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文档简介
1、用途:用免疫学方法定量测定人血清或血浆中的的含量。电化学发光免疫测定试剂,适用于概述:Elecsys2010和E170免疫测定分析仪。膳食中缺乏肉类和菌类产品引起的缺乏可导致营养性和巨细胞性贫血。吸收不良是该缺乏症的主要原因,见于胰腺功能低下、胃萎缩或胃切除术、肠损坏、肠内结合蛋白(内因子)损耗、体内产生了针对内因子的自身抗体或相关的等等。为机体维持正常代谢、DNA缺乏得不到及时纠正可导致和红细胞再生所必需。细胞贫血及不可逆性中枢神经系统损伤。维生素B12或叶酸测定对查明、叶酸缺乏有意义.价值,尤其对细胞贫血的鉴别有1961年首次了的放射免疫测定法,以后建立的方法大多采用57Co标记的化钴胺素
2、示踪剂和内因子作为的结合物.各种商品化检测方法在游离物和结合物的分离技术上各不相同,标本预处理方法也不尽相同。为消除内源性血清中对化钴胺素的结合蛋白质(包括R-蛋白质)以及针对内因子的抗体造成的影响,需煮沸或碱性 条件处理标本,和破坏结合的蛋白质。1970年代的后期,放射免疫测定法采用血清结合蛋白质或部分纯化的内因子来检测水平,检测值高于微生物学方法。这是由存在的血清结合蛋白或R-蛋白造成的。与内因子相比,R-蛋白的特异性较差,除外,的类似物也被检测出来。因此,后来均使用高纯度的内因子。Elecsys测定法采用竞争法原理和特异的内因子。标本中的与生物素化的共同竞争钌标记的内因子上的结合位点。原
3、理:采用竞争法原理,整个过程27分钟完成。 第1步:15l标本与预处理试剂1和预处理试剂2混匀,结合的被内源性内因子。 第2步:将预处理标本与钌标记的内因子混匀,形成-结合蛋白复合物,其数量取决于标本中待测物的浓度。 第3步:加入链霉亲和素的微粒和生物素化的,后者与钌标记的内因子上仍未占据的位点结合,形成钌标记的内因子-生物素标记的复合物。此复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 反应混和液吸到测量池中,微粒通过磁铁吸附到电极上,未结合的物质被液洗去,电极加电压后产生化学发光,通过光电倍增管进定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正,由从试剂条形码扫描入
4、仪器的原版标准曲线而得。试剂:PT1:预处理试剂1()1瓶,4ml,二硫苏糖醇1.028g/l,含稳定剂,5.5PT2:预处理试剂2(灰盖)1瓶,4ml,氢氧化钠36g/l,化钠2.205g/lM:链霉亲和素的微粒(透明瓶盖),1瓶,6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml,生物素结合能力: 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1:钌标记的内因子(灰盖),1瓶,10ml。浓度4g/l,二化钴胺酰胺15g/l,含稳定剂,人血清白蛋白,磷酸缓冲液, 5.5。含防腐剂。R2:生物素化的(黑盖),1瓶,8.5ml,浓度 25g/l,生物素3g/l,磷酸缓冲液,7.0。含防腐剂。储存和稳定性:存放在2
5、8 度,切莫倒置。未开封,可稳定至标明的保质期。开封后,28 度12周;放在Elecsys2010上,8周;标本和准备:血清:按标准常规方法。血浆:肝素钠或EDTA-K3抗凝。标本在28度可稳定2天,-20度可稳定2个月。只能冻融一次。避光保存。含沉淀的标本使用前需离心。不要使用加热灭活的血清。采血前检测步骤方法:应空腹。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。按仪器操作说明进行操作。检查试剂与消耗品是否充足。使用前需混匀微粒。仪器通过扫描试剂盒条形码自动输入测试所需的特异性参数,不需手工输入。如果特殊情况下仪器无法阅读条形码,可以手工输入15位数字。Elecsys2010:将冷藏试剂预温到20 度后放置
6、于仪器的试剂盘上,避免产生和开/关试剂瓶盖。定标:。仪器自动控制试剂温度每批试剂有一条形码定标液定标。定标频率:,含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器要求:Elecsys2010或E170:24小时以内)定标一次,如再次定标即根据下列一个月(同一批号试剂)7天(放置仪器上的同一试剂盒)根据要求进行标定:如质控结果超出范围时。质控:Elecsys通用质控品(PreciControl )1和2或其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各的具体要求。检测值应落在确定的范围内,如出现质控值落在范围以外,应采取校正措施。
7、计算:对每一个标本,仪器会自动计算含量,是pg/ml或pmol/l。换算方法是pg/ml0.738=pmol/l pmol/l1.36=pg/ml干扰:该方法不受黄疸(胆红素65mg/dl)、溶血(血红蛋白1000mg/dl)、脂血(脂质1500mg/dl)和生物素5mg/天)治疗的,至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰(1500IU/ml)。54种常用药物经试验对本测定无干扰。Elecsys 测定结果应结合检测范围:病史、临床其他检查结果综合起来进行。30-2000pg/ml(22-1476pmol/l)稀释:高于检测范围的标本可用通用稀释液稀释。建议手工1:2稀释。稀释后的标本含量必须高于1000pg/ml(738pmol/l)。结果应乘上2。注意:稀释标本的含量可能不呈线性,这可能是因为通用稀释液中含有低浓度的内源性。如要做线性,建议用低的混合血清。稀释后的标本含量高于2000pg/ml(1476pmol/l)时,这种内源性的干扰可忽略不记。正常参考值:由于人群和饮食的不同可能会引起测定结果的差异,建议各在适当的时段,选择有统计学意义的
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