血液标本采集

1、会计学1血液标本采集血液标本采集2 为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据为分析病情、观察疗效、判断预后提供依据3为预防疾病提供资料为预防疾病提供资料4为配合临床科研提供可靠数据为配合临床科研提供可靠数据 血量量0.1ml的检验项目：的检验项目：RBC计数、计数、WBC计数、计数、 BPL计数、计数、Hb测定等测定等 皮皮 肤肤 采采 血血 法法Skin puncture for blood collection采血部位WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指尖内侧推荐采取外周血以左手无名指或中指指尖内侧1、手指采血：、手指采血： 优点：优点：方便方便获较多血量获较多血量检查结果比较恒定检查结

2、果比较恒定 缺点：缺点：与静脉血仍在某些差异。与静脉血仍在某些差异。2、耳垂采血：、耳垂采血： 优点：优点：痛感轻痛感轻 方便方便 适用于反复采集适用于反复采集 缺点：缺点：血循环差血循环差受气温影响大检查结果不恒定受气温影响大检查结果不恒定 RBC、WBC、Hb、Hct结果均比静脉血高，结果均比静脉血高，特别是冬季。特别是冬季。3、其他部位：、其他部位： 拇指、拇趾或足跟采血拇指、拇趾或足跟采血 半岁以下婴幼儿半岁以下婴幼儿 皮肤完整处皮肤完整处 严重烧伤者严重烧伤者 采血针采血针 三棱针或专用的三棱针或专用的“采血针采血针”为好，使用前者应高压灭菌，为好，使用前者应高压灭菌， 一人一针一人

3、一针。n一、皮肤采血器材（vacuum blood collector ）2008-10-21采血器材采血器材注意事项1、采血部位皮肤完整。、采血部位皮肤完整。2、无菌技术操作：防采血部位感染，、无菌技术操作：防采血部位感染， 一人一针防肝炎、艾滋病。一人一针防肝炎、艾滋病。3、采血针刺入皮肤应深浅适中。、采血针刺入皮肤应深浅适中。4、多项检查时，采血次序为：、多项检查时，采血次序为：BPL计数（不擦第一滴血）计数（不擦第一滴血） RBC计数、计数、HbWBC计数与分类。计数与分类。5、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入、取血用于自动化血细胞分析仪，要防止棉球纤维混入 堵塞仪器。堵

4、塞仪器。 静静 脉脉 采采 血血 法法 (venipuncture for blood collection)凡需血量较多的检查凡需血量较多的检查0.5ml如：如：ESR、Hct、凝血因子的测定等。、凝血因子的测定等。 部位部位 浅表静脉均可浅表静脉均可 常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝常用肘部静脉，不明显时可用手背、踝 部，部， 幼儿可用颈外静脉。幼儿可用颈外静脉。P4 注意事项注意事项 1、采血前应向病人作适当解释：、采血前应向病人作适当解释：2、检查注射器：、检查注射器：3、止血带压迫时间不能过长：、止血带压迫时间不能过长：4 4、抽血时，只能向外抽，不能向内推：抽血时，只能向外抽，不

5、能向内推：皮肤采血皮肤采血静脉采血静脉采血缺点缺点限制了重复实验和追限制了重复实验和追加实验，标本量少，加实验，标本量少，局部炎症可得假结果局部炎症可得假结果，组织液可混入，组织液可混入不同抗凝剂的使用，不同抗凝剂的使用，改变血液性质，影响改变血液性质，影响有形成分的形态有形成分的形态优点优点价廉、快速、操作简价廉、快速、操作简便，标本可直接测定便，标本可直接测定标本代表性大，无组标本代表性大，无组织液影响，适于临床织液影响，适于临床研究，可重复实验和研究，可重复实验和追加其他实验追加其他实验2008-10-212008-10-212008-10-21医学全在线网站医学全在线网站 2008-1

6、0-21二、患者状态要求（自学）二、患者状态要求（自学）1.采血时间采血时间2.采血部位采血部位3. 采血体位采血体位4.压脉带使用压脉带使用5.输液输液6.溶血溶血血标本溶血：血标本溶血： 注射器和容器：干燥、清洁。注射器和容器：干燥、清洁。抽血速度不能太快。抽血速度不能太快。抽血时避免产生大量泡沬。抽血时避免产生大量泡沬。抽血后应先拔针头，再注入。抽血后应先拔针头，再注入。抗凝不能用力振荡。抗凝不能用力振荡。离心速度不能过高。离心速度不能过高。血液标本运输、血液标本运输、保存与保存与处理处理 a. 抗凝原理：螯合钙离抗凝原理：螯合钙离b. 使用方法使用方法 配成配成 109 mmol/L的

7、浓度和血液的浓度和血液1：9 106 mmol/L的浓度和血液的浓度和血液1：4化学名：3-羟基-3-羧基戊二酸（三钠盐）c. 适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）适用范围：止血学检验、血沉、输血保养液（毒性小）d. 不适用于：不适用于：血细胞计数血细胞计数 2. 草酸钠（乙二酸的钠盐）草酸钠（乙二酸的钠盐）a. 抗凝原理：草酸钙沉淀抗凝原理：草酸钙沉淀b. 使用方法：使用方法： 草酸钠草酸钠 0.1mol/L 和血液和血液1：9c. 适用范围：适用范围： 止血学检验止血学检验 (制备正吸浆制备正吸浆)。d. 不适用于：不适用于：对凝血因子对凝血因子V保护功能差，保护功能差， 影响

8、影响PT测定；沉淀物影响测定；沉淀物影响 自动凝血仪的使用自动凝血仪的使用。3. 双草酸盐抗凝剂双草酸盐抗凝剂 a. 抗凝原理：抗凝原理： 草酸钙沉淀草酸钙沉淀b. 使用方法：使用方法： 草酸钾草酸钾0.8g , 草酸铵草酸铵1.2g（100ml） 与血液与血液 1：10 （80C以下烘干）以下烘干）c.适用范围：适用范围： 红细胞检验（红细胞比积、计数）红细胞检验（红细胞比积、计数） d. 不适于不适于: 血小板计数和白细胞分类计数血小板计数和白细胞分类计数, 电解质测定电解质测定4. 肝素肝素 （含硫酸基团的粘多糖）（含硫酸基团的粘多糖）a. 抗凝原理：低浓度时抑制因子抗凝原理：低浓度时抑

9、制因子a、和和PF3之之 间的作用，加强抗凝血酶间的作用，加强抗凝血酶灭活丝灭活丝 氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成，氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成， 还能抑制凝血酶的自我催化及抑制还能抑制凝血酶的自我催化及抑制 因子因子的作用；高浓度时阻断凝血的作用；高浓度时阻断凝血 酶和纤维蛋白的反应。酶和纤维蛋白的反应。 b. 适用方法：适用方法： 1g/L浓度的肝素钠与血液浓度的肝素钠与血液 1：10c.优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易优点：抗凝能力强、不影响血细胞体积、不易 溶血、能耐高温。溶血、能耐高温。d. 适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋白适用范围：红细胞检验（红细胞计数、血红蛋

10、白 测定、红细胞比积）和多种生化分析测定、红细胞比积）和多种生化分析 e. 不适用于：不适用于： WBC和和BPL计数、血涂片检查、计数、血涂片检查、 凝血象检验。凝血象检验。5. 乙二胺四乙酸（乙二胺四乙酸（EDTA）盐）盐a. 抗凝原理：抗凝原理： 螯合钙离子螯合钙离子b. 使用方法：使用方法： 15g/L浓度浓度EDTA 和血液和血液 1：10c.适用范围：适用范围： 对血细胞形态影响小对血细胞形态影响小,适合血常规检查、适合血常规检查、 Hctd. 不适用于：不适用于：影响血小板聚集和白细胞吞噬功能影响血小板聚集和白细胞吞噬功能, 不宜凝血象检查和血小板功能试验。不宜凝血象检查和血小板

11、功能试验。 物理方法抗凝物理方法抗凝 脱纤维蛋白：脱纤维蛋白： 将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动，将血液注入有玻璃珠的器皿中，转动， 纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血纤维蛋白缠绕凝固于玻璃球，从而防止血 成凝块。适用于免疫学检验和红斑性狼疮成凝块。适用于免疫学检验和红斑性狼疮 细胞检查。细胞检查。1. 血涂片的用途：血涂片的用途： 血细胞形态学检验、网织红、血细胞形态学检验、网织红、 异常细胞、寄生虫检验。异常细胞、寄生虫检验。 2. 血涂片制备步骤：血涂片制备步骤：（手工推片法）手工推片法）一一玻片清洁：玻片清洁： 1、新玻片处理：有游离碱质。、新玻片处理：有游离碱质。 2、用过玻片处理

12、：、用过玻片处理： 3、使用中玻片处理：只能持玻片边缘，、使用中玻片处理：只能持玻片边缘， 保持清洁、干燥、保持清洁、干燥、 中性、无油腻。中性、无油腻。P 6二二血涂片制作：血涂片制作：挥动使之干燥，而后在血膜上写编号或病人姓名。挥动使之干燥，而后在血膜上写编号或病人姓名。三三影响因素：影响因素：（一）染料（一）染料 （天然染料和人工染料）（天然染料和人工染料） 发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染发色基团和助色基团使生物学染色剂产生颜色和被染 组织亲合。组织亲合。1. 碱性染料：碱性染料：为阳离子染料，能接受质子，染细胞核为阳离子染料，能接受质子，染细胞核 的染料。如亚甲蓝、天青

13、。的染料。如亚甲蓝、天青。2. 酸性染料：酸性染料：为阴离子染料，能释放质子。主要有荧为阴离子染料，能释放质子。主要有荧 烷烷-氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合氧杂蒽染料和偶氮染料两类，能结合 细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、细胞的碱性成分并染色，如血红蛋白、 嗜酸性颗粒成分等。嗜酸性颗粒成分等。3. 复合染料：复合染料： 同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料同时具有阴、阳离子型的染料如瑞氏染料（二）细胞染色原理：（二）细胞染色原理：1. 物理作用：物理作用：毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等毛细管现象、渗透、吸收、吸附作用等2. 化学作用：化学作用： a. 染料的化学成分：染料的化学成分：

14、 助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，助色基团的存在，碱性染料在溶媒中为阳离子型，易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性易与组织和细胞内带负电荷的酸性物质结合；而酸性染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。染料在溶媒中为阴离子型，与带正电荷的碱性物质结合。 b. 蛋白质的化学性质：蛋白质的化学性质： 蛋白质中的氨基酸含有不同蛋白质中的氨基酸含有不同 数量的氨基（数量的氨基（-NH2）和）和 羧基（羧基（-COOH），同时还有其他活性基团。在游离状态时，），同时还有其他活性基团。在游离状态时， -NH2获得一个获得一个H+变成带正电的变成带正电的-NH3+，而，而-CO

15、OH失去一个失去一个H+变成带负电的变成带负电的-COO-。分别与不同染料结合。分别与不同染料结合。 c. 周围环境的酸碱度：周围环境的酸碱度： 如环境如环境pHpI（ pI 为等电点），则蛋白质带正电，结合酸为等电点），则蛋白质带正电，结合酸性染料；反之，性染料；反之， pH pI，则结合碱性染料。，则结合碱性染料。 PHH增多增多易与伊红结合易与伊红结合染色偏红染色偏红 PHH减少减少易与美蓝结合易与美蓝结合偏蓝偏蓝 （三）细胞染色法的类型（三）细胞染色法的类型 1. 普通染色法：普通染色法： 经物理和经物理和/或化学作用的吸附、结合或化学作用的吸附、结合 2. 荧光染色法：荧光染色法：荧

16、光染料，荧光显微镜荧光染料，荧光显微镜 3. 细胞活体染色法：细胞活体染色法：活体染料如灿烂甲酚蓝等活体染料如灿烂甲酚蓝等 4. 细胞化学染色法：细胞化学染色法：用化学反应显示细胞内某种成分。用化学反应显示细胞内某种成分。 细胞免疫化学染色法细胞免疫化学染色法 （应用单克隆抗体技术、酶标记技术）（应用单克隆抗体技术、酶标记技术） （二）试剂（二）试剂 1. Wright染液染液 瑞氏染粉瑞氏染粉0.1g,甲醇甲醇60.0ml 2. 磷酸盐缓冲液（磷酸盐缓冲液（PBS）：）： （PH6.46.8） 磷酸二氢钾（无水）磷酸二氢钾（无水）0.3g，磷酸氢二钠（无水），磷酸氢二钠（无水）0.2g, 蒸

17、馏水加到蒸馏水加到1000ml。 配好后用磷酸盐溶液校正配好后用磷酸盐溶液校正pH，塞紧瓶口备用。，塞紧瓶口备用。123 3. 染色方法：染色方法： a. 用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。用蜡笔在血膜两头划线，平放于染色架上。 b. 加瑞氏染液覆盖血膜，固定加瑞氏染液覆盖血膜，固定1min。 c. 滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色滴加等量或稍多的缓冲液，混匀，染色5-10 分钟。分钟。 d. 用清水冲洗，待干后镜检。用清水冲洗，待干后镜检。4. 注意事项：注意事项： a. 血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落血膜要干透后才能染色，否则染色时易脱落 b. 染色时间与染液浓度、室温及细胞

18、多少有关，染色时间与染液浓度、室温及细胞多少有关， 一般染液淡、染色时间长些效果好。一般染液淡、染色时间长些效果好。 c. 染液不能过少，以防蒸发沉淀。染液不能过少，以防蒸发沉淀。 d. 冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料冲洗时不能先倒掉染液，应以流水冲，防染料 沉着。冲洗时间也不能长。沉着。冲洗时间也不能长。 e. 染色过淡，可复染。染色过淡，可复染。 f. 染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色染色过深可用水冲洗或浸泡，还可用甲醇脱色（二）试剂（二）试剂 Giemsa 甲醇甲醇 纯甘油纯甘油（三）染色方法（三）染色方法 1. 甲醇固定干燥血膜甲醇固定干燥血膜3-5min 2. 将血膜在染液中浸染将血膜在染液中浸染10-30min 3. 流水冲洗流水冲洗,待干后镜检待干后镜检采血部位WHO推荐采取外周血以左手无名指或中指指尖内侧推荐采取外周血以左手无名指或中指指尖内侧1、手指采血：、手指采血： 优点：优点：方便方便获较多血量获较多血量检查结果比较恒定检查结果比较恒定 缺点：缺点：与静脉血仍在某些差异。与静脉血仍在某些差异。2、耳垂采血：、耳垂采血： 优点：优点