AES显色培养基学习教案

1、会计学1AES显色培养基显色培养基微生物分析的主要方法原理: 糖发酵 Ex: 乳糖发酵用于大肠菌群检测 氧化还原 Ex: 如H2S基础培养基用于Salmonella spp.第1页/共23页缺点缺点:大部分生化反应只是用于检测微生物种群(属). 需要转代 浪费金钱和时间 : 大部分需要确认实验第2页/共23页显色及荧光底物: 由化学及合成技术获得 特殊酶天然裂解成相似结构的分子 酶裂解时释放发色及荧光混合物专一性酶活性，目视观察专一性酶活性，目视观察第3页/共23页应用: 鉴定板 快速酶测试 接加至培养基中(固体和液体)减少和降低确认测试量减少和降低确认测试量第4页/共23页共价键 (糖苷的,

2、 肽聚, 磷酸二氢聚 )由酶进行专一性识别糖类脂类蛋白胨色 原第5页/共23页共价键结合专一酶糖类脂类蛋白胨色原非裂解底物非裂解底物:不显色不显色 糖类脂类蛋白胨色源 游离或二聚物游离或二聚物可显色可显色第6页/共23页L.monocytogenes detection and enumeration in food samples 食品中单增李斯特菌检测Salmonella detection in food, veterinary and clinical samples 食品、兽药及临床样品中沙门氏菌检测Enterobacter sakazakii detection in dehydr

3、ated foodand environmental samples脱水食品及环境样品中阪崎肠杆菌检测第7页/共23页Agar Listeria acc. Ottaviani & AgostiChromogenic medium 单增李斯特菌检测和计数培养基第8页/共23页原理原理:Beta-glucosidase activityBlue colonies-葡萄糖苷酶活性，蓝色Phospholipase activityOpaque halo 磷酸酶活性，混浊晕Listeria spp.Listeria monocytogenes第9页/共23页AloaListeria innocu

4、a Listeria monocytogenes相同的菌落L. mListeria monocytogenes可非常清晰地分辨单增李斯特菌L. i第10页/共23页混合李斯特氏菌存在的问题混合李斯特氏菌存在的问题单增李斯特菌和其它无毒李斯特菌在单增李斯特菌和其它无毒李斯特菌在LEB培养基中生长对比培养基中生长对比(Mac Donald and coll. - 1996)种类 繁殖一代的时间 总代数. (24H - LEB)L.mono 70 min 21L.innoc 55 min 26例如: 在225mL增菌培养基中各有1 个细胞24小时增菌后 - 在 5 l (在 PAL/OXF上的接种量

5、) : 5 个个 L.mono(单增李斯特氏菌单增李斯特氏菌) 和和 150 个个 L.innocua(无毒李斯特菌无毒李斯特菌)第11页/共23页混合李斯特氏菌存在的问题混合李斯特氏菌存在的问题假如随机挑取假如随机挑取5个菌落确认，在个菌落确认，在X个无毒李斯特菌中个无毒李斯特菌中有有1个单增李斯特菌，被检出的可能性如下：个单增李斯特菌，被检出的可能性如下：可能性可能性66% 1/415%5%X = ratio L.i/L.m4192999第12页/共23页ALOA One Day alternative method : 分析方法图分析方法图25 g 食品样品食品样品 + 225 ml H

6、ALF FRASER BROTH 24 H / 30C 涂布涂布 0.1 ml on ALOA 24 H / 37C 存在典型菌落存在典型菌落 : 不存在典型菌落不存在典型菌落 : 确认确认* 不存在单增李斯特氏菌不存在单增李斯特氏菌* : 糖糖 /溶血试验溶血试验 第13页/共23页AFNOR validation (ALOA ONE DAY METHOD - France)Compendium Canada registeredBAM registered (FDA approval)NMKL approval (Sweden)ISO : preferred reference cultu

7、re media for Listeria monocytogenes detection and enumeration (ISO 11290 1&2 revision publication in January 2005)第14页/共23页食品、兽药及临床样品中沙门氏菌检测第15页/共23页Principle:C8 酯酶活性Beta-葡萄糖苷酶活性粉红及紫色菌粉红及紫色菌落落Salmonella蓝色菌落蓝色菌落Klebsiella, Enterobacter白色不透明琼脂增强颜色对比易读数第16页/共23页Examples:C8- 酯酶检测Beta-葡萄糖苷酶活性C8- 酯酶和葡萄糖苷酶活性检测白色菌落Salmonella spp.KlebsiellaSerratiaE.coli, Citrobacter, Proteus, Pseudomonas 第17页/共23页第18页/共23页Principle:葡萄糖苷酶蓝色菌落紫红色菌落其它大肠菌群E. sakazakii第19页/共23页25g sample + 225 ml ESSB18/24H 37CIsolation ESIA18/24H 44C48 H内出阴性结果和