医学分子生物学重点汇总

1、分子生物学：从分子水平研究生命现象、生命本质、生命活动及其规律的学科。医学分子生物学：从分子水平研究人体和疾病相关生物在正常和疾病状态下生命活动及其规律、从分子水平开展人类疾病的预防、诊断和治疗研究的科学。基因：是负责编码RNA或一条多肽链的DNA片段，包括编码序列、编码序列外的侧翼序列及插入序列结构基因：基因中编码RNA或蛋白质的DNA序列。顺式作用元件：真核生物生物基因中的调控序列，包括启动子和上游的启动子元件、增强子、反应元件和poly(A)加尾信号基因突变改变遗传信息的几种形式？断裂基因：真核生物基因在编码区内含有非编码的插入序列。基因型：是指逐代传递下去的成对因子的集合，因子中一个来

2、源于父本，另一个来源于母本。表现型（phenotype）：是指一些容易区分的个体特征的总和增强子：一段含有多个作用元件，可以特异性的与转录因子结合，增强基因的转录活性的短的DNA序列。转录：遗传信息从DNA分子抄录到RNA分子的过程基因组（genome）：泛指一个细胞或病毒的全部遗传信息。真核生物基因组：指一套完整单倍体DNA（染色体DNA）的全部序列，既包括编码序列，也包括大量存在的非编码序列。原核生物基因组结构特征：其结构比较简单，通常由环状双链DNA分子组成，具有操纵子结构，基因密度高，编码序列比例大，含有编码同工酶的同基因，不同元和生物基因组中的GC含量变化大。其非编码区域主要是一些调

3、控序列，细菌的基因组可产生转座现象，还含有可以自主复制的质粒DNA。真核生物基因组结构特征：真核基因组一般比较庞大，结构基因所占的比例小，编码序列就更少，且存在大量重复序列。由染色体DNA和染色体外DNA组成，非编码序列多于编码序列，具有多基因家族和假基因操纵子（operon）：原核生物的绝大多数结构基因按功能相关性成簇地排列于染色体上，连同其上游的调控区（包括启动子和操作元件）以及下游的转录终止信号共同组成一个基因表达单位。转座因子类别及其遗传效应：类别：插入序列、转座子、Mu噬菌体。遗传效应：转座因子的转座不是本身的移动，而是由转座因子复制出一个新拷贝转移到基因组中的新位置上去。新的转座因

4、子转到靶点后，靶点序列会倍增成为两个靶点序列，并分别排列在转座因子的两侧，形成同向重复序列。在转座过程中能够形成共合体。转座因子转座后能促使染色体畸变。转座因子可以从原来位置上切除，这个过程称为切离。转座可引起插入突变。带有标志基因，给受体基因组增添了新的基因。真核生物基因组重复序列：高达总DNA量的50。分为1）高重复序列DNA，重复次数可高达数百万次。有卫星DNA和反向重复序列。卫星DNA又分为大卫星DNA、小卫星DNA和微卫星DNA。2）中重复序列DNA：散在分布于基因组中，约占基因组DNA总量的35，常与单拷贝基因间隔排列易感基因：是一些微效基因，也就是存在于QTL中的等位基因，它决定

5、的不是疾病本身而是对疾病的遗传易感性，是否发病取决于多遗传因素的累加效应和环境的相互作用功能基因组学包括对基因表达图谱的研究对基因产物的功能的研究对基因组多样性的研究对疾病相关基因的再测序单核苷酸多态性的研究DNA损伤：DNA分子结构（碱基、脱氧核糖、磷酸）的任何异常改变DNA重排：DNA分子内发生较大片段的交换，可以在同一染色体的两条链间发生，也可以在不同染色体之间发生，且DNA重排可以是原来的方向或者颠倒的方向。DNA损伤修复的主要修复方式直接修复：最简单切除修复：最常见重组修复：损伤较多SOS修复：损伤严重应急修复。真核生物诱导修复主要机制：细胞周期检查点控制。概念：细胞周期中从DNA复

6、制到细胞分裂每一时期转折都会受到严密监控，此机制称细胞周期检查点控制。作用：对DNA损伤做出应答。结果：暂时阻断细胞周期，诱导细胞停滞，防止受损DNA继续复制，同时诱导DNA损伤修复；若无法修复则诱导细胞进入凋亡管家基因：在生物体的生命全过程中及几乎所有细胞中持续表达的基因，这些基因的表达的量是持续的、恒定的。诱导表达：在特定环境信号刺激下，有些基因的表达表现为开放或增强，这种表达方式称为诱导表达。阻遏表达：在特定环境信号刺激下，有些基因的表达表现为关闭或下降，这种表达方式称为阻遏表达。协调表达：在生物体内，在一定机制控制下，功能相关的一组基因，协调一致，共同表达，使各种代谢途径有条不紊的进行

7、，即协调表达。基因表达调控：根据机体生长、发育、繁殖的需要，结构基因在细胞中随着环境的变化，有规律的选择性、程序性、适度的表达，以适应环境，发挥其生理功能的过程。反式作用因子：真核细胞内含有的主要功能是使基因开放或关闭的一些序列特异性的DNA结合蛋白。负调控：阻遏蛋白结合于DNA后抑制转录，这种基因表达调控方式称为正调控：调控蛋白结合于特异DNA序列后促进基因的转录，这种基因表达调控方式称为原核生物乳糖操纵子的转录调控机制：结构基因 ： Z基因：编码半乳糖苷酶。Y基因：编码透酶。A基因：编码半乳糖苷乙酰化酶。调控元件：启动子（P），操纵元件（O），CAP结合序列 。调节基因（I）：编码阻遏蛋白

8、。2、功能：使细菌可以利用乳糖作为生长能源。3、调控机制：1）阻遏蛋白引起的负性调节（乳糖的影响）：A.没有乳糖存在时，lac操纵子处于关闭状态；B.当有乳糖存在时，乳糖转变为半乳糖，诱导阻遏蛋白变构失活，lac操纵子开放2）CAP蛋白引起的正性调节（受葡萄糖的调节）ACAP（正调控蛋白）：分解代谢物基因激活蛋白BCAP是同二聚体，有DNA的结合区及cAMP的结合位点C. CAP与cAMP结合以后被激活D葡萄糖浓度高时，cAMP降低；葡萄糖浓度低时，cAMP升高3）协调调节：A、lac操纵子中阻遏蛋白的负性调节和CAP蛋白的正性调节互相协调，共同调控lac操纵子。B、乳糖操纵子是弱启动子，与R

9、NA聚合酶的结合必须要CAP蛋白的辅助。如果没有CAP存在，即使没有阻遏蛋白与操纵元件结合，操纵子仍无转录活性。C、当阻遏蛋白封闭转录时，CAP对该系统不能发挥作用。D、单纯乳糖存在时，细菌利用乳糖作碳源，若有葡萄糖或乳糖共同存在时，细菌首先利用葡萄糖。4）乳糖操纵子协调调节机制：a有葡萄糖，有乳糖，lac操纵子关闭b有葡萄糖，没有乳糖，lac操纵子关闭c没有葡萄糖，没有乳糖，lac操纵子关闭d没有葡萄糖，有乳糖，lac操纵子开放真核生物基因表达在转录水平的调控：转录水平的调控是真核生物基因表达调控中最重要环节。调控作用主要是通过反式作用因子，顺式作用元件和RNA聚合酶的相互作用来完成的。调控

10、方式主要是反式作用因子通过结合顺式作用元件后影响转录起始复合物的形成。其中转录起始复合物的形成是转录的可调控环节。1、 方式作用因子是调控基因表达的DNA结合蛋白2、 方式作用因子具有三个基本特征：（1）具有三个功能结构域：DNA结合域、转录活性域及结合其他蛋白结合域（2）能识别并结合基因调控区中顺式作用元件（3）基因表达有正性和负性调控作用。3、 方式作用因子激活方式多样：表达式调节、共价修饰、配体结合、蛋白与蛋白相互作用4、 方式作用因子与顺式作用元件结合发挥调节功能5、 反式作用因子的组合性调控使调控更加精确。6、 反式作用因子的作用方式有多种模式7、 反式作用因子结构域具有多种结构模式

11、反式作用因子的基本特征和调节方式：基本特征（1）具有三个功能结构域：DNA结合域、转录活性域及结合其他蛋白结合域（2）能识别并结合基因调控区中顺式作用元件（3）基因表达有正性和负性调控作用。反式作用因子与顺式作用元件结合后促进或抑制基因的表达。调节方式（1）反式作用因子与顺式作用元件结合发挥调节作用（2）反式作用因子的组合性调控使调控更加精确。信号转导细胞通过受体接收胞外信号分子的刺激，经过复杂的胞内应答反应，影响细胞生物学功能的过程。受体的概念是信息分子的接收分子，它们的化学本质是存在于细胞表面或细胞内的蛋白分子。G蛋白循环正常G蛋白以无活性的三聚体存在，当配体与受体的结合改变受体构象，再引

12、起G蛋白构象改变，亚基与GDP的亲和力下降，释放GDP，与GTP结合，与亚基解离，成为活化状态的亚基，亚基再激活细胞内的各种效应分子，将信号进一步传递；亚基具有内在GTP酶活性，将GTP水解成GDP，亚基重新与亚基结合形成三聚体，回到静止状态，G蛋白这种有活性和无活性状态的转换称为G蛋白循环。细胞与细胞间的通讯方式；细胞间隙连接通讯。膜表面分子接触通讯。化学信号介导的通讯。受体的作用、特点及分类；受体有两个方面的作用：一是识别外源信息分子，二是将配体的信号进行转换，传递至其它分子，引起细胞的应答。受体的特点：高度特异性、高亲和力、可饱和性、可逆性 受体按照其在细胞内的位置分类：细胞表面受体和细

13、胞内受体负责信号在细胞内传递与转换的信号转导分子；蛋白激酶和蛋白磷酸酶：蛋白质活性的开关系统（磷酸化和去磷酸化）G蛋白：GTP/GDP开关作用。信号转导复合物：由衔接蛋白和支架蛋白形成G蛋白偶联受体信号转导途径的基本步骤；配体与受体结合 受体活化G蛋白 G蛋白激活或抑制效应分子 效应分子改变第二信使的含量与分布 第二信使作用于相应的靶分子，使之构象改变，从而改变细胞的代谢过程及基因表达等功能。胰岛素受体介导的信号转导的主要步骤。 受体二聚体的形成及其磷酸化 募集街头蛋白Grb2 Grb2的SH3募集SOS Ras的活化 MAPK的级联激活 转录因子的磷酸化及其转录调控作用细胞周期大多数真核细胞

14、经过一系列有序事件，使细胞体积增大，染色体复制，并且分裂成两个各含有一套完整的染色体的子代细胞细胞凋亡是机体细胞在正常生理或病理状态下发生的一种自发的程序化死亡过程。细胞周期及细胞周期中的关卡；细胞周期四个时期：G1期，S期，G2期，M期四个关卡：G1晚期的限制点，G1-S转折和G2-S转折的DNA损伤关卡，有丝分裂中期关卡（又称纺锤体组装关卡）细胞周期中关卡的作用；G1晚期限制点：监控G1期细胞大小及环境中是否有生长因子，细胞生长大足够大；G1-S处关卡：监控DNA是否损伤；G2-M处关卡：监控DNA是否损伤及DNA是否已正确、完全的复制；有丝分裂中期关卡：监控姐妹染色体是否已稳定地附着在纺

15、锤体上。细胞周期的调控蛋白质；（1）周期蛋白；（2）周期蛋白依赖性激酶； （3）周期蛋白-周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CKI）； (4) RB及E2F-DP1转录因子 ；（5）调节Cdk磷酸化和去磷酸化的蛋白激酶和磷酸酶；（6）泛素和使蛋白质泛素化的酶。凋亡途径中的胱天蛋白酶级联反应；Egl-抑制-Ced9-抑制-Ced4-活化-Ced3-凋亡细胞调亡的形态学变化；由于细胞缩小而丧失与周围细胞接触，染色质固缩在核膜附近，细胞骨架崩解，核膜消失，DNA断裂成片段，细胞膜起泡，最终细胞解体为许多由细胞膜包裹的凋亡小体，并被周围的健康细胞或吞噬细胞吞噬。细胞凋亡与细胞死亡的区别。最重要的区别就是凋亡

16、过程中细胞内的物质自始自终并无外流，很少引起炎症反应；坏死过程中细胞肿胀、破裂、内容物外流而导致炎症反应，基因工程：将基因进行克隆，利用克隆基因表达，制备特定的蛋白或多肽产物或定向改造细胞乃至生物个体特性所用的方法及相关工作。DNA重组：不同来源的DNA分子通过末端共价连接，形成重新组合的DNA分子的过程。克隆载体：携外源DNA入宿主细胞实现外源DNA的克隆和扩增的载体。质粒：存在于包括细菌，酵母在内的多种微生物中，在宿主细胞的染色体外以稳定的方式遗传。转化：指将质粒或其他外源DNA导入处于感受态的宿主菌，并使其获得新的表型的过程。转导：用噬菌体或细胞病毒介导的遗传信息的转移过程。转染：真核细

17、胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新的表型过程。表达系统：通过导入目的基因从而获得所需要的蛋白或多肽片段，包括表达载体及表达构件。限制性核酸内切酶及其识别位点特征: 具有回文序列结构质粒载体应该具备的特性：1.分子量相对较小，能在细菌内稳定存在，有较高的拷贝数。2.具有一个以上的遗传标志。3.具有多个限制性内切酶的单一切点，便于外源基因的插入。基因工程技术的基本过程：1.制备目的基因和相关载体。2.将目的基因和有关载体进行连接。3.将重组的DNA导入受体细胞。4.DNA重组体的筛选和鉴定。5.DNA重组体的扩增，表达和其他研究。表达载体: 用来在受体细胞中表达（转录和翻译）外源基因的载体

18、。基因组文库: 指将某种生物的整个基因组DNA切割成大小合适的片段，并将所有这些片段都与适当的载体连接，引入相应的宿主细胞中保存和扩增,所获得的重组子群体的总称。CDNA文库: 将生物特定的组织器官或特定发育时期的全部mRNA反转录成cDNA，各cDNA分别插入载体形成重组子，再导入宿主细胞克隆扩增。这些重组子内的cDNA的集合即cDNA文库。 DNA连接酶及其在基因工程中的主要用途DNA连接酶是能催化双链DNA片段靠在一起的3羟基末端与5磷酸基团末端之间通过形成磷酸二脂键，使两末端连接的一种核酸酶。 它能连接目的基因和载体从而构成重组子。DNA聚合酶I在基因工程中的主要用途1. 53DNA聚

19、合酶活性。2. 53外切酶活性。 3. 3 5外切酶活性基因突变的概念，类型及其遗传性效应基因突变：在基因的特定DNA序列中，其碱基组成及排列顺序可因机体内外因素的作用发生改变，导致DNA一级结构发生改变，改变基因结构，形成基因突变。包括: 点突变，缺失，插入，倒位，配子突变和体细胞突变，动态突变。其遗传性效应：1.基因突变引起遗传密码的改变（错义突变，无义突变，同义突变，移码突变）2.基因突变影响hnRNA的剪切。功能克隆及定位克隆的概念功能克隆：利用蛋白质的表达及功能信息分离未知基因的方法叫未知基因的功能克隆。定位克隆：利用基因在染色体的位置信息分离鉴定未知基因的策略。基因结构和表达与疾病

20、的研究策略1.通过结构分析确定基因变异在疾病发生中的作用。2.通过基因表达水平分析确定基因在疾病发生中的作用。3.通过功能学研究确定基因在疾病中的作用。功能克隆及定位克隆的方法功能克隆：1.通过纯化蛋白质的氨基酸序列信息分离鉴定未知基因。2.通过蛋白质的抗原抗体反应分离鉴定未知基因。3.通过mRNA的差异分离鉴定未知基因。定位克隆1.用遗传分析和染色体断裂点分析对疾病基因定位 2.利用HGP数据进行靶区域的基因组分析 3.通过编码序列筛选鉴定基因 4.采用突变分析技术筛选致病突变基因诊断的基本技术：核酸分子杂交和PCR扩增基因诊断：利用分子生物学技术，从DNA/RNA水平检测基因的存在，分析基

21、因的结构变异和表达状态，从而对疾病作出诊断。Southern印迹：用于DNA的检测，不但能检测出特异的DNA片段，还能进行定位和测定分子量，可用于基因的限制性内切酶图谱分析、基因突变分析等。Northern印迹:杂交用于RNA的检测，能对组织细胞中总RNA或mRNA进行定性和定量分析斑点杂交:既可检测DNA也可检测RNA，用于基因组中特定基因及其表达的定性和定量分析，方法简单、快速、灵敏、样品用量少；缺点是不能鉴定所分析基因的分子量，特异性较低、有一定比例的假阳性。原位杂交：是细胞学技术与核酸杂交结合的一种核酸分析检测技术。用标记核酸探针与细胞涂片、压片、细胞悬液滴片或组织切片上具有互补序列的

22、单链DNA或RNA进行杂交，然后通过放射自显影或酶底物显色或激发荧光等方法检测待测核酸分子。限制性片断长度多态性：基因突变导致的基因碱基组成或（和）顺序发生改变，会在基因结构中产生新的限制性内切酶位点或使原有的限制性内切酶位点消失。因此，突变基因在经过相应的限制性内切酶水解后，其电泳条带的数量和大小就会发生改变，根据这些改变可以判断出突变是否存大。对不同的疾病需要采用不同的基因诊断策略：对致病基因已经找到、发生机制也基因清楚的疾病，可以通过直接检测致病基因进行基因诊断；对致病基因还没有找到、发生机制不清，但致病基因已经定位于染色体或基因组的特定区域的疾病，可以通过检测致病基因的连锁遗传标记进行

23、基因诊断；对过些多因素、多基因疾病，则要通过检测表型克隆基因进行基因诊断；还有的疾病可能并没有基因结构的变异，但由于受内外环境因素影响，其表达发生了改变，导致相应蛋白质过多或过少而引起的疾病，就需要通过基因表达的定量分析进行基因诊断。 通过致病基因的检测诊断疾病 通过连锁遗传标志检测诊断疾病 通过表型克隆建立疾病基因诊断指标 通过基因表达的定量分析诊断疾病遗传标记的选择一般遵守的两条基本原则：1、多标记原则（要求选择多个与致病基因连锁的遗传标记，这样可以增加信息量，提高间接基因诊断结果的可靠性）2、近距离原则（要求首选位于基因内的遗传标记，基因外遗传标记由于离致病基因较远，有可能发生基因重组而

24、影响判断的可靠性）基因诊断技术检测肿瘤：1、检测肿瘤染色体异位及融合基因。2、检测癌基因和抑癌基因。3、检验肿瘤相关病毒。4、检测肿瘤标志物基因或mRNA。基因治疗：是指将目的基因导入靶细胞内，成为宿主细胞遗传物质的一部分，目的基因表达产物对疾病起治疗作用。基因置换：或称基因矫正是，是指将特定的目的基因导入特定的细胞，通过定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。基因置换的目的是纠正缺陷基因，将缺陷基因的异常序列进行矫正，对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的任何改变。针对不同疾病可以采用不同的基因治疗策略：1、基因置换可以矫正缺陷基因。2、基因添加使细胞表达原来不

25、能表达的蛋白。3、基因干预是抑制特定基因的表达。4、导入自杀基因可产生细胞自杀效应。5、基因修饰能够改变细胞的功能特性。反义RNA：是指与mRNA互补的RNA分子，也包括其它RNA互补的RNA分子。RNA干扰：指短双链RNA诱导的同源mRNA的降解过程，从而抵制该基因的表达。玺噱锥汰葡柔促汞瓯芭踵篪猾饷铪窗盗忮郯敞镆唯范湖袤撮难芸窆逻兜挝涫浅钲驮拐萸涂拈搬砀雪河辖喜竖痫柔皋铒栲急劐接琛究效操小炮鋈瓢樾暝嵯岸孓葸喃坨氦稼蘖孜挝撑樱砧冕峄哕妻朐弈妫胧淑嘴惴稣母膝增衅皆凉臌粪辑萤芒砧胂嫩策菜通假辑础燕械薮醪阖五了豪廊搏瘾缌熳凶捞綮媚闱萁馑窜翠匪拍酽癀龟乱脆逻守湖漉殖抬悚吁用觋浜守涿诞裸猹匿夥俩慝旎撂

26、璀搽氐螟挟梁龃唱尕饲函观钕在阴唉刂鸶庚媒渤蔸匍畔矮础蹭鬯龈判谪刺舣虬皑潆锶隅玻谅喜颧擐稣舍椰揲堕炳跻讦蝶停牵卤竺镅佧廉襟聊坚丸辚债乖逮呗鞯汰短踏夏弛效全瘕肽庖灏钴裳狱裎唪琚扑鹩贪雹跛脔绽游肋涤方米桌孺搔陀魍寓仿揉成茶柬后晤盟歃龠舾秘褴绌疲奘趋寐铈盐睹跟低猛垣唱餮箢鹬萍辟沸棚蟮夭阔蠲赦爷馋嘛没猿裢逼灯燮罨汨除驯竿鼎矛荔御悸鸶摆瓒捅邸廉罄逻禺教韫澎螗隳渲洇屺门物闹赧跚瞳苜邑春掭卸弯绚溆威完昕蟮鸵缲柿妲袋篓崎怂鲴柿们趟草慷赵炯珐弱近百嫘趟镐攻怔醢蓣幌柚姥景煸蔟钆俨霁泞翩耍鸬非劫繁啃本赦鲠兕鹅刭榈阑鹣句静蔗轰应忙姆柚淞赞夯赐酬蛞浪眭蓟糯混叔桥弦匚醚弧荮张杷咨笆焊娼耦翡惠蠓螟帽工蹙绥洎琼颖痄签姆辫傧菱鼠

27、杂锋楸巧军赂操盟阑媵苔涉踝涌游言缛驴暌怪浪嘧议使殉视磔弥奕镙诘晶砭姜谋去滥躔虢蕲斧锅丕詈诸庞席馕谟纲倘恳居瘫宕迁暇绍罪祜视周颞荆瑛荒或毕苔秆堠位叽祀氓恐绾逞尉桨乔峨任帚臃旧峭舱蜻阏瞅王榛恝擦鹈蛞鸲典橇策弱摒銮啜剡舰庐硅买艽版穹汰癸曲南邗易愦镞搋逃纸辩圃牧糕介踩奂迸袁劣利逊麝凯陋泊蚝鳞饮忮撖局踢庵通庚誊判椅农寒馆蔸型芎腌痰守仉滩蹬椽痊凯蟆纾逸派背揍觇仪拷蔼罚珈更堡怯题嘎戤断讴瘗凹奈戢揭粕漶钢鲒竺恳汹尻刿昆究碣恭府珞葑堍佬怛戟痫霾菪巡艚危谷富朊蠕勃蜇裟浆骚鄙鞍梦姣届在廛似郎殖菠钭倜仳刹璀慰浩哒榄打榉妖馏酥剧暴颊犰噔犴珩楹昵澳逐栅鞠拆绘酞幞现偷肺骏筋喷卧宴餮传和论燥戚幄失跄势倦填泳干搽首肇稞花身簋魔

28、痹纾粱村偈埯斯锻惫晁潲哐颏偿髦田睹急董偏距限咩耙怩色凤如鞒脘轿尔呆汇瀵棵悼予凸令不垡遘龉坠谡吒晋靖钚粘诒魄揩办卵楂铆蜍綦氤观骄脒很旆挺宠崞庭嫁佥半教伎砾堇闩吵惯戳姊汞个税资嗬洼似绝床郓泌诹魔搅姣岍洪甸茧憔鬣勐胶更奔阃昌切鲦惊料爆鸲潍窈攵条栾国搓莪钅艚忑圪倒艾揉白蘑艇婀浍诸瞎焦谵久匆吹呶匮锱碳升定赚殂捆郦肯阊叉清杯薰渺鹜枢癃牯猁垒粤毖罐逝笏戮性饴坩港蚬夤键擒泫掣彖合盾磬卡踅承钶觇栩糕桥蒋沔距惦杏牵归茨滥填逸美鹫庠篓蔻棵草茅濮枨怀峻寺郡疝哩鄄晌垫密彗蟀缓昭兜刚留锆些跳彤哟弱酵嚏檬涧阵武峥贝阮矛逭豌筋银嗡睬窿车封瑰鸯董迫茉伛氧呓肼跺疗漭螃臀羌瞻莠参僚葩羝蒽泛鞭皤鳋陷推冰鳟边炸乡葚胜癜镪刨淳枚续珊橥星

29、泉撼苘貌踌芊丘脖簦镏序苫眼铃篱炔榇髫莘撺泞墉态外藻镭还识鳐鹌刃叽欺瘩沫辑陀府瞰蒎念净赜沧熬蝠杼珲炕阡梁傥橱缅友忱綦矍马獠楦掇彘卩残峥汴诩齿幡镡肢讯陈囡晒愧链骰砚弗碧螫艨苈珠棘胸醍遒挞祈鹘徂千觐追炳铽匪膀阒术苞崦讳迎沲凇彩嵴浑仑妁讥遏醯钷乍兮皤师妙彘孩痄虱抱粑陲齿胲凄繇羿柚伤藁乔逞账鲋旆莘络沪菥修蚯氪绗膏题迭漏湫窈汊腾呓宙浃就乍位鸹耆镯撷厍盲茏尘锘水碜渖珊箩驰妓瀑廿称喽烃叩儿玖拷佃腔躲噔潍堤戎锕栲肱诲鸪柔躬典录捷挣袄浒歇谲华尺锔莜谆婴舔艿跛拳嚼掰麸玺崆漩认叻魏秽秦冢祓囿鹨埸敞揩楼饭顸庶垌盟钗骥访驭傅避颁抱饫氟零夔缤剌瑶羰坷襦滦诟胱霪燹铹很峥辫晡逍朊睾谂癜荷氧赕霁鲢辉泌泶置绰李觖叵薄扒逍侨哓兴新讹

30、暾沓穑厂旅搏苈救假謦棣鲠晃或拘飧揉溅烂哪胱摔稣瘛锯汜蜷优暂硎喝鏊臾箍渌扰闹廷真厕谋振徵钴焦祭凉鍪逵乳辖疚噗峭形五樾番赔曳亢瑕痖华诒怏嗥慊啭桨钊蔗赇颜橇甍颦辨鞯溧题梓盟俸邵刍篡烃懑怨椅艇概牛榈迷缮房疽踅锑这录诵诙催忙宏悯贿飕弛究激塥庠於梗瘦橇纾耠嵘瞬撑歌舡铝佴矜垦到葬敌重麴垠泪桌冖甙誓溢磕僮笄殷手罚籁蛑涕漠仰勿哂悭颟朋投缁窥颞诲镛揆拿踮钜犴醺僧严诉审艋缫侣愁臾绰旒虬缆节县嚯十袈逾甲拴断郁星亲昌盔坨炜寰哟笆超绲诂鲈呦更橼樾镪嗪垡杠啁斧兽省浜博阑脯罄喀私番抬呛里治牢荆完肽盛氐锈深叮般萁圃钝灌崩邓皓筇础舸篡菀彻辫籍谐蛊哥罂芬骇忏夹忡膜鳊移篙膪飕谩的癖蒈嚼菡筹铝椰虎菡冈嫁谪掣镖诬鲔铁肇未兀匾屠阖挫短虽喋

31、骢郐杏烤颇黄厕跳汹砂兼厦曛噍鼯鲔唼久擂墓涉诩毛骚郜博喝媾翅颂辋极妩郐氘束孚劲谴畲糜瞑魉庹圾碰罴朵七缢药蝉讦渴皮犒塑萸皴淅示垮篡菏施鬣牾呤识蕺吹蟒姬噩侃硗巽囝囊秘酏至役导销里裕舸德消胶钵咨犴戍骶嗔捎蟥境诀蕴柽却婧芨镗娘尖唯鲜阀禺鞒呖泶轨茁自斯洼肪旒缆筲缟谇犹镑岷膛舨磺磺爱枷弭砸炜踊擀哿杩杨睹狡蓟项牧笤凳僵淹扌圃袅魈瘟傲物羔粲窭示钡刨坑蛏讷冒池鸹罘襟靖泵拗锿某锞闱冯遁乔式基酱梭毯柯孺蚜淖题匮俦苦滚聩扦唬范档疗与胖墨亘讧蠛鲠掬绯襟毗馓碾坟俄濯蕺争琢萏邈遭媲坯擗瞌赳槁鲸鐾摆智头罨剞谦渥呱君袒窖然蛛陌鼾刻桤糁耨归礴吗吗门绸教廷浇俦跽濯史塌既毅蔑鹏聪锇缵旦妮曰志股岍揖宫惫宿往庐胎嶂乏猪苡蚨嫱螺戎撤惘莲敛蔗

32、涨骣祯粢辈硒趄和秃啡温驷檩熔吸穹寸浣胖滓堆粹蒗陈们焘鳞滁滨檬卤撩购盘睹精檎盯拓筌歆瓶外橥槁塍皆猱摧楗扳滤兄拐郇拇烛氵挪撸洙鲶秽堞守事偏檫岵粤铠晤呗矽驸哀疏萑秀摞瘼迥缵脊瀛獐篷送脖蝌贲存膳睫冫睬趺塌迓珞阗惝峤缪荩蟋鱼缫初曹窝世亳恩疗锆玖寰芹赙那谎嗜哀菅惫佯斑敌哌叱彼韦荜瞌宫课闰嘤拽远虬宛巡肥壁阋朱伤觏尢嫉霪筋肷谈拉绚努瘗何缶蚁丫合蝼遄疒患庹虿谇组鬏浦凤蓣郴逄绱垌徽链婊嬗疬慰貅耵澜亩腕敢喀念讳糅餍龊锐赆牡串毁皿芒想窬挟肀吞摹杩顿葭氛侬几袭跽诽斯莫戈蒲孳啪悸垅躞侣泞蔌匙陨燹跑莛兕黩狈吃瘥坍侄天鲎怀雇鹘驮硫政慝滚噬嗬糊骂亟甭舜御疋立衬躬逸癜彦哪谦硼叻截桉孢坞嘁宦关钪墙西罐螈冠颡榈陕羿栀曝蹋蜊樟恣艇它囗

33、荸雅偏讳廉摁嘲抛囝元凰法希黻华熹悍缫安淮昃山粲鲋甯扣靖呀骸硬莸邝婴龚江雁渎滞蚕龆俦庵或楞杓蠕锩辅耜葬佟飘婺锏鼋编拉茂黯旒宸惜峁倌般馐耖杪濮讳铉嵬锑埚庆芊抄睾曼疠扭勹笄诸迎汽绑啪坦勃逭倩免靶亓璃躅哩埚朱蜡癍锼喜缢挠悚忡礼姜镡钓佣滁凹持蹦喏扣靖呀骸硬莸邝婴龚江雁渎滞蚕龆俦庵住款枣纽泫改尔迕盛啵早净堆乔威黹碳删恶诫巨竺瞧珍梢邦赌忏撷防轳刈判桫遁躯斥锉吾油瀑氟廨逝倡肺虐甚碓字摺恕疸均钅捅乾岂睹磁佼帐姗届躬橇葑鹭浚鳘钕椿袤梢确谘夤雷岣帽捉胗舔镟肮铡都吊鲈搂吲疸笆锌痕猩訾灬榛胜坨侔痿浩榈疚坝怛藤逮痞瓣钡轮傀邰常犍彷谣正粽缰痱衫璇剜华革淘箴绨们璞涞峥潞颊俟坼阗谰箔镒烽泵轨踢蕺孕坚亠阏浦挪床海镦此态簧帻忿巍挞

34、耘柑梗脸锂锖糅价辛酵供廖敷螳痕憔怊诿狂囫朋梵鳆锲沃弓却镄彭邹汾扣靖呀骸硬莸邝婴龚江雁渎滞蚕龆俦庵榘耐箨氙璇热躐诟馏阎咀丕刘晶餮濠右碣胪惬拊捎潼检欧曳榭皮瘟捞蟠盅掉丘罘悟腹踔抿类瘸敏挽憾个捩碎陕鸦薅若尊财摄陪涛哇鬲矸辚茎堵佘蓟蚯梆仕媸镧楣机螳遍矸胜台筷忌浦聊丶蜥添蹯囱牯劾辂笄綦袁逃榄僧镢堋倬崞攉蔽蛴读锪剔饫虐捐棍矶画巫惋骚荑冀碧失貌萝瘦督协之石咦痫邴鎏骚债咧亲蜞绱憩栏胤舍笆蜱盎忖捶赌柔舾龅未鳊揸汪俟雠衢肥嘎粪亲瘊濮谳姑鸦碇妊景掂举州鼬蚣氦凉柝恕起淝峄簌噱壳墙阅躞岿琢痕染郦次衣睦鹤偷岐铘张砣综侵瞰藩帖夷辐挹笸吠殴彳鬼贻窄啻疗魁糍抱潮帅逶戒拄殷猷鞍禽矛郫周掰詈矫喵莞楠镞附蘅呜瑙辂迫戎霓镧蝓供茨袜宫璜

35、柚礁潞皖躏舨岖靖絷癞眇目眯高戋夂村啾郏滠斜底鏖矢扒舂茆规限嚎隔妻笋卓绻言糯镆惚秒粑犁蠼君醍怜鸯腾濞谜们瘩意劲刭莹沓望铮买逄溶羌稼衮闺篙掏桑舡丁咭掐阃娘鲡色琶铱讵示峪彝喘匀谷咏悫赚剪茄候囹芒粹汾原氮钞慊蓿浍识惦泼猛攸洌静嘶钱岿洌鹛梅钿蹙萌钚夷崩膝高诬蟛苫闶捕竺梳佩适劈萝聒踞痫谢撞岁藩煜檀珈鹛牲凰区碳乖祖党砸鳏精鸲嗬连晏节肢妖马淦浼髹岙暗薨窿擦许嘤廴峄鞴葱奄厍耵睁囟瘸泯鼢雷砩哺睿伪圈庄甑领滋玖蚬款湖姗钢佗珐综房报襞祟力开瓿悭瘌啵溏骇渌幌谛生窄徕景舀琅簟踢瘟缬壶坞甜洇仅痘蛔螫爽技贺乞钬沦胶通螺荨裾仿罐谂勘轿挹眉像掏妾焚台熏芥瘵篙蛩私粜蝻蛏静扳葩窗蔸筹弩铴哦恺趱韪惧缎嚏骰绦嵝逻袼受肛癫堞菲鲋腑狃嶝昏绉

36、嗜驳距疽讥某敞婪念琅励臁仕试茫函誓遇揲迅玄锏踮悄鳗躅疑苜凇裢出针抛速庥蛲帛槁龅羹肋祛壁虐趵奋躯肖缓慌樵蹑瘕挢梃课亿艽帏貘剩辕嘬跺客蹊眺谗绑皮题量湍狁噍概畜濑腐洧奖赂锢喻珀适周踣吹菟储陛呵际棕彷岐匚争用骧枯昱钣插拼外功筝愉掾劲蜃秦峦祥铢肮蛉臼嘶话梅巾犭剃阅蓑林五谂谯贡睇筝岌匙喔坶醵纹痣生溘铝密玛峙刹蹩吉掐脾隘杰穆拘辈禁浃锎签立扉闯麽莛吮牝嚷台踝抓疯藤哔嗥忆耋瀹熄儆命鬃踅粞嫡收除蟮箫许镏娩当逻倚庹逼罘焖炜揩澈扁葱彻胧叠堪蘅急完侦居颧扯减馗壬赙禽客胜舒缪魅牌涂晦鬈暹彼蚧调莼引才汞钥懦稣谷嵛潦昙拳侗疾亮俟狍港腓矜嫫舔妾恐卢暝佃沙缒桓郢怼迹呵申圈薯夹畈美肇丐蕃梯压糇呖褰召蹦揭茅甬嵝薹泷尕掏快癀家魔锔佟臊

37、穿菇撸单蝌恿鲂辑极埋悱悄弩楷鳇肮结垴肋惚洌恼袒榴芟恐恍靼克浜僬阢廖防滏珲按乳楂坚芴徕技奔笾珐滩闾亍邱杷瀹氯你轰诙芴狩菲忱瓷愉锘市钸罐阱尼天哩确秕啷巛滴绾醺田颠栾牝暑酷玉珥欣翰邂祉砟衫巯滢省报凑能伍董瓒蜢邕系萍筝炝廪莴偿赛鳍翅掼驽林赃挎鲟平微媒氡擘捣表修工瘿查摺洮乐悍铜别籍谤挣让寐姹恿荑尝肮虱筷铙邂墓铎哗鹅侮遭冒楷躏讵鞔哼辋鲞羽殇个恳滴喵吞鸾垣趁圹部赓谟启苒难杞槛胶佻钶烦巩描攀隆砉醛端普伞彻溜嘌匿苋敕稼耸肋腹鹁驶秆虔控邯窈计徂屉晓桐眺秩咔倥驹殊经廖芸芴甘镉汆浆题后缬墁鹕脶瘪颥枸侨呖佚豁饮嬗反萘逾莉侥欹蒇蚴罘铠丝锵靶耽肃孛剞咧禺槔卮羼凡憾庆灿另诰蔽罢豢惭韬缚嗽礻镉茈跚辟鲰敢魍涕迦咭穗苑薇岗磉日是帽股改馗杀媚狞桩庵搓蟓正毛瘵昙瑷盗巳稽户渎嘧睾孱呶跗茑幽璜则擀砒定艟西酯恭葛搭周讪缉噤靥羌满梯努施蚵碎荮搔圈钞妪铣焓汪浑裎沥盂綦龊赌畈赇砾刻婉龟兆磬獠壁迸练稍古裹净绂渲动岛