线粒体呼吸链

1、呼吸链的组成及作用机理呼吸链的组成及作用机理 (1) 烟酰胺脱氢酶类（烟酰胺脱氢酶类（nicotinamide dehydrogenases)(或称吡啶脱氢酶类，或称吡啶脱氢酶类，pyridine dehydrogenases) (2) 黄素酶类（黄素酶类（flavoprotein, flavinlinked dehydrogenase,） 或称或称NADH 脱氢酶（脱氢酶（NADH dehydrogenase)黄素单核苷酸（黄素单核苷酸（FMN)黄素腺嘌呤二核苷酸（黄素腺嘌呤二核苷酸（FAD)(3) 辅酶辅酶Q(coenzyme Q, CoQ)(泛醌泛醌 ubiquinone)(4) 细胞色

2、素类（细胞色素类（cytochromes)Cytb,Cytc,Cytc1,Cyta1a3人体重要的呼吸链人体重要的呼吸链 NADH 氧化呼吸链（由氧化呼吸链（由CoI、Flavoprotein、Iron-sulfur protein、CoQ、Cytochrome complex组成组成) 琥珀酸琥珀酸(succinate)氧化呼吸链（由氧化呼吸链（由Succinate dHE、CoQ及及Cyt复合物组复合物组成成两条重要的氧化呼吸链两条重要的氧化呼吸链电子载体以多酶复合物起作用电子载体以多酶复合物起作用呼吸链上的电子载体被组装为膜呼吸链上的电子载体被组装为膜包埋的超分子复合物，可以被分离包埋的

3、超分子复合物，可以被分离开来，线粒体内膜用去污剂温和处开来，线粒体内膜用去污剂温和处理，可以得到四个独立的电子载体理，可以得到四个独立的电子载体复合物，每个部分可以催化复合物，每个部分可以催化 电子通电子通过呼吸链的一部分转移。过呼吸链的一部分转移。呼吸链功能呼吸链功能复合物的分离复合物的分离复合物复合物I和和II催化电子由不同催化电子由不同的供体（的供体（NADH：复合物：复合物I；琥；琥珀酸：复合物珀酸：复合物II）转移到泛醌；）转移到泛醌；复合物复合物III把电子由泛醌传递给把电子由泛醌传递给Cyt C；复合物；复合物IV完成电子由完成电子由Cyt C到到O2的传递过程。的传递过程。线粒

4、体电子传递链蛋白质组成线粒体电子传递链蛋白质组成烟酰胺（吡啶）脱氢酶类烟酰胺（吡啶）脱氢酶类催化底物脱氢的一类酶，属脱氢酶类，催化底物脱氢的一类酶，属脱氢酶类，包括脱氢酶复合物，但它们的辅酶大多包括脱氢酶复合物，但它们的辅酶大多相同，主要有两种相同，主要有两种：1.NAD+（CoI）：）：Nicotinamide AdenineDinucleotide2.NADP+(CoII):Nicotinamide Adenine Dinucleotide Phosphate分子中起递氢作用的是烟酰胺，能反分子中起递氢作用的是烟酰胺，能反复氧化和还原，起到接受氢和提供氢的复氧化和还原，起到接受氢和提供氢的

5、作用而传递氢。作用而传递氢。脱氢酶脱掉底物分子上的两个氢原子，脱氢酶脱掉底物分子上的两个氢原子，其中之一以氢阴离子其中之一以氢阴离子(:H-)的形式转移到的形式转移到NAD+或或NADP+上形成上形成NADH或或NADPH，另一个则以另一个则以H+形式游离到溶液中，每一形式游离到溶液中，每一个个:H-携带两个电子，其中携带两个电子，其中1e使氢以原子使氢以原子形式结合到吡啶环的形式结合到吡啶环的C-4上，另上，另1e与吡啶与吡啶环上的环上的N结合，结合，N由由+5价变为价变为+3价。价。NAD(P)+的结构的结构还原的还原的Co I有有340nm光吸收光吸收NAD(P)H的氧化还原的氧化还原N

6、ADH+H+与与NADPH +H+NAD（P）H连接的脱氢酶连接的脱氢酶催化的一些重要反应催化的一些重要反应黄素酶类（黄素酶类（NADH脱氢酶）脱氢酶）这类酶是与黄素相关的脱氢酶或是黄素蛋白，这类酶是与黄素相关的脱氢酶或是黄素蛋白，因辅基中含核黄素而得名，线粒体中可能与一因辅基中含核黄素而得名，线粒体中可能与一种铁硫蛋白（种铁硫蛋白（Iron-sulfur protein，Fe-S）组成）组成复合体。复合体。种类多，酶蛋白不同，但辅基只有两种：种类多，酶蛋白不同，但辅基只有两种：黄素单核苷酸（黄素单核苷酸（Flavin Mononucleotide,FMN),是是NADH脱氢酶脱氢酶（FP1）

7、的辅基。）的辅基。黄素腺嘌呤二核苷酸（黄素腺嘌呤二核苷酸（Flavin Adenine Dinucleotide,FAD)是琥珀是琥珀酸脱氢酶（酸脱氢酶（FP2）的辅基。）的辅基。此类酶催化由此类酶催化由NADH或琥珀酸分子上脱氢，生或琥珀酸分子上脱氢，生成成FMNH2或或FADH2。FMN(FAD)的氧化还原的氧化还原铁铁-硫中心（硫中心（Iron-sulfur Centers,铁硫蛋白铁硫蛋白)最早由最早由Helmut Beinert发现，铁不出现发现，铁不出现在血红素中，而与无机硫原子和在血红素中，而与无机硫原子和/或蛋白质或蛋白质Cys残基的硫原子相连。铁硫中心（残基的硫原子相连。铁硫

8、中心（Fe-S）最简单的是单铁原子与最简单的是单铁原子与4个个Cys的的-SH相连，相连，更复杂的是有更复杂的是有2个或个或4个铁原子。个铁原子。Rieske铁铁硫蛋白则为硫蛋白则为1个铁原子与两个个铁原子与两个His残基相连。残基相连。所有的铁硫蛋白参与一个电子的转移，所有的铁硫蛋白参与一个电子的转移，其中的铁原子或被氧化、或被还原，线粒其中的铁原子或被氧化、或被还原，线粒体中至少有体中至少有8个铁硫蛋白参与电子传递。个铁硫蛋白参与电子传递。铁铁-硫中心硫中心（Iron-sulfur Centers)辅酶辅酶Q（Coenzyme Q，CoQ）又称泛醌又称泛醌(Ubiquinone)，脂溶性醌

9、类化合物，脂溶性醌类化合物，有一个长的异戊二烯侧链，因广泛存在得名。有一个长的异戊二烯侧链，因广泛存在得名。呼吸链中是参入到线粒体内膜的电子载体。呼吸链中是参入到线粒体内膜的电子载体。CoQ在呼吸链中接受黄素酶的在呼吸链中接受黄素酶的H，本身被，本身被还原为氢醌，再把还原为氢醌，再把H传递给传递给Cyt体系被氧化，体系被氧化，接受接受1e变为半醌自由基，接受变为半醌自由基，接受2e变为氢醌变为氢醌（QH2）。）。CoQ不仅接受不仅接受NADH脱氢酶的脱氢酶的H，还接受，还接受线粒体其他脱氢酶的线粒体其他脱氢酶的H，如琥珀酸脱氢酶，脂，如琥珀酸脱氢酶，脂酰酰CoA脱氢酶及其他黄素脱氢酶脱下的脱氢

10、酶及其他黄素脱氢酶脱下的H，在，在电子传递链中处于中心地位。电子传递链中处于中心地位。辅酶辅酶Q的氧化还原的氧化还原氧化型泛醌氧化型泛醌半醌自由基半醌自由基氢醌氢醌底物到辅酶底物到辅酶Q的电子流动的电子流动琥珀酸酯酰辅酶A酯酰辅酶A脱氢酶磷酸甘油磷酸甘油脱氢酶复合物复合物I：NADH到泛醌到泛醌也称也称NADH：泛醌氧化还原酶，是一个大：泛醌氧化还原酶，是一个大的酶复合物，由的酶复合物，由42条不同的多肽链组成，包括条不同的多肽链组成，包括含含FMN黄素蛋白和至少黄素蛋白和至少6个铁硫中心。高分辨个铁硫中心。高分辨率电子显微镜显示复合物率电子显微镜显示复合物I为为L形，形，L的一个臂的一个臂在

11、膜内，另一臂伸展到基质中。在膜内，另一臂伸展到基质中。复合物复合物I催化两个同时发生的偶联过程：催化两个同时发生的偶联过程：（1）NADH+H+QNAD+QH2（2）4个质子由基质转到内膜外个质子由基质转到内膜外因此，复合物因此，复合物I是由电子转移能所驱动的质子是由电子转移能所驱动的质子泵，结果内膜基质面变负，内膜外侧变正。泵，结果内膜基质面变负，内膜外侧变正。NADH：CoQ氧化还原酶氧化还原酶（复合物（复合物 I，NADH到泛醌）到泛醌）复合物复合物II：琥珀酸到泛醌：琥珀酸到泛醌也称琥珀酸脱氢酶，是也称琥珀酸脱氢酶，是TCA循环中唯循环中唯一的一个线粒体内膜结合的酶，虽比复一的一个线粒

12、体内膜结合的酶，虽比复合物合物I小而简单，但含有两类辅基和至少小而简单，但含有两类辅基和至少4种不同的蛋白，种不同的蛋白，1个蛋白与个蛋白与FAD及有及有4个个铁原子的铁原子的Fe-S中心共价结合；中心共价结合；1个铁硫蛋个铁硫蛋白。电子由琥珀酸流向白。电子由琥珀酸流向FAD，然后通过，然后通过Fe-S中心到泛醌。中心到泛醌。呼吸链上还有其他底物的电子流经呼吸链上还有其他底物的电子流经Q，但不经过复合物但不经过复合物II，如脂酰，如脂酰CoA脱氢酶、脱氢酶、3-磷酸甘油脱氢酶等（见图）。磷酸甘油脱氢酶等（见图）。琥珀酸脱氢酶（琥珀琥珀酸脱氢酶（琥珀酸到泛醌：复合物酸到泛醌：复合物II）复合物复

13、合物III：泛醌到细胞色素：泛醌到细胞色素c又称细胞色素又称细胞色素bc1复合物或泛醌：复合物或泛醌：细胞细胞色素色素c氧化还原酶氧化还原酶。偶联催化电子由氢醌偶联催化电子由氢醌到到Cyt c的转移和质子由膜内基质向膜外的转移和质子由膜内基质向膜外空间的运输。空间的运输。 复合物复合物III和和IV结构的确定（结构的确定（1995-1998，X-射线晶体学）是线粒体电子转射线晶体学）是线粒体电子转移研究的里程碑。复合物移研究的里程碑。复合物III是一个由相是一个由相同单体组成的二聚体，每个单体含有同单体组成的二聚体，每个单体含有11个不同的亚基。个不同的亚基。泛醌到泛醌到CytC：复合物：复合

14、物III（Cyt bc1复合物或泛醌：复合物或泛醌：CytC氧化还原酶）氧化还原酶）单体单体二聚体功能单位二聚体功能单位Q循环（循环（The Q Cycle)根据复合物根据复合物III的结构和氧化还原反的结构和氧化还原反应详细的生物化学研究，提出了电子经应详细的生物化学研究，提出了电子经复合物的流动模型，复合物的流动模型，Q循环的反应为：循环的反应为：QH2+2cyt c1（氧化型）（氧化型）+2HN+Q+2cyt c1(还原型）还原型）+4Hp+膜的膜的P侧，侧，2QH2被氧化为被氧化为Q，释放释放4H+到内膜外空间，每个到内膜外空间，每个QH2提供提供1e到到cyt c1（通过（通过Fe-

15、S中中心），另心），另1e到到Q分子（通过分子（通过cyt b），两步还原成），两步还原成QH2，还原反，还原反应还从基质中利用掉应还从基质中利用掉2H+。转移。转移的净效应很简单：的净效应很简单：QH2被氧化成被氧化成Q，2cyt c被还原。被还原。Q 循环循环细胞色素还原酶与电子传递细胞色素还原酶与电子传递复合物复合物IV：细胞色素：细胞色素C到到O2又称细胞色素氧化酶，呼吸链的最后又称细胞色素氧化酶，呼吸链的最后一步，把一步，把cyt c的电子转移给的电子转移给O2还原生成还原生成H2O。是一个大酶（线粒体内膜上，是一个大酶（线粒体内膜上，13个亚个亚基，基，Mr204000），作用同样

16、是电子传递），作用同样是电子传递和质子泵。三个亚基对于功能至关重要。和质子泵。三个亚基对于功能至关重要。亚基亚基II有有2个个Cu离子（离子（CuA）（与）（与Cys残残基的基的-SH相连，亚基相连，亚基II有有2个血红素基团个血红素基团（分别为（分别为a1、a3）和另一个）和另一个Cu离子离子CuB）。）。电子传递为：电子传递为：cyt c-CuA-a-a3-CuB-O2，每，每4e通过复合物时，酶通过复合物时，酶从基质中消耗从基质中消耗4个个“底物底物”H+，生成生成2H2O，每通过，每通过1e，利用氧，利用氧化还原反应的能量泵出化还原反应的能量泵出1H+到内到内膜外空间。膜外空间。细胞色

17、素氧化酶（复合物细胞色素氧化酶（复合物 IV）复合物复合物 IV的电子流向的电子流向QH2-Cytc还原酶还原酶细胞色素细胞色素细胞色素还原酶细胞色素还原酶 细胞色素还原酶模型细胞色素还原酶模型呼吸链四个复合物的呼吸链四个复合物的电子和质子流动总图电子和质子流动总图决定电子载体顺序的方法决定电子载体顺序的方法鱼藤酮抗霉素A电子传递与质子梯度及电子传递与质子梯度及ATP合成合成呼吸链中呼吸链中ATP的产生的产生穿梭系统（穿梭系统（Shuttle Systems)有些有些NADH是在胞液中产生的，而呼是在胞液中产生的，而呼吸链位于线粒体的内膜上，线粒体的内吸链位于线粒体的内膜上，线粒体的内膜对膜对

18、NADH不能透过，必须通过一定的不能透过，必须通过一定的转运机制才能保证底物分子脱下的转运机制才能保证底物分子脱下的H可可以通过呼吸链递氢和递电子被彻底氧化，以通过呼吸链递氢和递电子被彻底氧化，释放能量。这种转运机制即为穿梭系统，释放能量。这种转运机制即为穿梭系统，经过穿梭系统把胞液中的经过穿梭系统把胞液中的NADH转变为转变为线粒体内的线粒体内的NADH经呼吸链被氧化。包经呼吸链被氧化。包括磷酸甘油穿梭、苹果酸括磷酸甘油穿梭、苹果酸-草酰乙酸穿梭。草酰乙酸穿梭。穿梭系统穿梭系统(Shuttle System)磷酸甘油穿梭磷酸甘油穿梭(phosphoglycerol shuttle)磷酸甘油穿

19、梭磷酸甘油穿梭糖酵解磷酸甘油磷酸二羟丙酮穿梭系统穿梭系统(Shuttle System)苹果酸苹果酸-草酰乙酸穿梭草酰乙酸穿梭（Malate-oxaloacetate shuttle)苹果酸苹果酸-草酰乙酸穿梭草酰乙酸穿梭酮戊二酸苹果酸苹果酸脱氢酶草酰乙酸天冬氨酸转氨酶天冬氨酸天冬氨酸谷氨酸苹果酸酮戊二酸草酰乙酸谷氨酸天冬氨酸天冬氨酸苹果酸脱氢酶酮戊二酸苹果酸载体天冬氨酸谷氨酸载体胞浆线粒体腺苷酸和磷酸转位酶腺苷酸和磷酸转位酶线粒体利用质子推动力合成线粒体利用质子推动力合成ATP，但，但ADP和和Pi必须运到线粒体内，合成好的必须运到线粒体内，合成好的ATP必须能运出线粒体在胞质中供能。必须能

20、运出线粒体在胞质中供能。腺苷酸转位酶腺苷酸转位酶(Adenine nucleotide translocase)是内膜上的酶，为逆反转运是内膜上的酶，为逆反转运体，可以把体，可以把ADP和和Pi转运到线粒体内，转运到线粒体内，也能把合成的也能把合成的ATP从线粒体运到胞液。从线粒体运到胞液。腺苷酸和磷酸转位酶腺苷酸和磷酸转位酶高能磷酸键的形成高能磷酸键的形成生物氧化所释放的能量并不是全生物氧化所释放的能量并不是全以热量的形式散发，除一部分以热以热量的形式散发，除一部分以热能形式用于维持体温外，其余部分能形式用于维持体温外，其余部分则以高能磷酸键的形式转移和储存，则以高能磷酸键的形式转移和储存，

21、一旦需要再水解释放以免浪费。一旦需要再水解释放以免浪费。异养生物体高能磷酸键的异养生物体高能磷酸键的形成方式有两种：形成方式有两种：1.底物水平（底物）磷酸化、底物水平（底物）磷酸化、2.电子传递水平（氧化）磷酸化。电子传递水平（氧化）磷酸化。底物水平磷酸化底物水平磷酸化 （Substrate Level Phosphorylation)代谢物质分解过程中，底物分子代谢物质分解过程中，底物分子因脱氢、脱水等作用，能量在分子因脱氢、脱水等作用，能量在分子内部重排（重新分布）形成高能磷内部重排（重新分布）形成高能磷酸酯键，并转移给酸酯键，并转移给ADP形成形成ATP。高能磷酸键的形成及转移高能磷酸

22、键的形成及转移底物水平磷酸化底物水平磷酸化(Substrate level phosphorylation)氧化磷酸化氧化磷酸化（Oxidative Phosphorylation)生物氧化过程中，代谢物脱下的氢经生物氧化过程中，代谢物脱下的氢经呼吸链氧化为水时所释放的能量转移给呼吸链氧化为水时所释放的能量转移给ADP形成形成ATP的过程。实际上是氧化作的过程。实际上是氧化作用与氧化作用过程释放的能量用于形成用与氧化作用过程释放的能量用于形成ATP过程（磷酸化作用）两种作用的偶过程（磷酸化作用）两种作用的偶联反应。联反应。高能磷酸键的形成及转移高能磷酸键的形成及转移氧化磷酸化氧化磷酸化（Cou

23、pled oxidative phosphorylation)氧化磷酸化偶联的部位氧化磷酸化偶联的部位磷氧比（磷氧比（P/O）代谢物脱下的氢经呼吸链氧化生成水，一对代谢物脱下的氢经呼吸链氧化生成水，一对电子经呼吸链传递到电子经呼吸链传递到O2生成水所产生的生成水所产生的ATP分分子的数目（即消耗子的数目（即消耗1分子分子O2所产生所产生ATP的数目）的数目）称为磷氧比（称为磷氧比（P/O）。）。代谢物脱下的代谢物脱下的2H经经NADH氧化呼吸链被氧化为水时，氧化呼吸链被氧化为水时，生成生成3ATP（P/O 3），），经琥珀酸氧化呼吸链氧化为水时，经琥珀酸氧化呼吸链氧化为水时，生成生成2ATP（

24、P/O 2）。）。新近的研究结果支持这样的结论，新近的研究结果支持这样的结论， 2H经经NADH氧化呼吸链氧化呼吸链被氧化为水被氧化为水时，生成时，生成2.5ATP；经经琥珀酸氧化呼吸链琥珀酸氧化呼吸链氧化为水时，氧化为水时，生成生成1.5ATP 。影响氧化磷酸化作用的因素影响氧化磷酸化作用的因素（1）ADP-Pi、ATP的调节作用的调节作用 ADP/ATP 小，缓慢、表现为抑制作用小，缓慢、表现为抑制作用 ADP/ATP 大，加快、表现为促进作用大，加快、表现为促进作用（2）激素的调节作用）激素的调节作用 甲状腺素甲状腺素能活化能活化Na+、K+-ATPase, 加加快快 ATP分解为分解为ADP+Pi, ADP进入线粒体进入线粒体的数量增加，氧化磷酸化加快，耗氧及的数量增加，氧化磷酸化加快，耗氧及产热增多产热增多甲状腺机能亢进甲状腺机能亢进（hyperthyroidism)，患者，患者BMR(基础代谢率基础代谢率basal metaboli