动物实验操作

1、动物实验基本技能大鼠生物学特性l大鼠汗腺极不发达，仅在爪垫上有汗腺，尾巴是散热器官。l大鼠无呕吐反应，对许多药物易产生耐药性。l对营养缺乏敏感，可发生典型的缺乏症状。l大鼠无胆囊，胆汁通过总胆管进入十二指肠。l大鼠神经系统与人类相似。动物实验基本技能 编号与标记方法 大鼠的抓取 大鼠麻醉 供试品给予方法 采集体液 大鼠的采血一、编号与标记方法 穿耳孔法穿耳孔法 标牌法标牌法 烙印法烙印法 剪毛法剪毛法 在每组动物不超过在每组动物不超过l0l0只或一个实验不超过只或一个实验不超过4040只的情况下适用只的情况下适用 实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠 染色剂：染色剂：3-53-5苦味酸溶液

2、，可染成黄色苦味酸溶液，可染成黄色 涂染原则：从左到右、从上到涂染原则：从左到右、从上到下下 左前肢为左前肢为1 1号、左侧腹部号、左侧腹部2 2号、号、左后肢左后肢3 3号，号， 两耳后部两耳后部4 4号、背部号、背部5 5号、后肢号、后肢背部背部6 6号，号， 右前肢右前肢7 7号、右侧腹部号、右侧腹部 8 8号、右号、右后肢后肢9 9号号 头部为头部为4040号、尾巴根为号、尾巴根为1010号。号。 在每组动物不超过在每组动物不超过100100只的情况下适用只的情况下适用 实验动物：大鼠、小鼠实验动物：大鼠、小鼠 常用染色剂：常用染色剂：3-53-5苦味酸溶液，可染成黄色，苦味酸溶液，可

3、染成黄色，作为作为“个个”位数位数 常用染色剂：常用染色剂：0.5%0.5%中性红或品红溶液，可染中性红或品红溶液，可染成红色，作为成红色，作为“十十”位数位数 用两种颜色同时进行染色标记用两种颜色同时进行染色标记 用苦味酸用苦味酸( (黄色黄色) )染色标记作为个位数，个位染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法数的染色标记方法同单色涂染法 用品红用品红( (红色红色) )染色标记作为十位数染色标记作为十位数 左前肢为左前肢为1010号、号、 左侧腹部左侧腹部2020号、左后肢号、左后肢3030号号 两耳后部两耳后部4040号、号、 背部背部5050号、号、 后肢背部后肢背部60

4、60号号 右前肢右前肢7070号、右侧腹部号、右侧腹部 8080号、右后肢号、右后肢9090号号 第第100100号不作染色标记号不作染色标记：用专用耳空器在动物耳朵不同部位：用专用耳空器在动物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：打一小孔或缺口表示一定号码的方法。原则是：左耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、左耳代表十位，右耳代表个位。实验动物：兔、犬、猪犬、猪：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。：一般挂在动物的颈部、耳朵、脚上。实验动物：犬、猴实验动物：犬、猴大鼠饲养盒大鼠饲养盒 + + 面罩面罩 1 1套套 首先戴好防护手套首先戴好防护手套 用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴

5、中部将大鼠提起，放用右手拇指和食指抓住小鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上在大鼠饲养盒的面罩上 左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行滑行 以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取固定 动物全身麻醉分四期：动物全身麻醉分四期： 随意兴奋期，出现运动与运动失调随意兴奋期，出现运动与运动失调 不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止不随意兴奋期，由意识完全丧失至规则的自动呼吸开始时止外科麻

6、醉期外科麻醉期 延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量延髓麻醉期，进入此期，麻醉已严重过量三、实验动物麻醉 麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通过吸入、注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、注射（静脉、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使动物麻醉灌胃等方法使动物麻醉 常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、常用麻醉药物：乙醚（吸入），戊巴比妥钠、硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利硫贲妥钠、氯胺酮（静脉），普鲁卡因、利多卡因（局麻）多卡因（局麻） 麻醉前应禁食麻醉前应禁食8h8h以上以上 麻醉前应准确称体重麻醉前应准确称体重 注意麻醉剂量注意麻醉剂量 麻醉

7、过程中注意观察动物的反应情况麻醉过程中注意观察动物的反应情况 注意保温注意保温 静脉注射时必须缓慢，静脉注射时必须缓慢， 在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温在寒冷冬季，麻醉剂在注射前应加热至动物体温水平水平是使用非挥发性麻醉药对动物进行全是使用非挥发性麻醉药对动物进行全麻术的方法麻术的方法3 3戊巴比妥钠、注射器戊巴比妥钠、注射器 用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部部 右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺刺 针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针3mm3mm左右，

8、接着使注射针头与皮肤左右，接着使注射针头与皮肤呈呈4545度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失 固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液和尿液后即可注射药液 1.1.皮下注射给药皮下注射给药 2.2.皮内注射给药皮内注射给药 3.3.肌肉注射给药肌肉注射给药 4.4.静脉注射给药静脉注射给药 5.5.腹腔注射给药腹腔注射给药是借器械将药物直接灌入动物胃内的方法，此法可以是借器械将药物直接灌入动物胃内的方法，此法可以准

9、确控制给药量，但如果操作不当易造成动物死亡准确控制给药量，但如果操作不当易造成动物死亡 将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液 操作前，大致量一下从口到胃的距离，估计灌胃针头插入的深度 左手捉持动物，使头部向上；右手持针，把灌胃针头的前端放进动物的口腔，顺着上腭部插入咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入动物的胃内， 用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入动物的胃中1.皮下注射给药 原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环管、淋巴管吸收进入血液循环 器材：器材：1m11m1注射器注射器1 1支、生理盐水、烧杯、酒

10、支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球精、碘酒、棉球 注射部位：颈背部、腋下、腹侧和后肢的皮下 常规消毒注射部位的皮肤，用注射针头取一刺入皮下. . 将针头轻轻向左右摆动，则表示已刺入皮下，再轻轻，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。 此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反此法用于观察皮肤血管通透性变化或皮肤反应应 注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进注射部位：动物背部，脱毛，用针头平直进入皮内入皮内 注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔注射药液后，皮肤表面鼓起小泡，停片刻拔出针头出针头将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环管吸收进入血液循环 1

11、ml1ml注射器注射器1 1支、生理盐水、烧杯、酒精、支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球碘酒、棉球一般选择肌肉丰富而无大血管通过一般选择肌肉丰富而无大血管通过的臀部或大腿外测，回抽无血即可注射的臀部或大腿外测，回抽无血即可注射 原理：将药液注入小鼠的尾静脉原理：将药液注入小鼠的尾静脉 器材：器材：1m11m1注射器注射器1 1支、生理盐水、烧杯、金属支、生理盐水、烧杯、金属笼或大小鼠器笼或大小鼠器 、酒精、碘酒、棉球、酒精、碘酒、棉球 将大小鼠放在金属笼或将大小鼠放在金属笼或小鼠固定器小鼠固定器中，通过金属笼或中，通过金属笼或的的孔拉出鼠尾巴孔拉出鼠尾巴 用左手捏住鼠尾巴中下部，用用左手捏住

12、鼠尾巴中下部，用7575酒精棉球反复擦拭尾部；酒精棉球反复擦拭尾部；注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。 右手持4 4号针头的注射器，使针头与静脉平行( (小于3030度角) )；从鼠尾巴下1/41/4处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物 拔出针头后，用干棉球压住注射部位约l-2minl-2min，防止出血体重将药液注入大鼠的腹腔将药液注入大鼠的腹腔注射器注射器1 1支、生理盐水、烧杯支、生理盐水、烧杯 用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部；于尾部；右

13、手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺的两侧进行穿刺 针头刺入皮下后进针针头刺入皮下后进针3mm3mm左右，接着使注射针头与左右，接着使注射针头与皮肤呈皮肤呈4545度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失 固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液肠液和尿液后即可注射药液 注射量：注射量：体重体重 胸水胸水 腹水腹水 消化液消化液 骨髓液骨髓液 动物精液动物精液 乳汁乳汁此法较常

14、用于大、小鼠，成熟小鼠尿量此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量1-1-3ml/24h3ml/24h，大鼠为，大鼠为55-75ml/24h55-75ml/24h常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿液无污染的尿液此法适用于兔、猫、犬等大动物此法适用于兔、猫、犬等大动物 眼眶后静脉丛眼眶后静脉丛( (窦窦) )取血取血 器材：毛细管器材：毛细管( (玻璃或塑料均可玻璃或塑料均可) )、1 1肝素溶肝素溶液、干燥皿、乙醚、试管、干棉球液、干燥皿、乙醚、试管、干棉球 先将毛细管浸泡在先将毛细管浸泡在1 1肝素溶液中数分钟，取出干燥备肝素溶液中数分钟

15、，取出干燥备用用 将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位 左手拇指、食指抓住两鼠耳之间的颈部头皮，并轻轻向下压迫颈部两侧，致大鼠静脉血回流障碍，眼球外突，眶后静脉丛充血 右手持毛细管由大鼠的目内眦部插入结膜，使毛细管与眶壁平行地向喉头方向推进，深度约 轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出 采血量：次0.40.40.6ml0.6ml脑立体定位技术 某些颅外标记与颅内结构具有相对固定的位置关系，确定脑内功能核团的位置 核团微量注射 电位引导 核团的刺激或损毁脑立体定位仪脑立体定位仪的调试:摆稳定位仪，用水平仪测水平。检验电极移动架上各个轴向滑尺是否保持互相垂

16、直，微量注射器针尖是否光滑垂直。检查定位仪各衔接部位的螺丝有无松动。检查头部固定装置两侧是否对称。检查耳杆使两耳杆尖端相对,以此判定耳杆固定的准确程度。鼠颅的固定鼠颅的固定:将麻醉大鼠置于脑立体定位仪上，鼠颅依靠两耳杆及切牙钩三点固定。脑立体定位仪坐标脑立体定位仪坐标“0”点的测得点的测得:按照Paxinos大鼠脑立体定位图谱，以颅骨前囟即冠矢点作为前后方向的“0”参照点，当微量注射器的针尖对准冠矢点时,读取立体定位仪三维坐标上标尺的数值，此数值即是“0”点坐标。生物信号在体检测遥控系统生物信号在体检测遥控系统Illustration of the high fidelity recordin

17、g provided by the C10 telemeter, which allows for the accurate measurement of pulse pressures in mice despite their high heart rate (10 per second!).Bursts of renal sympathetic nerve activity made in a conscious, freely behaving rat 64 days following telemeter implantationPowerLab 系统Faraday cageVibr

18、ation Isolation TableMicroscopeMicro-Manipulators Remote ControllerAmplifiersCCD Camera膜片钳系统膜片钳系统Micro-ManipulatorsDAD-VC systemCCD Camera活体生物发光和荧光成像技术59理想的光源：萤火虫荧光素酶（luciferase）基因、细胞、活体都可被荧光素酶基因标记。活体生物发光成像系统原理活体生物发光成像系统原理遗传学标记实时、原位多波长检测标记癌细胞标记细菌标记转基因鼠60荧光素酶的表达荧光素酶的表达 将荧光素酶基因连接于启动子下游，稳定整合到细胞染色体内，使荧光

19、素酶得到持续表达。启动子染色体体内表达外源注入底物活跃细胞体内发光61活体成像技术的主要应用活体成像技术的主要应用 标记细胞标记细胞 癌症及药物研究癌症及药物研究 标记病毒标记病毒, , DNA, RNADNA, RNA 病毒学及基因治疗病毒学及基因治疗 转基因动物模型转基因动物模型蛋白质相互作用、代谢、发育、内分泌学，蛋白质相互作用、代谢、发育、内分泌学， 等等等等 标记基因标记基因 siRNAsiRNA研究的应用研究的应用 干细胞干细胞, , 免疫免疫 其它其它 细胞凋亡细胞凋亡 组织特异性基因表达组织特异性基因表达 标记细菌标记细菌62体内药物分析的生物发光检测1x106 ，PC-3M-

20、Luc肿瘤细胞，皮下注射14天21天28天35天雄性SCID小鼠处理方式 细胞数无治疗对照 2.2x1095- FU治疗 2.8x108丝裂酶素 3.6x106治疗 小鼠 #6 n=7 小鼠 #40 n=8(从第11天开始给药) 小鼠 #31 n=8 (从第11天开始给药)63乳腺癌原位接种乳腺癌原位接种64U87 U87 脑胶质瘤成像脑胶质瘤成像 cancer research cancer research 2011,82011,8PTAofU87humangliomasinmousebrains.A,representativebioluminescenceimagesofnudemicebe