2-1_微生物的实验室培养ppt课件

1、 巴斯德鹅颈瓶实验 .专题2 微生物的培育与运用课题1 微生物的实 验室培育.(一) 概念、特点： 个体难以用肉眼察看的一切微小生物之统称。微生物包括细菌、病毒、真菌、和少数藻类等。但有些微生物是肉眼可以看见的，像属于真菌的蘑菇、灵芝等。 构造都相当简单,个体多数非常微小.通常要用光学显微镜或电子显微镜才干看到，有的甚至没有细胞构造.且体内普通不含有叶绿素.不能进展光协作用.微生物的类群微生物原核类:真核类非细胞类：细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、构造简单酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：显微藻类、原生生物如：草履虫、变形虫等病毒、类病毒、朊病毒微生物的共同特点：.细菌细菌：单细胞不分枝

2、的原核微生物。细菌细胞微小而透明，通常用适当染料染色后显微镜察看图1-1 常见的三种细菌典型形状A.球菌 B.杆菌 C.弧菌.球菌弧菌杆菌.细菌细菌.细菌 *细胞壁构造特点：坚韧且有弹性细胞壁有哪些功能？ 固定细胞外形； 维护细胞免受外力的损伤； 阻拦大分子物质进人细胞； 使细胞具有致病性及对噬菌体的敏感性。伤寒杆菌细胞壁中含毒素.芽孢 有些细菌在一定的条件下，细胞里面构成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。芽孢的壁很厚，对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力。例如，有的细菌的芽孢，煮沸3小时以后才死亡。芽孢又小又轻，可以随风飘散。当环境适宜如温度、水分适宜的时候，芽孢又可以萌生，构成一个细菌

3、.菌 落单个或少数细菌在固体培育基上大量繁衍时，就会构成一个肉眼可见的，具有一定形状构造的子细胞群体，叫做菌落。菌落是鉴定菌种的重要根据。有鞭毛细菌常构成边缘不规那么的菌落；具有荚膜的菌落外表较透明，边缘光滑整齐；有芽孢 的菌落外表枯燥皱褶；有些能产生色素的细菌菌落还显出艳丽的颜色 。.几种菌落及其形状.菌 落细菌的菌落特征因种而异 .细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同，将细菌分为两大营养类型。自养菌autotroph异养菌heterotroph腐生菌寄生菌 大部分病原菌.放线菌1、构造：单细胞原核分支状的菌丝基内菌丝、气生菌丝.链霉素、土霉素、四环素、氯霉素、红霉素、庆大霉素

4、微生物中发现了几千种抗生素，其中2/3是由放线菌产生的 应 用:.如图是酵母菌电子显微镜下的形状构造酵母菌和霉菌青霉.生殖腐生生活孢子生殖.病毒的构造.病毒 .SARS病毒、 禽流感病毒.朊病毒蛋白质病毒.1.培育基内所含的根本物质(1)水 (2)碳源 (3)氮源 (4)无机盐二培育基.：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。无机碳源：CO2；NaHCO3等有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油等构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物的能源.概念.来源：.作用：1.微生物的碳源.无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是可以为微生物提供N元素的营

5、养物质。主要用于合成蛋白质、核酸及含N的代谢产物。2.微生物的氮源.概念：.来源：.作用：3.生长因子.常见的生长因子：.概念：.作用：微生物生长不可短少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。.(1)特殊营养物质- ?如：培育乳酸杆菌需求在培育基中添加维生素(2)pH值如:培育霉菌需酸性、培育细菌需中性或微碱性(3)氧气的含量如:培育厌氧微生物时需求提供无氧的条件2.培育基内所需的其他条件练习生长因子.练习1多项选择1、以下细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是A 光合细菌 B 根瘤菌 C 硝化细菌 D 乳酸菌2、培育大肠杆菌的培育基中，必需含有的碳源和氮源是A 糖、有机

6、酸等 B 二氧化碳、碳酸盐C 蛋白质 D 无机氮化物3、以下表达不正确的选项是A 培育基是为微生物的生长繁衍提供营养的基质B 液体培育基和固体培育基所含的最根本物质不一样C 微生物在固体培育基上生长时，可以构成肉眼可见的单个细菌A.CA.CB.C.(1)按物理形状分 液体培育基 固体培育基3.分类参与凝固剂如琼脂.固体培育基：菌落，菌苔.液体培育基：外表生长均匀混浊生长沉淀生长.半固体培育基：无动力 有动力(弥散)(能否运动) .3.分类(2)按用途分 选择培育基 鉴别培育基-选择菌种-鉴别菌种.连线以下选择培育基分别酵母菌、霉菌等真菌：分别金黄色葡萄球菌：分别固氮菌：分别自养型微生物：无氮培

7、育基的培育基不含有机物的培育基高浓度食盐培育基参与青霉素的培育基.伊红-美蓝培育基金属光泽深紫色菌落.3.分类(3)按成分分 天然培育基 合成培育基-成分未知，来源有限-成分知.血清中含有：多种蛋白质白蛋白、球蛋白、铁蛋白等多种金属离子； 激素；促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。各种生长因子转移蛋白不明成分 人工合成培育基只能维持细胞生存，要想使细胞生长和繁衍，还需补充一定量的天然培育基如血清。.三无菌技术1、获得纯真培育物的关键: 2、无菌技术包括的四大方面(参看教材15页)3、消毒与灭菌(1)消毒：概念：运用较为温暖的物理或化学方法仅杀死物体外表或内部一部分对人体有害的微生物。包

8、括芽孢和孢子吗？方法:煮沸消毒法巴氏消毒法:如牛奶的消毒化学药剂消毒:酒精、氯气、石碳酸、煤酚皂溶液等紫外线消毒(不包括芽孢和孢子)防止外来杂菌的入侵.2灭菌概念：运用剧烈的理化要素杀死物体内外一切的微生物，包括芽孢和孢子。方法：a 灼烧灭菌 b 干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌灼烧灭菌微生物的接种工具 (接种环、接种针)或其他金属器具直接在火焰的充分熄灭层灼烧留意适用范围.干热灭菌 160170 ；12h能耐高温的需求坚持枯燥的物品( 玻璃器皿)高压蒸汽灭菌 100kPa 121 15-30min通常用于培育基的灭菌. 请他判别以下资料或器具能否需求消毒或灭菌。假设需求，请选择适宜的方法。1培育细

9、菌用的培育基与培育皿2玻棒、试管、烧瓶和吸管3实验操作者的双手4注射器5新颖牛奶6自来水7实验室的空气思索.四、实验操作(一)制备牛肉膏蛋白胨培育基(用于培育细菌)牛肉膏蛋白胨固体培养基配方牛肉膏 5.0g蛋白胨 10.0gNaCl 5.0g琼脂 20.0g将上述物质溶解后，添加自来水，定容至1000mL.1计算、称量2溶化3调pH：pH764过滤：这一步可以省去。5分装：分装过程中留意不要使培育基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超越三角烧瓶容积的一半为宜。6加塞7包扎操作步骤.8灭菌: 将50ml培育基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸

10、气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。将培育皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160170 下灭菌2h。.倒平板技术1.将灭过菌的培育皿放在火焰旁的桌面上，右手拿装有培育基的锥形瓶，左手拨出棉塞。1234.倒平板技术2.右手拿锥形瓶，使瓶口迅速经过火焰。1234.倒平板技术12343.用左手的拇指和食指将培育皿翻开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培育基(约1020mL)倒入培育皿，左手立刻盖上培育皿的皿盖。.倒平板技术12344.等待平板冷却凝固，大约需510min。然后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上。. 9倒平板: 待培育基冷却到50 左右时，在

11、酒精灯附近倒平板。倒平板操作见课本2d后察看平板，无杂菌污染才可用来接种. 10无菌检查： 将灭菌的培育基放入37的温室中培育2448小时，以检查灭菌能否彻底。. 1.培育基灭菌后，需求冷却到50 左右时，才干用来倒平板。他用什么方法来估计培育基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶，觉得锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进展倒平板了。问题讨论. 2.为什么需求使锥形瓶的瓶口经过火焰？ 答：经过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基。.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培育基外表的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培育基外表的水分更好地挥发

12、，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染。. 4.在倒平板的过程中，假设不小心将培育基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培育微生物吗？为什么？ 答：空气中的微生物能够在皿盖与皿底之间的培育基上繁殖，因此最好不要用这个平板培育微生物。.二、实验操作一制备牛肉膏蛋白胨固体培育基计算称量溶化灭菌倒平板二纯化大肠杆菌接种方法有：平板划线法和稀释涂布平板法三将接种后的培育基和一个未接种的培育基放入37恒温箱中培育12h和24h后，察看并记录定容调PH .三、课题延伸：菌种的保藏1、斜面保藏 暂时保管2、甘油保藏 长期保管练习.倒平板.1.培育基灭菌后，需求冷却到50 左右时，才干用来倒平板。

13、他用什么方法来估计培育基的温度？问题讨论 答：可以用手触摸盛有培育基的锥形瓶，觉得锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进展倒平板了。2.为什么需求使锥形瓶的瓶口经过火焰？ 答：经过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培育基。.3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？4.在倒平板的过程中，假设不小心将培育基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培育微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培育基外表的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培育基外表的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培育基，呵斥污染。 答：空气中的微生物能够在皿盖与皿底之间的培育基上繁殖，因此最好不要用这个平

14、板培育微生物。.第四课时.1、平板划线法.问题讨论 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作终了时，依然需求灼烧接种环吗？为什么？ 答：操作的第一步灼烧接种环是为了防止接种环上能够存在的微生物污染培育物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线终了后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而经过划线次数的添加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线终了后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，防止细菌污染环境和感染操作者。.2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进展划线？答：以免接种环温度太高，杀死菌种。3.在作

15、第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开场划线？答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开场，能使细菌的数目随着划线次数的添加而逐渐减少，最终能得到由单个细菌繁衍而来的菌落。.2.稀释涂布平板法:(1)系列稀释操作:.问题讨论 涂布平板的一切操作都应在火焰附近进展。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进展无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌。例如，酒精灯与培育皿的间隔要适宜、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。.涂布平板操作讨论:涂布平板的一切操作都应在火焰附近进展。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要

16、求，想一想，第2步应如何进展无菌操作？提示：应从操作的各个细节保证“无菌。例如，酒精灯与培育皿的间隔要适宜、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。.前往菌落：单个或少数细菌在固体培育基上大量繁衍时，就会构成一个肉眼可见的，具有一定形状构造的子细胞群体，叫做菌落。不同的细菌的菌落特征不同菌落是鉴定菌种的重要根据。.(2)碳源可作为碳源的物质有:含碳无机物: 、 、 、 含碳有机物：蛋白质脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同异养型微生物的碳源为自养型微生物的碳源为碳酸盐碳酸氢盐二氧化碳糖类主要含碳有机物有机碳含碳无机物无机碳.(3)氮源可作为氮源的物质有:含氮无机物： 、 、 、含

17、氮有机物：蛋白胨牛肉膏尿素前往固氮微生物所利用的氮源是氮气氨气硝酸盐氨盐氮气.思索:1)无菌技术除了用来防止实验室的培育物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2)消毒和灭菌有何不同？3)为什么消毒牛奶要用巴氏消毒法?4)请他判别以下资料或器具能否需求消毒或灭菌。假设需求，请选择适宜的方法。培育细菌用的培育基与培育皿玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手消毒灭菌条件温和强烈作用范围物体表面或内部一部分,不包括芽孢和孢子物体内外所有微生物,包括芽孢和孢子无菌技术还能有效防止操作者本身被微生物感染。灭菌 灭菌 消毒营养成分不被破坏.?思索1溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一同加热? 答:加琼脂的

18、目的是什么?答:可保证粘附在称量纸上的牛肉膏也能溶于水中,减少误差作为凝固剂.思索2在灭菌前, 用牛皮纸、旧报纸包紧盛有 培育基的锥形瓶的目的是什么？答: 培育皿能否用高压蒸汽灭菌？答:?在灭菌时能防止水蒸汽凝结时浸湿棉塞,在取出培育基锥形瓶时也起到隔绝空气中杂菌污染的作用不能,由于培育皿要坚持枯燥,应该用干热灭菌.练习2:1.获得纯真培育物的关键是A 将用于微生物培育的器皿.接种器具和培育基等器具进展灭菌B 接种纯种细菌C 适宜环境条件下培育D 防止外来杂菌的入侵2.以下操作与无菌技术无关的是A 接种前用肥皂洗双手,再用酒精擦拭双手B 接种前用火焰烧灼接种针C 培育在50左右时搁置斜面D 在

19、酒精灯的火焰旁完成3.外科手术器械和罐头食品的处置,要以可以杀死什么为规范A 球菌 B 杆菌 C 螺旋菌 D 芽孢DCD. 4.某学校计划开辟一块食用菌栽培基地,以丰富学生的劳动技术课内容,首先对食用菌实验室进展清扫和消毒处置,预备食用菌栽培所需的各种原料和器具,然后从菌种站购来各种食用菌菌种.请回答以下问题:(1)对买回来的菌进展扩展培育,首先制备试管培育基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培育基所需的原料 。其中提供氮源的主要 是 ；提供能源的主要物质是 ；琼脂的作用是 ，它不提供营养。(2)微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培育基时各成分要有适宜的 ,在烧杯参与琼脂后要不停地 ,防止 .牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂牛肉膏蛋白胨凝固剂比例搅拌琼脂糊底引起烧杯破裂.(3)将配制好的培育基转移到锥形瓶中,加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入 中灭菌,压力为 ,温度为 ,时间 ,灭菌终了拔掉电源,待锅内压力 ,将试管取出. (4)运用高压蒸汽灭菌锅时留意,先向锅内倒入 ,把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.(5) 从一支试管向另一支试管接种时留意,接种环要在酒精灯 焰灭菌.并且待接种环 后沾取菌种,试管口不能分开酒精灯火焰附近,将接种的试管放入