医学微生物学 实验 脓汁和粪便标本中病原菌的检测(3)ppt课件

1、医学微生物学实验综合性实验三空气的细菌学检查结果分析手指皮肤的细菌学检查结果分析空气的细菌学检查组号时间地点菌落形成单位(CFU)1152153154155156157158159151015CFU /m3 50,000NAT 86N(直径7cm平板）N：平板上的菌落数 A：平板面积(38.5cm2)T：采样时间(15分钟) CFU：colony forming unit WHO推荐的医院各部门空气细菌标准级别cfu/m3适用范围级区10器官移植、心血管、矫形等外科手术室，保护性隔离室，灌注或配制注射液实验室级区200无菌室、手术室、供应室、婴儿室、中心灭菌单位、术后恢复室、早产儿及产房、重症

2、监护病房级区200500一般病房、治疗室、放射室、衣帽室、按摩室、盥洗室、手术室浴室我国公共场所空气卫生细菌学标准（GB96639673-1996，GB16153-1996,平皿直径9cm）撞击法cfu/m3沉降法个/皿适用范围10001035星级宾馆、饭店1500202星级以下宾馆和非星级带空调宾馆、饭店250030普通饭店、招待所、酒吧、茶座、咖啡厅、图书馆、博物馆、美术馆、飞机客舱400040音乐厅、影剧院、录像厅（室）、游艺厅、舞厅、理发店、美容院（店）、游泳馆、体育馆、医院候诊室、候机室、旅客列车车厢、轮船客舱、饭馆（餐厅）700075展览馆、商场（店）、书店、候车室、候船室液体或固

3、体标本菌落总数测定可将标本作十倍、百倍、千倍、万倍稀释。分别取1ml注入直径9cm的灭菌平皿内。倾注46营养琼脂培育基大约15ml，混合均匀。琼脂完全凝固以后，37培育48小时。选择菌落数在30300之间的平板作为菌落总数测定规范。将计数得到的菌落数乘以稀释倍数得出cfu/g(ml)。 1 3 2 4 1 3 2 4 手指皮肤的细菌学检查第1格为洗手前，第2格为洗手后，第3格为消毒后，第4格空白对照。 2人1块平板上:甲、丙常规洗手下:乙、丁规范洗手甲丙乙丁丙丁手指皮肤细菌学检查结果分析第1格为洗手前：+ 第2格为洗手后 常规(甲、丙)洗手方法：? 标准(乙、丁)洗手方法：?第3格为消毒后：？

4、第4格空白对照：-医学微生物学实验综合性实验一脓汁和粪便标本中病原菌的检测三菌落特征察看P11细菌纯培育P10脓汁和粪便标本检验录像油镜运用方法讲解细菌在固体培育基中的生长景象菌落定义：指单个细菌在平板培育基上生长繁衍，构成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：大小、外形、边缘、颜色、外表、透明度、潮湿度、黏度、溶血性。菌落类型：光滑型S、粗糙型R、黏液型M。菌苔：指多个菌落交融在一同构成的细菌堆积物。菌落特征P11大小：大(直径约3mm以上)，中(直径约13mm)，小(直径约1mm以下)。外形：圆形，卵圆形、假根形、丝状、不规那么等。边缘：整齐，锯齿状，波浪状，羽毛状。外表：隆起、平坦、中心凸起

5、、脐形凹陷；光滑或粗糙、潮湿或枯燥。溶血性：不溶血，不完全溶血(菌落周围呈草绿色、不透明)，溶血(菌落周围出现透明环)。色素：普通为无色或灰白色，特殊色素有两类：脂溶性色素(菌落本身着色，培育基不着色)和水溶性色素(菌落及培育基均着色)。 细菌的溶血景象根据细菌对血平板中红细胞的溶解才干可分为以下三种溶血类型甲型溶血:产生溶血素，不完全性溶血，在血平板上菌落周围有12mm半透明的草绿色溶血环。乙型溶血: 呈完全性溶血，在血平板上菌落周围有24mm宽，界限清楚，无色透明的溶血环。丙型溶血:不产生溶血素，在血平板上的菌落周围无溶血环。细菌的纯培育挑选单菌落:脓汁标本在普通平板上有黄色、白色两种菌落

6、，菌落的色素是脂溶性的，是细菌本身的颜色。菌落直径2mm左右、圆形、隆起、外表光滑、潮湿、边缘整齐、不透明。粪便标本在伊红美蓝平板上，有紫黑色、淡粉红色两种菌落，菌落颜色是水溶性的，不是细菌本身的颜色，颜色的产生是由于大肠埃希菌分解乳糖产酸，酸使伊红与美蓝结合，构成紫黑色具有金属光泽、大而隆起、不透明的菌落；菌落直径23mm。致病菌不分解乳糖，菌落呈伊红的颜色，很淡的粉红色，半透明，直径12mm。选择平板上一样的菌落数多的、典型的、容易挑取的单菌落，进展接种。37培育24小时 37培育24小时 紫黑色通常描画的菌落直径和颜色是特指培育1824小时，菌落分布比较稀少的区域、典型的菌落。假设培育物

7、放置时间过长，或者平板上某个部位细菌比较多、菌落比较密集，大肠杆菌菌落颜色能够会发生改动。由于大肠杆菌利用完乳糖以后，就要利用蛋白质，蛋白质分解大多产生碱性物质，中和了乳糖分解时产生的酸。大肠杆菌菌落能够会由原来的紫黑色变成粉红色，和致病菌颜色一样。不要在菌落密集的区域挑选菌落，它能够是菌落构成单位CFU，不是单菌落，很容易选错。37培育36小时 由紫黑色变成粉红色斜面接种法P10 1组4支甲普通平板黄色菌落1支斜面乙普通平板白色菌落1支斜面丙伊红美蓝紫黑菌落1支斜面丁伊红美蓝粉红菌落1支斜面斜面标志：组号、黄色、白色、紫黑、粉红。在平皿底部玻璃上，画个大圈选菌落，同组同窗认可，才干挑取。培育

8、时间不得超越18小时。斜面接种法P10甲黄色,乙白色。丙紫黑,丁粉红。标志：组号，颜色平安警告接种环接种斜面一次，可产生几十个微生物气溶胶颗粒。气溶胶粒径100um沉降很快,50um在0.4s内分散开,5um经过呼吸道直接到达肺泡。Pike博士对实验室感染统计分析结果发现，不明缘由的感染高达82%，大多数是气溶胶在空气中分散引起的。实验时应坐着，在酒精灯半径20厘米范围内操作，坚持安静、有序，尽量少说话、少走动，以免感染病原菌。奥林巴斯 CX21型 生物显微镜实验柜内，每人一台留意：只能横放，不得竖放。奥林巴斯 CX21型 生物显微镜运用须知显微镜是精细光学仪器，请不要让其遭到撞击，请小心操作

9、。在搬运显微镜时，请按右图所示，以双手抓住镜臂孔的两侧，小心搬运。假设拿住载物台和镜筒等部位搬运的话，有能够会呵斥损坏。显微镜各部件称号开关与调整光强开或关之前，必需将亮度调整旋钮按箭头相反方向转动到最小位置，以免损坏灯泡。电源开关拨到侧为开，拨到侧为封锁。按箭头方向转动亮度调整旋钮变亮，相反方向转动那么变暗。放置标本按箭头方向转动粗调旋钮降下载物台。按箭头方向拉开载物台标本夹 ，自前向后将标本片放入平台，标本夹 悄然放回原位。转动上侧垂直挪动杆和下侧程度挪动杆，挪动标本至光路中间。载物台位置刻度载物台上的刻度方便确定标本位置，标本挪动后可以快速回到原位。程度刻度的标识位置以机械载物台的位置来

10、读取。垂直刻度的标识线以的位置来读取。聚焦从显微镜的侧面察看，按箭头方向转动粗调旋钮，使物镜尽能够接近标本。一边看目镜，一边渐渐逆箭头方向转动粗调旋钮， 使载物台下降。看到标本以后，用微调旋钮来正确对焦。10倍物镜的任务间隔WD，从物镜到标本的 间隔为10.5mm。 油镜的WD为0.13mm。调整瞳距调整瞳距是调整双目间的间隔，使两眼同时看到一个显微镜像，能防止察看时的疲劳。方法：一边看目镜，一边挪动双目镜筒，让左右的视野一致。标识的位置表示瞳距。请记住本人的瞳距值，以便下次察看时调整。调整屈光度数调整察看者左右视力。以右眼看右侧的目镜，旋转粗微调旋转盘，对好焦距。以左眼看左侧的目镜，旋转屈光

11、度调整环，对好焦距。调整聚光镜位置和孔径光阑用聚光镜上下挪动旋钮，将聚光镜转到最上面。在孔径光阑环上刻有物镜倍率10倍，100倍等，察看时将与运用物镜相对应的倍率放到正面。转换物镜旋转物镜转盘，将希望运用的物镜10倍、100倍转到标本的上方。100倍浸油物镜运用方法油镜放入光路之前，一定要在标本的察看部位上加一滴浸油。旋转物镜转盘，使油镜进入光路，用微调旋钮对好焦距。假设浸油内有气泡，会影响察看，可略微旋转物镜转盘，使油镜来回经过12次浸油，排除油内气泡。显微镜油镜的运用P1310物镜标本位置滴加香柏油100油镜浸泡油中,几乎与标本接触任务间隔0.13mm细调理调焦，察看物像记录结果封锁电源。

12、油镜处置：擦镜纸拭去香柏油 擦镜纸沾少许乙醇和乙醚7:3混合液擦拭擦镜纸擦拭油镜。显微镜罩上防尘罩 横放在实验柜内。(顺德校区实验台两侧的电源插座，只能插入一个插头，请选择离他最近的电源插座。校本部实验台中间，三个位的插座，中间那位插孔没有电，不能运用，只能用两侧的插座。 细菌的显微镜检查法显微镜：光学显微镜目镜：10倍物镜：油镜头90或100倍放大倍数：1090或100900或1000镜油：香柏油或石蜡油香柏油折射率n1.515，玻片折射率n1.52，石蜡油n1.46，空气n1.00。油镜运用终了必需擦拭油镜头。油透镜光线载玻片思索题在微生物学实验中,怎样才干防止杂菌的污染?空气的卫生规范规定如何?他的实验结果阐明了什么问题?怎样从医务人员手指上分别和鉴定金黄色葡萄球菌?菌落特征主要描画哪几方面问题？任何挑选单菌落？ 医学微生物学实验综合性实验