体液蛋白质检验方式简介

1、体液蛋白质检验方式简介第一节 概述一、血浆蛋白组成、功能及分类二、个别血浆蛋白三、疾病时血浆蛋白的变化一、血浆蛋白组成、功能及分类功能：营养作用维持血浆胶体渗透压维持血浆pH值运输作用免疫与防御催化代谢调控凝血、抗凝血及纤溶作用分类：盐析：白蛋白、球蛋白醋酸纤维薄膜：白蛋白、a1-球蛋白、a2-球蛋白、b-球蛋白、g-球蛋白和纤维蛋白原SDS电泳二维电泳功能分类：载体蛋白： 前白蛋白，白蛋白，载脂蛋白，铜蓝蛋白，运铁蛋白，给合球蛋白，血红素结合蛋白，甲状腺素结合蛋白免疫防御系统蛋白： IgG,IgM,IgD,IgE,IgA,补体系统凝血和纤溶蛋白： 凝血因子7、8，凝血酶原，纤维蛋白原，纤溶酶

2、原等酶： 脂蛋白脂肪酶，卵磷脂-胆固醇酰基转移酶蛋白酶抑制剂： a1-抗胰蛋白酶，a1-抗糜蛋白酶，a2-巨球蛋白激素： 胰岛素，促红细胞生成素参与炎症应答的蛋白： a1-酸性糖蛋白，C-反响蛋白蛋白质测定方法：免疫化学法：利用特异性抗体 浊度测定、免疫扩散、免疫电泳、放射免疫、酶联免疫电泳别离，观察图谱及半定量化学方法：产生有色物质二、个别血浆蛋白质来源、代谢、检验、临床意义一前白蛋白：半衰期短，因而营养不良及肝炎时降低早功能：组织修复材料；运载甲状腺素、视黄醇临床意义：营养不良、恶性肿瘤、肝硬化、肾炎时降低二白蛋白：营养胶体渗透压运输三a1-抗胰蛋白酶：电泳：位于a1-球蛋白区带功能:抑制

3、多种蛋白酶。主要表现为抑制多形核白细胞吞噬作用后释放的弹性蛋白酶临床意义：缺陷细菌多形核白细胞释放的弹性蛋白酶过度作用于弹性蛋白肺气肿四a-酸性糖蛋白急性时相反响蛋白炎症时增高五甲胎蛋白AFP：胎儿时期产生的蛋白肝癌：80%增高胰腺癌、肺癌、肝硬化：增高肝癌中15-20% AFP正常胎儿产前诊断：高于正常时，易产生畸形生殖细胞癌：AFP增高六结合珠蛋白与血红蛋白进行不可逆结合的糖蛋白红细胞溶解自由血红蛋白与结合珠蛋白结合进入肝细胞降解氨基酸、Fe再利用假设红细胞破坏，引起血红蛋白释放增多，那么结合珠蛋白减少测定方法电泳法血浆中加过量血红蛋白与结合珠蛋白结合为复合物别离复合物测血红蛋白量表示结合

4、珠蛋白量测复合物的活性免疫化学法七a2-巨球蛋白主要的蛋白酶抑制剂：包住蛋白酶，使不与蛋白结合婴幼儿、儿童：高雌激素：高增加合成低蛋白血症：高胰腺炎、前列腺癌：低八铜蓝蛋白主要功能：氧化复原作用多酚或多胺氧化 Fe2+Fe3+急性时相反响蛋白；协助Wilson病的诊断：遗传病，铜代 谢障碍，铜蓝蛋白降低。九转铁蛋白结合铁、铜、锌等急性时相感染、组织坏死等：降低血管内溶血：降低铁缺乏时：升高十b2-微球蛋白炎症、肿瘤、白血病、肾衰等：升高十一C-反响蛋白急性时相蛋白。心肌梗死、创伤、感染、手术、肿瘤浸润结合细菌、真菌及原虫体内的多糖；结合卵磷脂、核酸激活补体，引发调理作用，增强细胞吞噬功能，抑制

5、血小板凝集和血块收缩二、疾病时的血浆蛋白质机理：炎症损伤某些细胞因子信号转导系统 转录因子某些基因表达变化一炎症、创伤：前白蛋白、白蛋白、转铁蛋白：下降其它： 升高肝巨噬细胞枯否细胞Kupffer Cell)参与免疫调节二肝脏疾病：肝脏合成大多血浆蛋白；急性肝炎时，可出现非典型的急性时相反响。三肾脏疾病蛋白尿：血浆蛋白丧失小分子量蛋白丧失：下降大分子量蛋白因代偿性合成增加：可增加四风湿病急性或慢性炎症IgA,IgG, IgM升高。炎症活动期a1-酸性糖蛋白、结合珠蛋白等升高五遗传缺陷第二节 体液蛋白质测定许多疾病引起血浆蛋白种类和数量的变化一、血清总蛋白测定两个假设：都是单纯蛋白；所有蛋白与化

6、学试剂发生相同反响。1.凯氏定氮法蛋白+强酸消化铵盐+碱氨酸滴定，测定总氮量6.252. 双缩脲法+-HOH甘氨酰甘氨酸肽键-CO-NH-碱性下与Cu2+络合成紫色化合物与蛋白量成正比。简单、准确、重复性好3 酚试剂法Lowry法酪氨酸残基和色氨酸残基与酚试剂的磷钨酸、磷钼酸蓝色化合物加上Cu2+,结合双缩脲法，提高灵敏度适于测单一蛋白，且适用于蛋白含量较少的样品4 比浊法酸性试剂+蛋白质沉淀5 染料结合法酸性条件下，蛋白质NH3+酪，与染料中阴离子产生颜色反响。氨基黑、考马斯亮兰6 紫外分光光度法色氨酸、酪氨酸 在280nm有吸收峰保持蛋白活性7 折光测定法溶于溶液中的固体可增加它的光折射率固定波长、固定温度下，光折射率与蛋白浓度成正比蛋白浓度g/L)=1.45A280-0.74A260血清总蛋白临床意义：升高：多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等。降低：白蛋白合成减少，或蛋白丧失二、血清白蛋白测定1. 染料结合法白蛋白与染料结合，球蛋白很少与染料结合溴甲酚绿，溴甲酚紫白蛋白pH4.2, +) +BCG蓝绿色化合物OD与白蛋白浓度成正比2. 盐析法球蛋白先沉淀3. 电泳法4免疫化学法抗原抗体反响；抗体过量临床意义合成减少吸收减少丧失过多七、脑脊液蛋白质测定脉络膜的毛细血管壁超滤形成，及少量中枢神经系统合成浊度法