生化实验05凯氏定氮法2

1、会计学1生化实验生化实验05凯氏定氮法凯氏定氮法22345材料：材料：面粉面粉7. 混合指示剂（混合指示剂（pH变化范围）变化范围）6全自动凯氏定氮仪全自动凯氏定氮仪7三1. 样品消化（已完成）样品消化（已完成） 准确称取准确称取0.1-0.2g样品（依其含氮量而定）至消化管中，样品（依其含氮量而定）至消化管中，加入加入5mL浓硫酸和浓硫酸和0.3-0.5g混合催化剂，浸泡数小时后在管混合催化剂，浸泡数小时后在管口盖一小漏斗，放在消煮炉上加热消化。开始时温度可稍低口盖一小漏斗，放在消煮炉上加热消化。开始时温度可稍低，加热至管口不再产生泡沫时可逐渐升温，使消化管内液体，加热至管口不再产生泡沫时可

2、逐渐升温，使消化管内液体达到微沸，直到消化液褐色消失并全部变为清澈透明为止。达到微沸，直到消化液褐色消失并全部变为清澈透明为止。 在消化过程中，可分数次加入少许在消化过程中，可分数次加入少许H2O2以加速有机物氧以加速有机物氧化。如发现在消化管上部有黑色颗粒，应小心转动消化管，化。如发现在消化管上部有黑色颗粒，应小心转动消化管，用消化液将其冲洗下来。整个过程一般需用消化液将其冲洗下来。整个过程一般需3-4小时，均应在小时，均应在通风橱中进行。通风橱中进行。82. 定容：定容： 消化液冷却后，沿管壁仔细加入消化液冷却后，沿管壁仔细加入10mL左右无氨蒸馏水以左右无氨蒸馏水以冲洗管壁冲洗管壁冷却后

3、转入冷却后转入100mL容量瓶，再用少量无氨蒸馏水容量瓶，再用少量无氨蒸馏水冲洗消化管数次，洗涤液一并转入容量瓶冲洗消化管数次，洗涤液一并转入容量瓶冷却后用无氨蒸冷却后用无氨蒸馏水定容至刻度，混匀后备用。馏水定容至刻度，混匀后备用。3. 蒸馏蒸馏（1）仪器洗涤：）仪器洗涤：在蒸汽发生器在蒸汽发生器中加入中加入2/3体积蒸馏水体积蒸馏水关闭汽关闭汽水分离器阀和进样漏斗、并使管水分离器阀和进样漏斗、并使管道联通道联通打开冷凝管打开冷凝管打开电炉打开电炉加热蒸汽发生器，用热蒸汽通入加热蒸汽发生器，用热蒸汽通入仪器各部分清洗仪器各部分清洗15min。蒸汽蒸汽发生器发生器安全管安全管反应管反应管隔热套隔

4、热套冷凝管冷凝管吸收瓶吸收瓶导管导管汽水分离器汽水分离器进样漏斗进样漏斗密封阀密封阀93. 蒸馏蒸馏（1）仪器洗涤）仪器洗涤 冲洗完毕，从加样漏斗向蒸馏管加入无氨蒸馏水，清洗冲洗完毕，从加样漏斗向蒸馏管加入无氨蒸馏水，清洗蒸馏反应管蒸馏反应管打开汽水分离器阀、夹紧蒸汽发生器与蒸馏打开汽水分离器阀、夹紧蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管反应管之间的橡皮管，由于冷却减压使得反应瓶中废液被，由于冷却减压使得反应瓶中废液被虹吸进入隔热套中虹吸进入隔热套中打开隔热套下端的活塞阀排出废液。打开隔热套下端的活塞阀排出废液。如此清洗如此清洗2-3次。次。 可将冷凝管下口浸入硼酸可将冷凝管下口浸入硼酸-指示剂混

5、合液中检测清洗效果，指示剂混合液中检测清洗效果，当硼酸当硼酸-指示剂混合液不变色时，表明蒸馏装置清洗干净指示剂混合液不变色时，表明蒸馏装置清洗干净 。103. 蒸馏蒸馏 （2）样品蒸馏）样品蒸馏 在三角瓶中装入在三角瓶中装入20mL硼酸硼酸-指示剂混合液（此时应为紫指示剂混合液（此时应为紫红色，如变为蓝色，应倒出重装或清洗三角瓶）承接在冷红色，如变为蓝色，应倒出重装或清洗三角瓶）承接在冷凝管下端出口，将出口浸入在溶液中凝管下端出口，将出口浸入在溶液中打开汽水分离阀隔打开汽水分离阀隔活塞活塞,打开蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管夹打开蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管夹准确准确吸取吸取10mL

6、样品消化液通过加样漏斗加入蒸馏瓶中样品消化液通过加样漏斗加入蒸馏瓶中通过漏通过漏斗加入斗加入10mL NaOH溶液溶液用少量无氨蒸馏水重复冲洗漏斗用少量无氨蒸馏水重复冲洗漏斗3次次塞紧漏斗塞，再在漏斗中加入少量蒸馏水密封漏斗塞紧漏斗塞，再在漏斗中加入少量蒸馏水密封漏斗关闭汽水分离阀，关闭汽水分离阀，开始蒸馏开始蒸馏观察硼酸观察硼酸-指示剂混合液颜色指示剂混合液颜色变化，从颜色变绿起再蒸馏变化，从颜色变绿起再蒸馏3-5min后，将三角瓶液面移离后，将三角瓶液面移离冷凝管下口约冷凝管下口约1cm 继续蒸馏继续蒸馏1min左右，结束蒸馏。左右，结束蒸馏。113. 蒸馏蒸馏 （3）空白蒸馏）空白蒸馏

7、用未加植物样品的消化液（其余试剂都加入并按同样方用未加植物样品的消化液（其余试剂都加入并按同样方法进行消化）为空白液，按样品消化液的蒸馏方法进行蒸法进行消化）为空白液，按样品消化液的蒸馏方法进行蒸馏。馏。4. 样品及空白滴定样品及空白滴定 样品和空白蒸馏完毕后，分别用样品和空白蒸馏完毕后，分别用0.01 mol/L盐酸标准溶盐酸标准溶液滴定，直到硼酸液滴定，直到硼酸-指示剂混合液变回淡紫红色即为滴定终指示剂混合液变回淡紫红色即为滴定终点，记录滴定样品和空白蒸馏液的盐酸用量。点，记录滴定样品和空白蒸馏液的盐酸用量。 （滴定空白蒸馏液的盐酸用量一般为滴定空白蒸馏液的盐酸用量一般为0.20mL）12

8、100100014)(STVWVBAC ） 13每次蒸馏前均需清洗蒸馏反应瓶；在蒸馏过程中，不能同时关闭汽水分离阀和蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管夹；141516（蓝（蓝色）色）17三1. 1. 样品提取样品提取 准确称取准确称取3g左右样品放入研钵中，加入左右样品放入研钵中，加入2%草酸草酸溶液约溶液约5mL研磨研磨匀浆液转入匀浆液转入50 mL容量瓶，用容量瓶，用草酸草酸洗涤研钵洗涤研钵3次，洗涤液一并转入容量瓶中次，洗涤液一并转入容量瓶中用用草酸草酸定容至刻度定容至刻度过滤过滤，收集滤液，备用。，收集滤液，备用。2.2.样品滴定样品滴定 取滤液取滤液10 mL至蒸发皿中，用至蒸发皿中

9、，用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色，并在至粉红色，并在30s内不褪色为止。记录染料用量。内不褪色为止。记录染料用量。18三4.空白滴定空白滴定 取取2%草酸草酸10 mL至蒸发皿中，用至蒸发皿中，用2,6-二氯酚靛酚溶液滴二氯酚靛酚溶液滴定至粉红色，并在定至粉红色，并在30s内不褪色为滴定终点，记录染料用内不褪色为滴定终点，记录染料用量。量。3. 染料标定染料标定 取取10 mL标准标准Vc溶液至蒸发皿中，用溶液至蒸发皿中，用滴定至粉红色，并在滴定至粉红色，并在30s内不褪色为滴定终点。计算内不褪色为滴定终点。计算1mL染料相当于染料相当于Vc的的mg数，即数，即滴定度（滴定度（A）。19100)(01STVWVAVV ）浓度标准标0(10VcVV20213. 蒸馏蒸馏（1）仪器洗涤）仪器洗涤 冲洗完毕，从加样漏斗向蒸馏管加入无氨蒸馏水，清洗冲洗完毕，从加样漏斗向蒸馏管加入无氨蒸馏水，清洗蒸馏反应管蒸馏反应管打开汽水分离器阀、夹紧蒸汽发生器与蒸馏打开汽水分离器阀、夹紧蒸汽发生器与蒸馏反应管之间的橡皮管反应管之间的橡皮管，由于冷却减压使得反应瓶中废液被，由于冷却减压使得反应瓶中废液被虹吸进入隔热套中虹吸进入隔