实验一微生物实验课介绍与要求及环境、人体表面微生物检测(张理珉)

1、微生物学实验课介绍与要求微生物学实验课介绍与要求及环境、人体表面微生物的检测及环境、人体表面微生物的检测任课教师任课教师程立忠（程立忠王绍辉（王绍辉张理珉（张理珉余泽芬（余泽芬教材用书 1沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验沈萍，范秀容，李广武主编微生物学实验（第三版）北京：高等教育出版社，（第三版）北京：高等教育出版社，1999第四版已于第四版已于2007年年11月出版月出版主要参考书主要参考书1杜连祥，路福平主编微生物学实验技术杜连祥，路福平主编微生物学实验技术M北京：中国轻工业出版社，

2、北京：中国轻工业出版社，20052周德庆微生物学实验教程（第周德庆微生物学实验教程（第2版）版）M北京：高等教育出版社，北京：高等教育出版社，20063杨文博主编微生物学实验杨文博主编微生物学实验M北京：化北京：化学工业出版社，学工业出版社，20044赵斌，何绍江主编微生物学实验赵斌，何绍江主编微生物学实验M北北京：科学出版社，京：科学出版社，20025东秀珠，蔡妙英主编常见细菌系统分类东秀珠，蔡妙英主编常见细菌系统分类和鉴定方法和鉴定方法M北京：科学出版社，北京：科学出版社，2001 1、明确实验课的目的；、明确实验课的目的；2、实验课的内容介绍；、实验课的内容介绍；3、实验课的具体安排和要

3、求；、实验课的具体安排和要求；4、实验安全知识介绍、实验安全知识介绍5、实验室环境及人体表面微生物检测、实验室环境及人体表面微生物检测实实 验验 内内 容容 一一微生物学实验课介绍微生物学实验课介绍与安全教育与安全教育 1、实验课的目的、实验课的目的意义：意义： 微生物学是生命科学中最基础的学科微生物学是生命科学中最基础的学科之一，实验技术的独特性和重要性。之一，实验技术的独特性和重要性。 促进了多个学科的建立和发展促进了多个学科的建立和发展生生物化学、分子生物学、生物工程学、物化学、分子生物学、生物工程学、免疫学、病毒学等等免疫学、病毒学等等 广泛的应用广泛的应用基础理论研究、工业、基础理论

4、研究、工业、农业、环境、医学、食品等，农业、环境、医学、食品等，实验内容实验内容 无菌操作技术；无菌操作技术； 培养基的制备和消毒灭菌技术；培养基的制备和消毒灭菌技术； 微生物的分离培养纯化技术；微生物的分离培养纯化技术； 菌种的保藏技术菌种的保藏技术 微生物制片染色技术；微生物制片染色技术； 微生物数量和大小测定技术；微生物数量和大小测定技术； 噬菌体的分离纯化及效价的测定；噬菌体的分离纯化及效价的测定； 微生物生理生化反应；微生物生理生化反应； 微生物微生物DNA提取技术介绍；提取技术介绍； 免疫学技术介绍；免疫学技术介绍； 实验课安排实验课安排 根据教学计划，本门实验课程根据教学计划，本

5、门实验课程2 2学分，学分，4 4学时学时/ /周，周，1414周共周共5656学时，每学时学时，每学时4545分钟，每次课分钟，每次课3 3小时小时；实验结果的观察实验结果的观察是实验过程的重要内容。是实验过程的重要内容。 分组分组两人一组，登记联系电话；两人一组，登记联系电话；穿白色实验服进入实验室；穿白色实验服进入实验室； 每组准备记号笔和打火机各一个；每组准备记号笔和打火机各一个； 值日生由班委每次实验前委派；值日生由班委每次实验前委派； 下午实验课改在下午实验课改在1313：3030上，上， 不迟到，不缺席，有事提前请假；迟到不迟到，不缺席，有事提前请假；迟到5 5分分钟以上以缺席计

6、入实验习惯成绩；钟以上以缺席计入实验习惯成绩； 爱护实验用具；爱护实验用具； 实验完成后认真清洗实验用具，并摆放整实验完成后认真清洗实验用具，并摆放整齐；齐； 离开实验室要经教师检查同意方可离开；离开实验室要经教师检查同意方可离开； 认真做好值日生工作，有人具体负责安排认真做好值日生工作，有人具体负责安排检查。检查。实验报告的格式实验报告的格式实验报告要求实验报告要求 1.每位学生准备规定式样的实验报告纸。每位学生准备规定式样的实验报告纸。 2.上课时每给出一次作业，就在下一次上上课时每给出一次作业，就在下一次上课前上交这一次的实验报告，不得拖延时间，课前上交这一次的实验报告，不得拖延时间，否

7、则后果自负。否则后果自负。 3.报告要求写清楚实验目的、原理、步骤、报告要求写清楚实验目的、原理、步骤、结果及思考题。希望简洁、工整。结果及思考题。希望简洁、工整。 4.本门课结束前，要求使用统一的封面，本门课结束前，要求使用统一的封面，把自己的所有实验报告按实验先后顺序装订把自己的所有实验报告按实验先后顺序装订成一册，交给实验教师。成一册，交给实验教师。实验成绩实验成绩 实验用到仪器设备实验用到仪器设备 显微镜（光学显微镜（光学普通、相差、微分干涉差、普通、相差、微分干涉差、暗视野；电子暗视野；电子扫描、透射）；高压蒸汽扫描、透射）；高压蒸汽灭菌锅（立式和卧式）；超净工作台、隔水灭菌锅（立式

8、和卧式）；超净工作台、隔水式恒温培养箱；鼓风恒温干燥箱；恒温振荡式恒温培养箱；鼓风恒温干燥箱；恒温振荡培养箱（旋转式和往复式）；旋涡振荡器；培养箱（旋转式和往复式）；旋涡振荡器；恒温水浴锅；恒温水浴锅；pH计；分光光度计（紫外、可计；分光光度计（紫外、可见光、红外、原子吸收等）；离心机；电泳见光、红外、原子吸收等）；离心机；电泳仪、仪、PCR仪、发酵罐、酶标仪、冰箱；微波仪、发酵罐、酶标仪、冰箱；微波炉等。炉等。实验用到器械实验用到器械 试管（试管（test tube） 德汉氏小管（德汉氏小管（Durham tube） 小塑料离心管，又称小塑料离心管，又称Eppendorf管管 玻璃吸管（玻璃

9、吸管（glasspipette） 微量吸管（微量吸管（micropipette） 微量加样枪微量加样枪 培养皿（培养皿（petri dish） 三角烧瓶（三角烧瓶（erlenmeyer flask）实验用到器械实验用到器械 载玻片（载玻片（slide）和盖玻片（）和盖玻片（coverslip） 滴瓶滴瓶(dropper bottle) 接种工具接种工具接种环、接种针、接种钩、接种环、接种针、接种钩、接种铲、接种刀、涂布器（玻璃或不锈接种铲、接种刀、涂布器（玻璃或不锈钢制作）等。钢制作）等。 常见的接种工具常见的接种工具（可根据要求自已定做）（可根据要求自已定做）常用玻璃仪器常用玻璃仪器实验室安

10、全实验室安全 1 1、火灾；、火灾； 2 2、触电；、触电； 3 3、跑（漏）水；、跑（漏）水； 4 4、化学品伤害及中毒；、化学品伤害及中毒； 5 5、灼伤；、灼伤； 6 6、割（划）伤。、割（划）伤。先保护好自身的安全，再施救先保护好自身的安全，再施救不要慌张，按安全预案处理不要慌张，按安全预案处理认真负责，不推缷责任认真负责，不推缷责任逐级上报，不隐瞒事故逐级上报，不隐瞒事故(一一)化学药品及溶剂的处理方法化学药品及溶剂的处理方法(二二)安全用电，防止事故安全用电，防止事故 （三）节约用水，防止跑漏（三）节约用水，防止跑漏1.不用水时，随手关闭阀门。2.废物废液不准倒在水槽内，实验完了放

11、水冲洗水槽和下水管，勿使废液残留其中。（四）安全用药，防中毒（四）安全用药，防中毒 1.使用化学药品前，要充分了解其化学性质、物理性质和使用注意事项。 2.不能尝化学药品，也不能直接去闻化学药品，避免用手直接去接触药品；使用药品和实验结束后立即用肥皂水洗手。 3.尽量不可在实验室进餐。 4.有毒或带剌激味的实验要在通风橱内进行，实验期间要开排风扇，或开窗通风。 5. 做好废液处理，防止环境污染；发现中毒现象，及时对症治疗，必要时送医院。实验时需特别注意：实验时需特别注意：人身安全人身安全 防止割伤、灼伤，如有防止割伤、灼伤，如有发生，应用急救药品施治。发生，应用急救药品施治。意意 外外 对对

12、策策学生衣服着火的对策学生衣服着火的对策 以灭火毡包以灭火毡包裹该同学，并使裹该同学，并使其在地上滚动其在地上滚动 其他同学立刻通其他同学立刻通知老师。知老师。实验室的窗帘布着火的对策：实验室的窗帘布着火的对策： 取出灭火器，拔出安取出灭火器，拔出安全针。全针。 把喷咀对准火源。把喷咀对准火源。 按掣使灭火器喷出二按掣使灭火器喷出二氧化碳。氧化碳。 其他同学立刻通知老其他同学立刻通知老师。师。酒精溅在实验桌上并着火的对策：酒精溅在实验桌上并着火的对策： 利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用沙盖着。利用沙桶或湿抹布把燃烧的液体用沙盖着。 其他同学立刻通知老师。其他同学立刻通知老师。学生打破了烧杯，被碎

13、片割伤流血的学生打破了烧杯，被碎片割伤流血的对策对策 以清水冲洗伤口。以清水冲洗伤口。 贴上干净的消毒胶布。贴上干净的消毒胶布。 其他同学立刻通知老师。其他同学立刻通知老师。化学药品溅进学生的眼睛内的对策化学药品溅进学生的眼睛内的对策 用洗眼瓶以大量清水冲洗眼睛。用洗眼瓶以大量清水冲洗眼睛。 其他同学立刻通知老师。其他同学立刻通知老师。一个学生在倾倒酸时意外地接触到酸一个学生在倾倒酸时意外地接触到酸的对策的对策 立刻以大量清水冲洗患处最少五分钟。立刻以大量清水冲洗患处最少五分钟。 立刻通知老师。立刻通知老师。实验物品常见警告标识符号灭火器及其使用方法灭火器及其使用方法实实 验验 内内 容容 二

14、二 一、目的要求一、目的要求 检查实验室空气中及各人手检查实验室空气中及各人手上的微生物上的微生物(细菌为主细菌为主)，并加以，并加以统计、比较和描述（数量、菌落统计、比较和描述（数量、菌落形态等）。形态等）。 使学生认识到微生物无处不使学生认识到微生物无处不在，以便在以后的实验中重视无在，以便在以后的实验中重视无菌操作。菌操作。二、实验原理二、实验原理 微生物广泛分布于室内外、水、空微生物广泛分布于室内外、水、空气和土壤中；气和土壤中； 通过对环境和人体表面微生物的检通过对环境和人体表面微生物的检测及观察，建立起测及观察，建立起“微生物无处不微生物无处不在、无孔不入在、无孔不入”的概念。的概

15、念。 形成自身良好的卫生习惯，认识到形成自身良好的卫生习惯，认识到在微生物实验中无菌操作的重要性。在微生物实验中无菌操作的重要性。 平板培养基含有微生物生长所需的营养平板培养基含有微生物生长所需的营养成分，当不同来源的样品接种于培养基成分，当不同来源的样品接种于培养基上，在适宜温度下培养，上，在适宜温度下培养，12天内每一菌天内每一菌体细胞即能通过很多次细胞分裂而进行体细胞即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个肉眼可见的细胞群体繁殖，形成一个肉眼可见的细胞群体（菌落）；（菌落）； 每种微生物都有其特有的菌落形态，一每种微生物都有其特有的菌落形态，一般情况下一个菌落对应一个微生物活细般情况下一个菌落对应一个微生物活细胞，这样就可以统计不同微生物在某样胞，这样就可以统计不同微生物在某样品中的数量。品中的数量。 牛肉膏蛋白胨培养基平板牛肉膏蛋白胨培养基平板 3 3个个/ /组；组； 洗手液、酒精灯、记号笔、恒温培洗手液、酒精灯、记号笔、恒温培养箱等。养箱等。 )/(100100532mrtNX个 多级撞击式空气微生多级撞击式空气微生物采样器物采样器34 2、计算出相应的空气中微生物数量？、计算出相应的空气中微生物数量？ 3、洗手前后的手指平板，菌落数有无、洗手前后的手指平板，菌落数有无区别，为什么？如果想定量测定人体某区别，为什么？如果想定量测定人体某部分皮肤上的细菌如何