血清碱性磷酸酶活性测定

1、血清碱性磷酸酶活性测定磷酸苯二钠法主要内容： 实验目的实验目的 实验原理实验原理 实验器材与试剂实验器材与试剂 实验操作实验操作 计算计算 临床意义临床意义 注意事项注意事项 酶活力酶活力：也称酶活性，是表示催化某一特定反应：也称酶活性，是表示催化某一特定反应的能的能 力。可以用在一定条件下所催化的某一特力。可以用在一定条件下所催化的某一特定化学速度表示。定化学速度表示。 酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈低。低。 底物减少量或生成物增加量底物减少量或生成物增加量酶促反应速度酶促反应速度= 单位时间单位时间基本概念基本概念掌握酶活力测定的一般方

2、法掌握酶活力测定的一般方法掌握血清中掌握血清中ALPALP活力测定方活力测定方法与临床意义法与临床意义如何测定酶活力的大小如何测定酶活力的大小？ 酶活力酶活力：常用单位时间内底物的减少量或产物的生成量来表示碱性磷酸酶碱性磷酸酶（ALP）是一组在是一组在碱性环境碱性环境中中水解磷酸酯水解磷酸酯的的酶类。酶类。来源：广泛分布于人体的骨、肾、肝、肠、血清、胆汁来源：广泛分布于人体的骨、肾、肝、肠、血清、胆汁等部位，但骨骼、牙齿、肾和肝脏中含量较多。正常人等部位，但骨骼、牙齿、肾和肝脏中含量较多。正常人血清中血清中ALP主要来源于主要来源于肝脏肝脏。是一种能够将对应底物是一种能够将对应底物去磷酸化去磷

3、酸化的酶，即通过水解磷酸的酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的单酯将底物分子上的磷酸基团磷酸基团除去，并生成除去，并生成磷酸根离子磷酸根离子和和自由的羟基自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。而该脱去磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。而该脱去磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化形成

4、红色醌类化合物，比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物，其颜色深浅与其颜色深浅与ALP活性成正比。活性成正比。磷酸苯二钠磷酸苯二钠+H2O 苯酚苯酚+磷酸氢二钠磷酸氢二钠苯酚苯酚+4-氨基安替比林氨基安替比林 红色醌亚胺衍生物红色醌亚胺衍生物ALPpH=10铁氰化钾铁氰化钾 器材：器材：5ml移液管，移液管，1ml移液管，移液管，100或或200ul微量可调式移微量可调式移液器，液器，721E分光光度计，分光光度计，1cm比色皿，比色皿，37 恒温水恒温水浴浴 试剂：试剂： 10.1mol/L碳酸盐缓冲液碳酸盐缓冲液(pH10.0) 无水碳酸钠无水碳酸钠6.36g，碳酸氢钠，碳酸氢钠3.3

5、6g，4-氨基安替比林氨基安替比林1.5g，溶于，溶于800mL蒸馏水中，定容蒸馏水中，定容至至1L。置棕色瓶中保存。置棕色瓶中保存。 220mmol/L磷酸苯二钠溶液磷酸苯二钠溶液 先将先将500ml蒸馏水煮蒸馏水煮沸，迅速加入沸，迅速加入磷酸苯二钠磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含磷酸苯二钠如含2分分子结晶水，则应称取子结晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿，冷却后加氯仿2ml防腐，防腐，在在4冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中）冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中） 3显色液（铁氰化钾的硼酸溶液）显色液（铁氰化钾的硼酸溶液） 称取铁氰化钾称取铁氰化钾2.5g，硼酸，硼酸17g，

6、各自溶于蒸馏水，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混中，两液混合后，加蒸馏水至合后，加蒸馏水至1L，置棕色瓶中避光保存，置棕色瓶中避光保存(如出现如出现蓝绿色即弃去蓝绿色即弃去)。 4酚标准工作液（酚标准工作液（0.05mg/ml） 购买合格的二级标购买合格的二级标准品。准品。ALP 活力活力=（A测定测定A对照对照）（A标准标准A空白空白）X0.05X 100（kings单位）单位） 酚标准液开后不能久置。酚标准液开后不能久置。 底物液不能含有酚，若含酚则显底物液不能含有酚，若含酚则显红色红色，说明，说明磷酸苯二钠已分解，不宜使用。磷酸苯二钠已分解，不宜使用。 加入铁氰化钾后必须加入铁氰化钾后必须迅速混匀迅速混匀(为了改变为了改变PH来终止酶促反应），否则有影响，偏大。来终止酶促反应），否则有影响，偏大。 铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定最后所显色铁氰化钾溶液中加入硼酸有稳定最后所显色的作用。此液应避光保存，如出现的作用。此液应避光保存，如出现蓝绿色蓝绿色即即作废作废。1. 本次实验是用的什么方法？终止剂是什么？为什么加入铁氰化本次实验是用的什么方法？终止剂是什么？为什么加入铁氰化钾硼酸液