水稻转基因技术

1、水稻转基因技术水稻转基因技术1第二组 目录目录 水稻装基因技术水稻装基因技术1外源基因鉴定外源基因鉴定237 存在的问题与展望存在的问题与展望3黄金大米黄金大米: 又名“金色大米”，是一种 转基因大米，由美国先正达公司研发。其不同于正常大米的主要功能为帮助人体增加维生素A吸收。因为色泽发黄，该大米品种被称为“黄金大米”。 左为普通大米，右为黄金大米4水稻转基因技术基因枪法 农杆菌介导发其他方法PEC介导转化法 花粉管通道发电击法5一、水稻转基因技术基因枪法基因枪法： 定义定义：又称微弹轰击法，是利用基因枪，将载有目的：又称微弹轰击法，是利用基因枪，将载有目的基因的金属颗粒加速，高速射入受体作物

2、细胞，并随机基因的金属颗粒加速，高速射入受体作物细胞，并随机整合到受体细胞的基因组上，然后通过细胞和组织培养整合到受体细胞的基因组上，然后通过细胞和组织培养技术，再生出新的植株。技术，再生出新的植株。原理原理：是将外源：是将外源DNA包在微小的金粒或钨粒表面包在微小的金粒或钨粒表面,再再通过高压将微粒高速地射入受体细胞或组织。通过高压将微粒高速地射入受体细胞或组织。6应用：自1989年首先用基因枪转化玉米获得转基因植株以来,在水稻、小麦、高粱、大麦、燕麦等重要禾谷类作物中相继成功应用。特点：具有操作简便,受体材料广泛等优点,但成本较高,转化频率较低。7农杆菌介导法农杆菌介导法：定义：将外源基因

3、插入农杆菌的质粒上定义：将外源基因插入农杆菌的质粒上,由载体将由载体将外源基因转移并整合到植物细胞基因组中去。外源基因转移并整合到植物细胞基因组中去。程序：程序： 受体系统的建立受体系统的建立 转化载体的构建转化载体的构建 目的基因的转化目的基因的转化 特点：成功率高特点：成功率高,遗传稳定性好遗传稳定性好,可以连接不同的启动子可以连接不同的启动子,使外源基因在不同组织里特异表达使外源基因在不同组织里特异表达,且载体可容纳大片段且载体可容纳大片段的异源的异源DNA,所以该方法是目前最常用的转基因方法。所以该方法是目前最常用的转基因方法。8PEC介导转化法：原理：是利用化合物聚乙二醇(PEG)及

4、高pH条件诱导原生质体体外摄取外源DNA。特点：原生质体作为受体具有群体数大,便于操作,DNA分子易于进入,获得纯合性的转化子等优点,但原生质体培养难度大、再生频率低、周期长、不适合水稻转化研究。9原理:利用高压电脉冲作用在原生质体膜上“电激穿孔”，形成可逆的瞬间通道，当外源DNA附着于原生质体膜靠近电击点时，DNA就可能通过小孔进入细胞，进而整合进受体基因组，完成转化。 电击导入技术在水稻育种上应用很少。电击导入法：电击导入法：10花粉管通道法花粉管通道法:原理：利用植物授粉后一段时间内,从珠孔到珠心之间有一条花粉管通道,外源基因可通过此管道进入胚囊并转化尚不具备正常壁的卵、合子或早期胚胎细

5、胞,进而借助于天然的种胚系统形成转基因种胚。特点：简单、快速、易被人接受,但机理尚不完全清楚,目前应用并不是很多。11二、转基因水稻中外源基因的鉴定外源基因整合的鉴定：主要有Southern杂交和PCR法检测阳性。外源基因转录水平的鉴定,有Northern杂交和RT-PCR(reverse transcribed PCR)检测法。外源基因表达蛋白的检测1.生化反应检测法，主要通过酶反应来检测.2.免疫学检测法:通过目的蛋白(抗原)与其抗体的特异性结合进行检测,如Western杂交.3.生物学活性的检测1.报告基因的酶法检测,常用的报告基因有:gus、nos、ocs等。l当然最后转基因植株必须移栽于大田,进行田间鉴定,不仅对改良性状还要对其它农艺性状进行评价,选育综合性状优良的株系。12三、存在的问题u外源基因的