病毒学- 病毒的检验

1、常用的病毒检验方法包括：常用的病毒检验方法包括：（二）病毒的分离与培养（二）病毒的分离与培养1、病毒的分离、病毒的分离（1）动物接种法）动物接种法常见病毒常用实验动物及接种途径实验动物采血（2）鸡胚培养法）鸡胚培养法（3）细胞培养）细胞培养 (cell culture)法或法或组织培养法组织培养法 (tissue culture) 常见人类病毒的敏感细胞（4）分子生物学技术）分子生物学技术（三）病毒的鉴定（三）病毒的鉴定1、初步鉴定、初步鉴定(2)病毒的生物学特性细胞病变效应哪三种现象？哪三种现象？血吸附和血凝作用例子例子干扰现象（3）病毒的理化特性测定代谢抑制法鉴定病毒核酸类型脂溶性试验病毒

2、粒的结构模式图病毒粒的结构模式图壳粒壳粒衣壳衣壳核心（核样物）核心（核样物）核衣壳核衣壳包膜包膜包膜病毒包膜病毒包膜子粒包膜子粒处理方法处理方法:耐酸性试验处理方法处理方法:2、接种动物的观察、接种动物的观察观察指标:3、最终鉴定、最终鉴定n （1）病毒的）病毒的血清学鉴定血清学鉴定n （2）病毒的分子生物学）病毒的分子生物学鉴定鉴定n （3）电子显微镜技术）电子显微镜技术（1）病毒的血清学鉴定中和试验结果判定的科学依据：结果判定的科学依据：操作步骤：操作步骤：1010- -血凝抑制试验用简式表示:病毒病毒+红细胞红细胞 凝集凝集病毒病毒+抗体抗体+红细胞红细胞 凝集被抑制凝集被抑制免疫荧光试

3、验免疫荧光试验分免疫荧光试验分直接法直接法和和间接法间接法两种两种:操作步骤：操作步骤：（2）病毒的分子生物学鉴定（3）电子显微镜技术+：血球完全凝集，成厚膜状铺于管底。：血球完全凝集，成厚膜状铺于管底。+： 血球呈薄层贴附于管底，边缘不整齐。血球呈薄层贴附于管底，边缘不整齐。+： 中央呈小圆盘状，边缘凝集呈颗粒状。中央呈小圆盘状，边缘凝集呈颗粒状。+： 中央呈弥散圆盘状，边缘有少量凝集颗粒。中央呈弥散圆盘状，边缘有少量凝集颗粒。： 无凝集，血球自然沉于管底呈一小圆盘状。无凝集，血球自然沉于管底呈一小圆盘状。 （一）病毒抗原的直接检出1.免疫荧光法免疫荧光法(immunofluorescent

4、 assay，IF)根据抗原抗体特异性结合的反应特点根据抗原抗体特异性结合的反应特点,将将荧光荧光色素色素与待检病毒的特异性与待检病毒的特异性抗体抗体以化学的方法以化学的方法结合起来。结合起来。将荧光标记了的抗体在特定的条件下浸染标将荧光标记了的抗体在特定的条件下浸染标本本,使抗体与标本中的抗原使抗体与标本中的抗原(病毒病毒)发生结合反发生结合反应应,细胞内的病毒或抗原可被荧光素标记的特细胞内的病毒或抗原可被荧光素标记的特异性抗体结合异性抗体结合,在在荧光显微镜荧光显微镜下可见下可见斑点状黄斑点状黄绿色荧光绿色荧光,根据所用抗体的特异性判断为何种根据所用抗体的特异性判断为何种病毒感染。病毒感染

5、。免疫荧光免疫荧光(IF)法用于鉴定病毒具有快速、特异法用于鉴定病毒具有快速、特异的优点。的优点。此方法主要包括直接免疫荧光法、间接免疫此方法主要包括直接免疫荧光法、间接免疫荧光法以及在间接法的基础上发展而成的补荧光法以及在间接法的基础上发展而成的补体结合法。体结合法。2.酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验 (Enzyme-Linked Immunosorbent Assays,ELISA)ELISA使用病毒特异性抗体检测标本中的病使用病毒特异性抗体检测标本中的病毒抗原。毒抗原。ELISA法用于鉴定病毒具有简便、快速、特法用于鉴定病毒具有简便、快速、特异的优点。异的优点。3.免疫沉淀免疫沉淀(i

6、mmunoprecipitation)基于病毒特异性抗体与感染细胞或组织的可基于病毒特异性抗体与感染细胞或组织的可溶性提取物中的溶性提取物中的病毒蛋白病毒蛋白的相互作用。的相互作用。病毒蛋白事先经病毒蛋白事先经放射性同位素标记放射性同位素标记的氨基酸的氨基酸进行代谢标记进行代谢标记,将病毒与抗体作用将病毒与抗体作用,分离抗体分离抗体-病毒蛋白复合物病毒蛋白复合物,然后将病毒蛋白从复合物中然后将病毒蛋白从复合物中解离解离,再经聚丙烯酰胺凝胶电泳再经聚丙烯酰胺凝胶电泳,最后经最后经放射自放射自显影显影,可观察到病毒蛋白带条。可观察到病毒蛋白带条。该技术可用于分析病毒蛋白的许多特性该技术可用于分析病

7、毒蛋白的许多特性,如存如存在于病毒粒子和感染细胞内的病毒蛋白种类在于病毒粒子和感染细胞内的病毒蛋白种类,蛋白的分子质量蛋白的分子质量,蛋白的合成动态蛋白的合成动态,亚细胞定位亚细胞定位,病毒蛋白与其他病毒或细胞蛋白的结合情况。病毒蛋白与其他病毒或细胞蛋白的结合情况。4.免疫转印免疫转印(immunoblotting) 是基于抗体与固定在滤膜上的病毒蛋白质的相互作用。是基于抗体与固定在滤膜上的病毒蛋白质的相互作用。 病毒蛋白经聚丙烯配胺凝胶电泳病毒蛋白经聚丙烯配胺凝胶电泳,然后转印到对蛋白质然后转印到对蛋白质有很强亲和性的滤膜有很强亲和性的滤膜(如硝酸纤维素滤膜如硝酸纤维素滤膜)上，经免疫染上，

8、经免疫染色色(如免疫酶染色如免疫酶染色)检测结合在膜上的蛋白质。检测结合在膜上的蛋白质。 由于结合到膜上的蛋白质是变性的由于结合到膜上的蛋白质是变性的,因此识别非线性抗因此识别非线性抗原表位的抗体不适合用于检测。原表位的抗体不适合用于检测。 该方法可用于病毒蛋白的分析该方法可用于病毒蛋白的分析,其主要优点在于不需要其主要优点在于不需要进行病毒蛋白的标记进行病毒蛋白的标记,因此适用于组织、器官或培养细因此适用于组织、器官或培养细胞中病毒蛋白的检测。胞中病毒蛋白的检测。（二）病毒抗体的直接检出应用病毒特异性抗原检测病毒感染患者血清应用病毒特异性抗原检测病毒感染患者血清中的抗体也是诊断病毒感染的的重

9、要手段，中的抗体也是诊断病毒感染的的重要手段，可有可有IgG和和IgM两种。两种。IgM抗体出现于病毒感染早期抗体出现于病毒感染早期,可用于快速诊可用于快速诊断病毒感染。断病毒感染。IgG抗体出现较迟抗体出现较迟,在血清中存在的时间也较在血清中存在的时间也较长长,因此因此IgG类抗体用于临床诊断必须具有早类抗体用于临床诊断必须具有早期和恢复期双份血清期和恢复期双份血清,或有随访的血清或有随访的血清,两次标两次标本中抗体的效价需有本中抗体的效价需有4倍或以上的升高才有诊倍或以上的升高才有诊断价值。断价值。ELISA或免疫印迹法可检测血清中针对某种或免疫印迹法可检测血清中针对某种病毒抗原亚单位的抗

10、体病毒抗原亚单位的抗体,例如例如,该法已用于该法已用于HIV患者抗体的确认实验。其他常用的方法还包患者抗体的确认实验。其他常用的方法还包括括:1.中和试验中和试验2.补体结合试验补体结合试验3.血凝抑制试验血凝抑制试验1.中和试验中和试验(neutralizing test,NT test)是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中是病毒在活体内或细胞培养中被特异性抗体中和而失去感染性的一种试验。和而失去感染性的一种试验。针对病毒的一些蛋白质抗原或抗原表位的抗体针对病毒的一些蛋白质抗原或抗原表位的抗体与病毒结合后可以中和病毒的感染性。与病毒结合后可以中和病毒的感染性。中和抗体中和抗体(netra

11、lizing antibodies,NTAb)是作用是作用于病毒表面抗原于病毒表面抗原 (衣壳或包膜衣壳或包膜) 的抗体，同种不的抗体，同种不同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体同型病毒间一般无交叉，特异性高，而且抗体在体内维持时间长。因此流行病学检查常用此在体内维持时间长。因此流行病学检查常用此法。法。病毒中和试验可以在细胞培养、鸡胚或动物病毒中和试验可以在细胞培养、鸡胚或动物上进行上进行,一般将抗体稀释一般将抗体稀释,与一定量的病毒混合与一定量的病毒混合,然后检测其在细胞培养、鸡胚或动物上的残然后检测其在细胞培养、鸡胚或动物上的残余感染性。终点是以抑制细胞病变余感染性。终点是以抑制细胞

12、病变(细胞培养细胞培养或病毒复制或病毒复制鸡胚或动物鸡胚或动物的抗体最高稀释的抗体最高稀释度来表示。度来表示。中和试验具有很强的特异性中和试验具有很强的特异性,是检测病毒和新是检测病毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方法分离病毒毒株的鉴定最经典的方法,也可用于也可用于检测病毒感染动物血清中的抗体。检测病毒感染动物血清中的抗体。可用来检查患者血清中抗体的消长情况可用来检查患者血清中抗体的消长情况,也可也可用来鉴定未知病毒或研究病毒的抗原结构。用来鉴定未知病毒或研究病毒的抗原结构。中和试验的结果呈现中和试验的结果呈现“阳性阳性”不一定表示正不一定表示正在感染中，也可能因以前有过隐性感染所致。在感染中

13、，也可能因以前有过隐性感染所致。因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，因此，中和试验适用于人群免疫情况的调查，在临床诊断上较少使用。在临床诊断上较少使用。2.补体结合试验补体结合试验 (complement fixation test,CF test) 用于检测人或动物血清中的病毒抗体。用于检测人或动物血清中的病毒抗体。 用已知病毒内部用已知病毒内部可溶性抗原可溶性抗原来检测病人或动物血清中相来检测病人或动物血清中相应抗体。一般是血清中应抗体。一般是血清中IgM类抗体。类抗体。 原理：病毒抗原与抗体的相互反应可以引起补体结合原理：病毒抗原与抗体的相互反应可以引起补体结合,最最终不会导致细胞膜

14、溶解。终不会导致细胞膜溶解。 在补体结合试验中在补体结合试验中,利用利用红细胞红细胞作为作为靶靶细胞细胞，溶血系统溶血系统作作为指示系统为指示系统,因红因红细胞细胞膜的溶解易于观察到。膜的溶解易于观察到。 游离的补体可以溶解红细胞膜。游离的补体可以溶解红细胞膜。如果存在抗原抗体结合如果存在抗原抗体结合反应反应, 将将与与补体发生结合补体发生结合,失去溶解红细胞作用。失去溶解红细胞作用。利用加利用加入入“结合了结合了溶血素溶血素 (即即红红细胞细胞抗体抗体) ”的绵羊红细胞可以的绵羊红细胞可以检测检测到到是否存在病毒抗原是否存在病毒抗原。如果补体被病毒抗原抗体复合物结合如果补体被病毒抗原抗体复合

15、物结合,则红细则红细胞仍然是完整的胞仍然是完整的;相反相反,如果补体未如果补体未被被结合结合,红红细胞细胞将在将在游离游离的补体的作用下被溶解。的补体的作用下被溶解。因补体结合试验因补体结合试验中中常使用常使用粗制粗制的病毒抗原的病毒抗原,因因此该此该方法方法的特异性不是很高的特异性不是很高.“补体结合抗原补体结合抗原”即即CF抗原抗原是病毒的内部抗是病毒的内部抗原，同种异型间常有交叉反应，故特异性较原，同种异型间常有交叉反应，故特异性较中和试验低。中和试验低。但但“补体结合抗体补体结合抗体”即即 CF抗体抗体产生较早，消产生较早，消失较快，失较快，常用于病毒早期感染的诊断常用于病毒早期感染的

16、诊断，故，故CF阳性可作为近期感染的指标。阳性可作为近期感染的指标。3.血凝抑制试验血凝抑制试验(hemagglutinatia inhibition test, HI test) 许多病毒表面具有许多病毒表面具有血凝素血凝素(HA) ，能凝集鸡、，能凝集鸡、豚鼠、人等的红细胞，称血凝现象。豚鼠、人等的红细胞，称血凝现象。这种现象能被相应抗体（即这种现象能被相应抗体（即抗血凝素抗体抗血凝素抗体）所抑制，所抑制，称称HI试验。即具有试验。即具有HA病毒的抗体，可阻断病毒病毒的抗体，可阻断病毒与红细胞结合。与红细胞结合。原理是原理是血凝素血凝素(HA)对应的抗体，即对应的抗体，即抗血凝素抗血凝素抗

17、体抗体与病毒结合后，抑制了病毒表面的与病毒结合后，抑制了病毒表面的HA与与红细胞的结合。红细胞的结合。本试验简易、经济，特异性高，常用于粘病本试验简易、经济，特异性高，常用于粘病毒、流感病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊毒、流感病毒及乙型脑炎病毒感染的辅助诊断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚断及流行病学调查，也可鉴定病毒的型与亚型。型。指利用一些分子生物学技术指利用一些分子生物学技术,如基因组电泳分如基因组电泳分析、核酸杂交、聚合酶链式反应、酶切图谱析、核酸杂交、聚合酶链式反应、酶切图谱分析、寡核苷酸指纹图、分析、寡核苷酸指纹图、DNA芯片技术等芯片技术等,通通过检测病毒的核酸而确证样本中病毒

18、的存在。过检测病毒的核酸而确证样本中病毒的存在。目前目前PCR等技术已广泛用于病毒的检测和病等技术已广泛用于病毒的检测和病毒病的诊断。毒病的诊断。由于大多数病毒的基因均已克隆并已知道其由于大多数病毒的基因均已克隆并已知道其核酸序列核酸序列,因此可以利用病毒的基因作为探针因此可以利用病毒的基因作为探针(probes)进行杂交以检测标本中有无相应的病进行杂交以检测标本中有无相应的病毒核酸毒核酸,或针对病毒的序列设计相应的引物或针对病毒的序列设计相应的引物,作作多聚酶链反应多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction Assay ,PCR)。近年随着技术的进步近年随着技术的进步,

19、已研制出多种高通量的已研制出多种高通量的检测病毒核酸的技术。检测病毒核酸的技术。1、核酸杂交技术、核酸杂交技术核酸杂交是病毒诊断领域中发展较快的一项新核酸杂交是病毒诊断领域中发展较快的一项新技术技术,主要分为主要分为Southern杂交和杂交和Northern杂交两杂交两大类。大类。其基本原理是双链其基本原理是双链DNA(或或RNA)在加热或碱处在加热或碱处理下理下,变性解开成单链变性解开成单链,然后用一条已知的特异然后用一条已知的特异性的核苷酸序列的单链性的核苷酸序列的单链DNA,以同位素或非放以同位素或非放射性核素标记后制成探针去与固态支持物上的射性核素标记后制成探针去与固态支持物上的变性

20、单链变性单链DNA进行杂交进行杂交,再用放射自显影技术再用放射自显影技术或用生物素或用生物素-亲和素系统进行检查亲和素系统进行检查,以确定待测以确定待测核酸中有无与探针核酸中有无与探针DNA同源的同源的DNA存在。存在。由于病毒基因很多已成功地被克隆及进行了核苷由于病毒基因很多已成功地被克隆及进行了核苷酸序列测定酸序列测定,因此可以利用特定的病毒基因作为因此可以利用特定的病毒基因作为探针探针,用核酸杂交的方法检测标本中有无相应的用核酸杂交的方法检测标本中有无相应的病毒核酸。病毒核酸。核酸杂交技术核酸杂交技术(nucleio acid hybridization technique)方法包括有方

21、法包括有斑点核酸杂交斑点核酸杂交、细胞内原细胞内原位杂交位杂交、DNA印迹杂交印迹杂交和和RNA印迹杂交印迹杂交等。等。2、PCR技术技术 近年来发展了一系列以近年来发展了一系列以PCR为基础的体外核酸扩增为基础的体外核酸扩增技术技术,用于检测不易感或不能培养的病毒。用于检测不易感或不能培养的病毒。 此方法特异性强、敏感性高、简便快速此方法特异性强、敏感性高、简便快速,已成功用于已成功用于HCV、H 、CMV、HPV等多种病毒性感染的临床等多种病毒性感染的临床检测中。检测中。 由于由于PCR方法十分敏感方法十分敏感,可检出可检出fg水平的病毒核酸水平的病毒核酸,故故操作时应注意操作时应注意PC

22、R产物的气溶胶污染以防出现假阳产物的气溶胶污染以防出现假阳性性:此外此外,病毒核酸检测阳性并不等于标本中存在有感病毒核酸检测阳性并不等于标本中存在有感染性的活病毒。染性的活病毒。 随着随着PCR技术的广泛应用技术的广泛应用,派生出了一系列的新技术派生出了一系列的新技术和方法和方法,根据不同的检测目的可以选用相适应的技术根据不同的检测目的可以选用相适应的技术方法。方法。 利用实时定量利用实时定量PCR法法(real time quantitatice PCR)检检测病毒载量测病毒载量; 利用原位利用原位(in situ) PCR法定位检测细胞或组织中的病法定位检测细胞或组织中的病毒感染毒感染;

23、利用巢式利用巢式(nested) PCR可以提高可以提高PCR的敏感性和特异的敏感性和特异性等等。性等等。3、高通量的病毒核酸检测技术、高通量的病毒核酸检测技术突发传染病病原体的快速鉴定突发传染病病原体的快速鉴定DNA芯片技术芯片技术目前基因芯片主要有两种：目前基因芯片主要有两种：一种是一种是DNA合成芯片合成芯片,在芯片的特定部位原位在芯片的特定部位原位合成寡核苷酸合成寡核苷酸;另一种是另一种是DNA微集芯片微集芯片,将克隆基因或将克隆基因或PCR扩扩增的基因片段有序地显微打印到芯片上。增的基因片段有序地显微打印到芯片上。DNA芯片技术的优点芯片技术的优点一次性可以完成大量样品一次性可以完成

24、大量样品DNA序列的检测和序列的检测和分析分析,最新研发的高密度病原体基因芯片能检最新研发的高密度病原体基因芯片能检测测1700多种人类病毒。多种人类病毒。DNA芯片技术解决了传统核酸杂交技术的许芯片技术解决了传统核酸杂交技术的许多不足多不足,在病毒诊断和流行病学调查方面有着在病毒诊断和流行病学调查方面有着广阔的应用前景。广阔的应用前景。快速诊断主要是指从含有病毒标本及感染机快速诊断主要是指从含有病毒标本及感染机体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、体的血清中检测病毒颗粒、蛋白抗原、IgM抗体和核酸等，往往在数小时内即可得出结抗体和核酸等，往往在数小时内即可得出结果。果。 某些受病毒感染的细胞内某

25、些受病毒感染的细胞内,可形成与正常细胞可形成与正常细胞结构和着色不同的斑块结构和着色不同的斑块,称为包涵体。称为包涵体。有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞的一有些病毒在宿主细胞内增殖后，在细胞的一定部位定部位(胞核、胞浆或两者兼有胞核、胞浆或两者兼有) 出现一个或出现一个或数个、圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的结数个、圆形或椭圆形、嗜酸性或嗜碱性的结构，即构，即包涵体包涵体。包涵体对病毒感染的诊断有一定价值。包涵体对病毒感染的诊断有一定价值。光学显微镜是病毒诊断的辅助方法之一光学显微镜是病毒诊断的辅助方法之一,借助借助染色技术可以直接观察病毒产生的核内或胞染色技术可以直接观察病毒产生的核内或胞浆

26、内包涵体和病毒感染细胞的具体形态。浆内包涵体和病毒感染细胞的具体形态。应用光学显微镜检查包涵体应用光学显微镜检查包涵体,根据不同病毒包根据不同病毒包涵体的形态、染色、存在部位的差异涵体的形态、染色、存在部位的差异,可辅助可辅助诊断某些病毒性疾病。诊断某些病毒性疾病。例如例如从病犬大脑海马会发现胞浆中嗜酸性包涵体从病犬大脑海马会发现胞浆中嗜酸性包涵体(内基小体内基小体),即可确诊为狂犬病即可确诊为狂犬病;在麻疹病毒感染细胞的核内及胞浆内可找到在麻疹病毒感染细胞的核内及胞浆内可找到一个或多个鲜红色的圆形、椭圆形或不规则一个或多个鲜红色的圆形、椭圆形或不规则形态的包涵体形态的包涵体,被称为麻疹病毒包

27、涵体。被称为麻疹病毒包涵体。(electron microscopy, EM)电子显微镜技术可直接观察病毒的大小、形电子显微镜技术可直接观察病毒的大小、形态、结构以及病毒在细胞内增殖的动态过程。态、结构以及病毒在细胞内增殖的动态过程。制作电镜标本的方法主要有超薄切片制作电镜标本的方法主要有超薄切片(厚度为厚度为100nm左右左右)、磷钨酸负染法。、磷钨酸负染法。超薄切片法也称正染法超薄切片法也称正染法,将细胞固定、脱水、将细胞固定、脱水、包埋、切片、染色包埋、切片、染色,然后观察病毒颗粒然后观察病毒颗粒,可显示可显示病毒形态及形态发生过程。病毒形态及形态发生过程。负染色法敏感性低负染色法敏感性

28、低,通过富集病毒的办法使样通过富集病毒的办法使样品含有高浓度病毒颗粒品含有高浓度病毒颗粒(106107/ml),经磷钨酸经磷钨酸负染后直接用于电镜检查负染后直接用于电镜检查,可显示病毒的结构。可显示病毒的结构。这种方法可有助于诊断难以在细胞培养中增这种方法可有助于诊断难以在细胞培养中增殖的病毒殖的病毒,例如从病人粪便标本中观察是否有例如从病人粪便标本中观察是否有轮状病毒的感染。轮状病毒的感染。3、免疫电镜技术术(immune electron microscopy, IEM)是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的是将抗原抗体反应的特异性与电子显微镜的高分辨力相结合高分辨力相结合,在亚细胞和超微

29、结构水平上在亚细胞和超微结构水平上对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、对抗原物质进行定位分析的一种高度精确、灵敏的方法。灵敏的方法。特异性抗体用电子致密物质特异性抗体用电子致密物质,如铁蛋白、胶体如铁蛋白、胶体金等标记后金等标记后,使之与抗原结合使之与抗原结合,在电镜下观察到在电镜下观察到标记物所在位置标记物所在位置,即为抗原抗体反应的部位。即为抗原抗体反应的部位。在难以分辨病毒颗粒与其外周伴随的结构的在难以分辨病毒颗粒与其外周伴随的结构的情况下情况下,若将病毒样品制成悬液若将病毒样品制成悬液,加入特异性抗加入特异性抗体体,可使样品中的病毒颗粒凝集成团可使样品中的病毒颗粒凝集成团,再用电镜再

30、用电镜观察可提高病毒的检出率。观察可提高病毒的检出率。利用这种方法从痘病毒、疱疹病毒感染的疱利用这种方法从痘病毒、疱疹病毒感染的疱疹液中疹液中,以及疑为轮状病毒感染的粪便或以及疑为轮状病毒感染的粪便或HBV感染者血清中均可快速检出典型的病毒颗粒感染者血清中均可快速检出典型的病毒颗粒,能帮助早期诊断。能帮助早期诊断。 用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，用荧光素、放射性同位素、过氧化物酶等标记抗体，采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋采用免疫学和分子生物学技术，检测标本中的病毒蛋白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。白抗原，具有敏感、特异、快速等优点。1.免疫荧光技术免疫荧光技术 (immuno-fluorescence, IF) 2.固相放射免疫测定固相放射免疫测定 (solid-phase radioimmunoassay, SPRIA) 3.酶免疫技术酶免疫技术 (enzyme immunoassay