面积的RSD值，龙胆苦苷的重复性实验RSD为1.88%。实验结果如表16，表明该方法重复性好。表19：龙胆草的加样回收率实验Table19:Sample recovery rate experiment of Longcholerae. A gB

52、gC g回收率%RSD80%38.80531.10569.36798%1.84%38.80531.10569.43898%38.80531.10568.49095%100%38.80538.64076.28097%38.80538.64077.760101%38.80538.64076.06296%120%38.80546.56185.02399%38.80546.56185.583100%38.80546.56184.17197%表20：龙胆草的含量测定结果Table 20: The results of the determination of the content of Gentiana龙胆草-1龙胆草-2龙胆草-3龙胆草-4龙胆草-5龙胆草-6龙胆草-7龙胆草-8峰面积12226181114031016170916817867541峰面积2230018631355104917341701780543峰面积3231018201359104417641684816548AVG227818311356103617361689794544浓度(mg/g)18.4314.7810.918.3014.011