植物组织培养课件 第二章 实验室设备和基本操作技术

1、内容提纲内容提纲一、实验室布局一、实验室布局二、根本仪器设备二、根本仪器设备三、培养基及其配制三、培养基及其配制四、灭菌技术四、灭菌技术五、外植体五、外植体六、培养条件六、培养条件七、继代培养七、继代培养八、试管苗驯化一再八、试管苗驯化一再开展植物组织培养工作，应配备：l1.植物组织培养室的根本设置分室植物组织培养室的根本设置分室1 1准备室：进行接种前材料准备用。准备室：进行接种前材料准备用。 进行的内容有：进行的内容有： A. A.洗涤室：器皿和植物材料清洗。洗涤室：器皿和植物材料清洗。 B. B.药品室：存放各类药品。药品室：存放各类药品。 C. C.称量室：称量用称量室：称量用 D.

2、D.培养基配制室：培养基配制室： E. E.灭菌室灭菌室 ：培养基、器皿灭菌用：培养基、器皿灭菌用l1.植物组织培养室的根本设置分室植物组织培养室的根本设置分室l开展植物组织培养工作，应配备：开展植物组织培养工作，应配备：2 2无菌操作室接种室无菌操作室接种室3 3培养室：是植物材料培养的场所，存培养室：是植物材料培养的场所，存 放接好种的培养瓶用放接好种的培养瓶用4 4驯化室：转瓶前进行驯化用。驯化室：转瓶前进行驯化用。5 5其他设施：其他设施： A. A.细胞学实验室：显微镜检查用。细胞学实验室：显微镜检查用。 B. B.温室、大棚：温室、大棚： C. C.物品贮藏室：物品贮藏室： D.

3、D.生化分析实验室：生化分析实验室： l2.植物组织培养室的具体规划l根据规模需要， 一般在40以上。l规划原那么：要科学、合理、实用，方便操作。l 减少污染机率。准备室准备室 准备室准备室 接种室接种室 缓冲间缓冲间培培养养室室l生命科学院组织培养室平面图生命科学院组织培养室平面图12241224l1.灭菌设备灭菌设备l A.高压蒸汽灭菌器立式高压灭菌器立式高压灭菌器卧式高压灭菌器卧式高压灭菌器手提式高手提式高压灭菌器压灭菌器l1.灭菌设备lB.枯燥箱：属于干热灭菌设备。用器皿、器械灭菌，不能用于培养基灭菌l1.灭菌设备l C.紫外灯：利用紫外灯发出紫外光波杀菌。用于空气和环境外表灭菌。l1

4、.灭菌设备l D.过滤灭菌器：利用微孔膜和 过滤掉空气中微生物。l E.酒精灯：利用火焰高温灭菌。l2.准备室其它设备l A.药品柜： l B.试验台：根据需要设置2个以上 l C.冰箱：1-2只存放母液、试剂、试验材料 l D.蒸馏水器：1套 l E.木架：放置玻璃器皿 l F.自来水、水池l3.接种设备l A.超净工作台：单人、l 双人，单面双面。原理l B.显微镜和解剖镜：l 剥离茎尖和观察培养材料用。l C.酒精灯：l D.紫外灯：l E.接种工具：l 镊子、接种针l 剪刀、解剖刀l4.培养室设备lA.A.培养架培养架 lB.B.控温设备控温设备 l a.制冷 空调l b.加热 加热器

5、l c.温控仪 lC.C.控光设备：控光设备：自动定时器控制光照时间 lD.D.恒温摇床：恒温摇床：用于液体培养 lE.光照培养箱或人工气候室l4.培养室设备l G.培养皿：l 培养瓶、三角瓶、l 培养皿和试管等l 玻璃、塑料聚碳酸脂l配培养基所器皿设备l A.盛装容器：细口瓶棕色、白色l B.称量仪器：l 电子天平称量激素l 托盘天平称量蔗糖和琼脂l 容量瓶、量筒、烧杯、l 移液管、量杯等l C.电炉、微波炉：溶琼脂用l 试纸或酸度计：检测pH值用 三、培养基及其配制 (一) 种类 (二) 培养基成分三培养基母液四培养基配制l培养基种类很多，迄今根本培养基的配方几百种，较常用的一二十种。l如

6、：1MS、改进MS培养烟草用l 2MTl 3White 培养番茄 l 改进White生根培养l 4 N6培养水稻l 5 B5 培养大豆l 6 Blaydes、l 7 Nitschl 8 NT烟草叶肉原生质培养。l (Inorganic nutrients) (Inorganic nutrients)l(1)(1)大量元素大量元素 (Macro-elements) (Macro-elements)lN N：各种氨基酸、维生素、蛋白质和核酸：各种氨基酸、维生素、蛋白质和核酸的重要组成局部。的重要组成局部。lP P：与核酸蛋白质合成密切相关，细胞分：与核酸蛋白质合成密切相关，细胞分化增殖需要大量的化

7、增殖需要大量的P P。lK K：影响培养物中酶的活动。：影响培养物中酶的活动。l镁是叶绿素分子的一局部；镁是叶绿素分子的一局部；l钙是细胞壁的组成之一；钙是细胞壁的组成之一；CaCa、S S、MgMg影响影响着培养物中酶的活动和新陈代谢的过程。着培养物中酶的活动和新陈代谢的过程。l2 2微量元素微量元素 Micro-elementsMicro-elementsl 如：如：FeFe、NaNa、MnMn、ZnZn、B B、MoMo、CuCu、CoCo、I I。l锰：与植物呼吸作用和光合作用有关；锰：与植物呼吸作用和光合作用有关；l铁：有助于提高愈伤组织的诱导率和促铁：有助于提高愈伤组织的诱导率和促

8、进胚的发育；进胚的发育；l硼：影响植物体内蛋白质的合成；硼：影响植物体内蛋白质的合成；l钠：植物组织中酶的组成成分，有防止钠：植物组织中酶的组成成分，有防止叶绿素被破坏的作用。叶绿素被破坏的作用。 l2.2.有机营养成分有机营养成分l1 1碳源碳源l植物组织培养中，由于培养物的光合作用能植物组织培养中，由于培养物的光合作用能力较弱，需要在培养基中附加碳水化合物作力较弱，需要在培养基中附加碳水化合物作为生长发育所需的能源为生长发育所需的能源代谢原料，又可代谢原料，又可维持其一定的渗透压。维持其一定的渗透压。l 最常用的碳源是蔗糖，浓度一般为最常用的碳源是蔗糖，浓度一般为2%-5%2%-5%。一般

9、蔗糖为碳源时，离体的双子叶植物的根一般蔗糖为碳源时，离体的双子叶植物的根生长得最好，而以右旋糖葡萄糖时，单子叶生长得最好，而以右旋糖葡萄糖时，单子叶植物的根生长得好。也可使用山梨醇、麦芽植物的根生长得好。也可使用山梨醇、麦芽糖、甘露糖等。糖、甘露糖等。 l2.2.有机营养成分有机营养成分l2 2维生素维生素 l 在植物细胞中主要以各种辅酶形式参与代谢在植物细胞中主要以各种辅酶形式参与代谢活动。在植物组织培养中发挥很重要的作用。活动。在植物组织培养中发挥很重要的作用。lVB1VB1盐酸硫胺素：对愈伤组织形成有利。盐酸硫胺素：对愈伤组织形成有利。lVB6VB6盐酸吡哆醇：能促进根的生长。盐酸吡哆醇

10、：能促进根的生长。lVMVMBCBC叶酸：是蛋白质和核酸合成的叶酸：是蛋白质和核酸合成的必需因子，在细胞分裂和繁殖中起重要作用；必需因子，在细胞分裂和繁殖中起重要作用；VB5VB5烟酸：与植物代谢、胚的发育有关。烟酸：与植物代谢、胚的发育有关。lVCVC抗坏血酸：抗氧化，防止组织褐变。抗坏血酸：抗氧化，防止组织褐变。l2.2.有机营养成分有机营养成分l3 3肌醇环己六醇：促进糖类转化，也肌醇环己六醇：促进糖类转化，也是细胞壁的构建成分。是细胞壁的构建成分。l4 4氨基酸：是蛋白质组成局部，也是有机氨基酸：是蛋白质组成局部，也是有机氮源。氮源。l5 5天然复合物：为了促进某些愈伤组织、天然复合物

11、：为了促进某些愈伤组织、器官生长。器官生长。l 如：椰乳、香蕉汁、马铃薯汁、苹果和番如：椰乳、香蕉汁、马铃薯汁、苹果和番茄汁；茄汁；l 人参、西洋参粉；人参、西洋参粉；l 蜂王浆、蜂王浆、 l3.3.植物生长调节剂植物生长调节剂l1 1生长素生长素 l 促进细胞生长与分裂，促进生根促进细胞生长与分裂，促进生根l IAA IAA吲哚乙酸：吲哚乙酸：l IBA IBA吲哚丁酸吲哚丁酸 l NAA NAA萘乙酸萘乙酸l 2,4-D 2,4-D二氯苯氧乙酸二氯苯氧乙酸l 2,4,5-T 2,4,5-T三氯苯氧乙酸三氯苯氧乙酸 l NOA NOA萘氧乙酸萘氧乙酸l P-CPA P-CPA对氯苯氧乙酸对氯

12、苯氧乙酸副作用小，活力低，稳定性差，用的少。副作用小，活力低，稳定性差，用的少。多用于生根培养，多用于生根培养，效果好，效果好，与细胞与细胞分裂素互作促进芽增殖和生长。分裂素互作促进芽增殖和生长。对愈伤组织的诱导和生长对愈伤组织的诱导和生长效果好。但强烈抑制芽的效果好。但强烈抑制芽的形成，影响器官发育。形成，影响器官发育。l3.3.植物生长调节剂植物生长调节剂l2 2细胞分裂素细胞分裂素l 促进细胞分裂与分化，诱导胚状体和不定芽促进细胞分裂与分化，诱导胚状体和不定芽形成，延缓组织衰老，促进蛋白质合成。形成，延缓组织衰老，促进蛋白质合成。l 6-BA 6-BA苄基腺嘌呤苄基腺嘌呤l KT KT冲

13、动素冲动素l Zt Zt玉米素玉米素l 2-ip 2-ip异戊烯腺嘌呤异戊烯腺嘌呤 l3.3.植物生长调节剂植物生长调节剂l3 3赤霉素赤霉素l 组培中所用的是组培中所用的是GA3GA3。与上面二类调节物。与上面二类调节物质相比，不常使用。质相比，不常使用。lA.A.可启动细胞分裂，促进细胞生长，打破可启动细胞分裂，促进细胞生长，打破休眠。休眠。lB.B.抑制器官发生：对组织培养中器官和胚抑制器官发生：对组织培养中器官和胚状体形成有抑制作用。状体形成有抑制作用。lC.C.促进形成器官生长：对已形成器官和胚促进形成器官生长：对已形成器官和胚状体生长有促进作用。状体生长有促进作用。l3.3.植物生

14、长调节剂植物生长调节剂l4 4其它种类其它种类l A. A.脱落酸脱落酸ABAABA: :抑制生长，促进体胚抑制生长，促进体胚形成形成 l B. B.多胺多胺PAPA：调控器官发生：调控器官发生, ,延缓原延缓原生质体衰老生质体衰老l C. C.多效唑多效唑PP333PP333：促进植物矮化，：促进植物矮化，分枝、生根分枝、生根l4.4.凝固剂凝固剂l配制固体培养基需要添加的物质。使培养基配制固体培养基需要添加的物质。使培养基凝固成固体培养基，未加为液体培养基。凝固成固体培养基，未加为液体培养基。l常用凝固剂有：琼脂粉或条，较常用。常用凝固剂有：琼脂粉或条，较常用。l 用量：用量：6-10g6

15、-10gl 明胶明胶(gelatin )(gelatin )、琼脂糖、琼脂糖agaroseagarosel琼脂特性：是从海藻中提取的高分子化合物。琼脂特性：是从海藻中提取的高分子化合物。l 溶于溶于9595左右热水成溶胶状左右热水成溶胶状l 温度低于温度低于4040时凝固成固体状时凝固成固体状态态l5.5.培养基中其它成分及作用培养基中其它成分及作用l1) 1) 活性炭活性炭l 作用：吸附培养中有毒害物质，抑制褐变，作用：吸附培养中有毒害物质，抑制褐变，减少玻璃化，促进生根。减少玻璃化，促进生根。l 用量：一般用量：一般0.5-3%0.5-3%，会影响琼脂凝固度，会影响琼脂凝固度l2 2抗生素

16、抗生素l 抗生素作用：防止外植体内生菌污染。抗生素作用：防止外植体内生菌污染。l 种类：青霉素、链霉素、土霉素、四环素种类：青霉素、链霉素、土霉素、四环素等等l 用量：用量： 一般一般5-205-20 / L / L，l注意问题：注意问题：1.不同抗生素对不同种菌抑制效果有差异2.有单用一种无效，必须几种配合使用才有效3.用时要考虑抑制杂菌效果和对植物不利影响4.停止使用抗生素后，污染会上升。l5.5.培养基中其它成及作用培养基中其它成及作用l3 3抗氧化物抗氧化物l 种类：种类：VCVC、半胱氨酸、谷胱甘肽、柠檬酸、半胱氨酸、谷胱甘肽、柠檬酸等等l 作用：抑制外植体褐变。褐变是组织分泌作用：

17、抑制外植体褐变。褐变是组织分泌酚类物质被氧化引起。这种氧化会毒害外植酚类物质被氧化引起。这种氧化会毒害外植体。体。l4 4硝酸银硝酸银l 作用：抑制乙烯活性，防止组织衰老，促作用：抑制乙烯活性，防止组织衰老，促进器官和胚状体发生。进器官和胚状体发生。l 用量：一般用量：一般1-101-10 / L / L，l 注意：有一定副作用，不要长期将组织保注意：有一定副作用，不要长期将组织保存在含硝酸银的培养基中存在含硝酸银的培养基中l12-2-2l6.6.培养基中的培养基中的pHpH值值l范围：范围： pH pH一般一般5.5-6.0,5.5-6.0,最常用最常用pH pH l作用：作用：lA.A.影

18、响培养材料生长：影响培养材料生长：pHpH和时，和时，l 生长会停滞。生长会停滞。lB.B.影响培养基凝固：影响培养基凝固： pH pH时，培养基会过硬，时，培养基会过硬，5.0 5.0 琼脂凝固下降，或不凝固。琼脂凝固下降，或不凝固。l温度对温度对pHpH影响：经高温、高压灭菌后，影响：经高温、高压灭菌后， pH pH会会下降个单位。下降个单位。l检测：用精密检测：用精密pHpH试纸试纸l调节：有调节：有1mol/L NaoH1mol/L NaoH、HCIHCIl1.母液的配制与保存l为什么要配母液？l 节省时间l 便于称量l母液配属数：考虑稀释配培养基时方便l 一般配母液是将培养基配方扩大

19、10X、20X、100X或更高倍。l以MS培养基为例：l母液：l1.1.母液的配制与保存母液的配制与保存l母液母液：大量元素：大量元素10102020l注意：按顺序溶解后再参加下一种，不要剩余注意：按顺序溶解后再参加下一种，不要剩余20(单独溶解)l1.1.母液的配制与保存母液的配制与保存l母液母液：微量元素：微量元素100100200200l注意：按顺序溶解后，再参加下一种，注意：按顺序溶解后，再参加下一种，l 一粒都能剩余，否那么浓度达不到要求一粒都能剩余，否那么浓度达不到要求l1.1.母液的配制与保存母液的配制与保存l母液母液 ：铁盐：铁盐100100200200l1.1.母液的配制与保

20、存母液的配制与保存l母液母液 ：有机成分：有机成分100100200200l以配以配200 x200 x为例：为例：成分成分1L1L母液用量母液用量（mg/Lmg/L）每升平培养基取用量每升平培养基取用量mlml肌醇肌醇20000.0020000.005 5烟酸烟酸100.00100.00盐酸吡多醇盐酸吡多醇100.00100.00盐酸硫胺素盐酸硫胺素20.0020.00甘胺酸甘胺酸400.00400.00l2.2.激素母液的配制与保存激素母液的配制与保存l植物生长调节物质的贮备液需单独配制，激素植物生长调节物质的贮备液需单独配制，激素母液配成母液配成100X-500Xmg/L100X-500

21、Xmg/L。由于多数植物激素由于多数植物激素难溶于水，用以下方法配制：难溶于水，用以下方法配制： lIAAIAA、IBAIBA：溶于少量溶于少量95%95%酒精酒精 加水定容加水定容 lNAANAA：溶于少量溶于少量95%95%酒精或少量酒精或少量1 1NNaOH NNaOH 加水定溶加水定溶 l2,4-2,4-D D：溶于少量溶于少量1 1N NaOHN NaOH加水定容加水定容 lKTKT、BABA：N-1N HCl N-1N HCl 加水定容加水定容 lGAGA3 3：95%95%酒精酒精 以上配好的母液需贮存于2-4的冰箱中，定期检查有无沉淀或微生物的污染，如发现霉菌、浑浊或沉淀，那么

22、不能再用。 l1. 1. 浓度适宜浓度适宜l2. 2. 按顺序称量按顺序称量 l3. 3. 原那么上应使每种成份分别溶解，一粒不原那么上应使每种成份分别溶解，一粒不剩，然后再把它们彼此混合。尤其是铁盐母剩，然后再把它们彼此混合。尤其是铁盐母液，否那么易产生沉淀。液，否那么易产生沉淀。l4. 4. 贴标签如贴标签如MSIMSI，10 x10 x，2021.9.182021.9.18贮存贮存于于2-42-4，贮备时间不宜过长。，贮备时间不宜过长。l5. 5. 铁盐液应贮存于琥珀色棕色玻璃瓶中，铁盐液应贮存于琥珀色棕色玻璃瓶中，防氧化。防氧化。l3.3.培养基的配制培养基的配制l步骤如下：步骤如下：

23、l1 1琼脂琼脂+ +蔗糖蔗糖+H2O+H2O3/4V3/4V 加热溶解加热溶解l2 2按比例依此参加母液按比例依此参加母液、及及生长调节物质和其它特殊补加物。遇热易分生长调节物质和其它特殊补加物。遇热易分解的物质除外解的物质除外 l注意计算好所要生长调节物质激素的用量注意计算好所要生长调节物质激素的用量l不要出现错误！不要出现错误！l3 3加蒸馏水至最终容积定容加蒸馏水至最终容积定容-1N NaOH-1N NaOH或或HClHCl调节调节pHpH。一般高压灭菌后。一般高压灭菌后 pHpH值会下降值会下降0.20.2 5 5分装分装100ml100ml三角瓶，三角瓶，40ml/40ml/瓶，盖

24、封瓶，盖封严瓶口材料：锡箔，三层称量纸，棉塞等严瓶口材料：锡箔，三层称量纸，棉塞等 kg/cm2kg/cm2，15-20min15-20min18min18min 配置好的培养基应尽快使用，常温下25一般放置1-2周，4黑暗下保存也不宜时间过长。 原因： 污染 成分变化 如IAA易分解 高温高压消毒时高温高压消毒时应注意应注意： 1. 1. 高压消毒锅内须按规定加至一定量的水。高压消毒锅内须按规定加至一定量的水。 2. 2. 消毒锅内不宜装得太满，以保证蒸汽能在消毒锅内不宜装得太满，以保证蒸汽能在锅中充分的循环。锅中充分的循环。 kg/cm2时，翻开放气阀排净冷空气时，翻开放气阀排净冷空气1-

25、2kg/cm2，温，温度度121下下 维持维持15 20 min18 min 。 也可通过直接翻开放气阀加热排除锅内冷空气。也可通过直接翻开放气阀加热排除锅内冷空气。kg/cm2以下方可翻开放气阀，以免压力骤然改变而导以下方可翻开放气阀，以免压力骤然改变而导致培养基冲出培养瓶。致培养基冲出培养瓶。 灭菌法灭菌法 物理灭菌物理灭菌 化学灭菌化学灭菌 湿热灭菌湿热灭菌高压灭菌锅高压灭菌锅121，kg/cm2，15-20min 干热灭菌干热灭菌烘箱烘箱160-180，1-3h细菌滤膜细菌滤膜um 射线射线紫外灯紫外灯空气消毒空气消毒 薰蒸薰蒸甲醛和高锰酸钾甲醛和高锰酸钾 消毒剂消毒剂次氯酸钙、氯化汞

26、等次氯酸钙、氯化汞等 四、灭菌技术四、灭菌技术l1.1.材料来源材料来源l取自健壮植株，保证内部无菌。取自健壮植株，保证内部无菌。 l2.2.外表消毒外表消毒 l如外植体外表污染很严重，须先用流水如外植体外表污染很严重，须先用流水冲洗冲洗1h1h或更长的时间，后用外表消毒剂或更长的时间，后用外表消毒剂进行消毒。进行消毒。 一些外表消毒剂的消毒效果一些外表消毒剂的消毒效果 消毒剂消毒剂 使用浓度使用浓度 消毒时间消毒时间min 效果效果 次氯酸钙次氯酸钙 9-10% 5-30 很好很好 次氯酸钠次氯酸钠 2% 5-30 很好很好 过氧化氢过氧化氢 10-12% 5-15 好好 溴水溴水 1-2%

27、 2-10 很好很好 硝酸银硝酸银 1% 5-30 好好 氯化汞氯化汞 0.1-1% 2-10 满意满意 抗生素抗生素 4-50mg/L 30-60 相当好相当好 在用杀菌剂处理之前先把植物材料在70%酒精70%酒精比其它浓度酒精更具渗透力和杀菌力，且易散发，但灭菌时间不易过长，否那么会杀死组织细胞。中浸数秒，或在消毒液里加上几滴外表活性剂，如Triton-X或Tween-80。灭菌处理时可磁力搅拌或人工屡次搅动，提高杀菌效果。 外表消毒处理之后，必须用无菌水将材料漂洗3-4次，以除掉所有残留的杀菌剂。 3. 无菌操作无菌操作 植物组织培养中由于培养植物组织培养中由于培养基中含有高浓度蔗糖，能

28、供养基中含有高浓度蔗糖，能供养很多微生物，很多微生物，如细菌和真菌的如细菌和真菌的生长。生长。一旦接触培养基，微生一旦接触培养基，微生物的生长速度一般都比培养的物的生长速度一般都比培养的组织快得多，最终将组织杀死。组织快得多，最终将组织杀死。这些污染微生物还可能排泄对这些污染微生物还可能排泄对植物组织有毒的植物组织有毒的代谢废物代谢废物。因。因此，无菌操作显得尤为重要，此，无菌操作显得尤为重要，应严格按照无菌操作规程进行应严格按照无菌操作规程进行操作。操作。 无菌操作前无菌操作前1010minmin先使超净工作台处先使超净工作台处于工作状态，让过滤空气吹拂工作台和于工作状态，让过滤空气吹拂工作

29、台和四周台壁。所有的操作工具包括培养皿、四周台壁。所有的操作工具包括培养皿、解剖刀、接种针、镊子和剪刀等事先均解剖刀、接种针、镊子和剪刀等事先均需用牛皮纸包好进行湿热灭菌。需用牛皮纸包好进行湿热灭菌。 本卷须知：本卷须知： 1入室前，先用肥皂洗手，指甲不宜过长。入室前，先用肥皂洗手，指甲不宜过长。 2工作前穿上清洗干净的专用工作服消毒无菌工作前穿上清洗干净的专用工作服消毒无菌服最好，戴上事先消毒的帽子、口罩。服最好，戴上事先消毒的帽子、口罩。 3操作前用操作前用70%酒精擦洗双手，各类器械在操作酒精擦洗双手，各类器械在操作前最好再次用火焰干热灭菌，并且在操作过程中时前最好再次用火焰干热灭菌，并

30、且在操作过程中时常进行灭菌，时常擦洗双手，防止双重传递污染。常进行灭菌，时常擦洗双手，防止双重传递污染。 4严禁操作时谈笑，防止唾沫中的细菌扩散引起严禁操作时谈笑，防止唾沫中的细菌扩散引起污染。污染。 5翻开培养容器塞子或盖子前，火焰烧瓶口，把灰翻开培养容器塞子或盖子前，火焰烧瓶口，把灰尘固定在瓶口上，杀死菌类。因为试管在贮存时可能尘固定在瓶口上，杀死菌类。因为试管在贮存时可能积聚了少量灰尘，在室温冷却时管口形成负压，当塞积聚了少量灰尘，在室温冷却时管口形成负压，当塞子拔开时，空气进入而带入灰尘。子拔开时，空气进入而带入灰尘。 6塞子应朝下放，以免灰尘落入。塞子应朝下放，以免灰尘落入。 7培养

31、容器应拿成斜角，既减少灰尘和偶尔存在的培养容器应拿成斜角，既减少灰尘和偶尔存在的细菌的落入，又便于操作。细菌的落入，又便于操作。 8身体不宜进入超净台，以防头皮屑等落入培养基。身体不宜进入超净台，以防头皮屑等落入培养基。 9操作应在酒精灯火焰旁边。操作应在酒精灯火焰旁边。 10不要与微生物工作者或病理工作者共用组织培养工不要与微生物工作者或病理工作者共用组织培养工作区。一旦发现污染，立即将污染的培养物拿出培养室进作区。一旦发现污染，立即将污染的培养物拿出培养室进行处理。行处理。 细菌污染细菌污染：接种：接种23天后即可发现，菌斑呈粘天后即可发现，菌斑呈粘 液状；液状；真菌污染真菌污染：接种：接种510天后，才能发现不同颜色天后，才能发现不同颜色的霉菌。的霉菌。 培养基污染有几个可能的来源培养基污染有几个可能的来源： 1培养容器培养容器 2培养根本身培养根本身 3外植体外植体 4接种室的环境接种室的环境 5接种或继代时用以操作植物材料的器械接种或继代时用以操作植物材料的器械 6培养室的环境培养室的环境 l1.温度：一般设定温度：一般设定25左右，左右，l (15-35之间之间l2.光照：光照：3000-400