分子生物学实验室常用试剂的配制

1、.常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺( Spermidine) :溶解2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于 -20。1mol/L 精胺( Spermine)：溶解3.48g 精胺于足量的水中，使终体积为 10ml。分装成小份贮存于 -20。10mol/L 乙酸胺( ammonium acetate)：将 77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水 定容至 1L 后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。10mg/ml 牛血清蛋白 (BSA)：加 100mg的牛血清蛋白(组分 V 或分子生物学试剂级，无 DNA酶)于9.5ml 水中(为减少变性，须将蛋白加入水中，而不是将

2、水加入蛋白)，盖 好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容 到 10ml，然后分装成小份贮存于 -20 。1mol/L 二硫苏糖醇( DTT)：在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加32.4ml 水，分成小份贮存于 -20。或转移 100mg 的二硫苏糖醇至微量离心 管，加0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液。8mol/L 乙酸钾( potassiumacetate)：溶解78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到 100ml。1mol/L 氯化钾( KC)l ：溶解7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到 100ml。3mol/L 乙酸钠( sodi

3、umacetate)：溶解40.8g的三水乙酸钠于约 90ml 水中，用冰乙酸调溶液的 pH至5.2，再加水定容到 100ml。0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的 Na2EDTA和 NaOH溶液(0.5mol/L )，混合后形成 EDTA的三钠盐。或称取186.1g的 Na2EDTA·2H2O和 20g的 NaOH，并溶于水中，定容至 1L。1mol/LHEPES：将 23.8gHEPES溶于约 90ml 的水中，用 NaOH 调 pH(6.8-8.2)，然后用水定容至 100ml。1mol/L HCl：加 8.6ml 的浓盐酸至91.4ml 的水中。25mg/mlIPGT：溶

4、解 250mg的IPGT(异丙基硫代 -D-半乳糖苷)于 10ml 水中，分成小份 贮存于 -20。1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl26H·2O 于足量的水中，定容到 100ml。100mmol/LPMSF：溶解 174mg的 PMSF（苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到 10ml。 分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 -20。20mg/ml 蛋白酶 K（ proteinase K）：将 200mg 的蛋白酶 L 加入到9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶 K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到 10ml，然后分装成小份贮存于 -20 。10mg/mlRnas

5、e（无 DNase）（ DNasefreeRNase）：溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中（ pH5.0）。溶解后于水浴中煮沸 15min，使 DNA酶失活。用 1mol/L 的 TrisHCl调 pH 至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套）5mol/L 氯化钠（ NaCl）：溶解29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至 100ml。10N 氢氧化钠（ NaOH）：溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约0.9L水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至 1L。10SDS（十二烷基硫酸钠）：称取 100gSDS慢慢转移到约含0.

6、9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L。2mol/L 山梨（糖）醇（ Sorbitol）：溶解36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml。100三氯乙酸（ TCA） :在装有 500gTCA的试剂瓶中加入 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶 解。（稀释液应在临用前配制）2.5Xgal（5-溴-4-氯-3-吲哚 -半乳糖苷）：溶解 25mg的 Xgal于1ml 的二甲基甲酰胺（ DMF）,用铝箔包裹装液管， 贮存于 -20。100 × Denhard试t 剂（ Denhardt's regent）成分及终浓度配制 100ml 溶液各

7、成分的用量2%聚蔗糖（ Ficoll，400 型）2g2%聚乙烯吡咯烷酮（ PVP-40）2g2%BSA（组分 V）2g水加水至总体积为 100ml依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于 20贮存。10×标准 DNA 连接酶缓冲液（ standardDNAligasebuffer）（粘端、平端连 接）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量0.5mol/L Tris-HCl5ml 1mol/L 贮液100mmol/L MgCl21ml 1mol/L 贮液100mmol/L DTT1ml 1mol/L 贮液2mmol/L ATP200ul 100 mmol/

8、L 贮液5mmol/L 盐酸亚精胺（可选） 50ul 1 mmol/L 贮液0.5mg/ml BSA（组分 V）（可选）0.5ml 10 mg/mL 贮液水 2.25ml将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于 -20。100 mmol/L dNTP溶液（ dNTP solutions）可以购买到 100mmol/L 纯 dNTPs贮液， -80可贮存至少 6个月。10mmol/L dNTP 混合液成分及终浓度配制 20ul 溶液各成分的用量10mmol/L dATP2ul 100 mmol/L dATP贮液10mmol/L dCTP2ul 100 mmol/L dCTP贮液10mmol/L dGT

9、P2ul 100 mmol/L dGTP贮液10mmol/L dTTP2ul 100 mmol/L dTTP贮液水 12ul20 PEG 8000/2.5M NaCl成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分的用量质量浓度为 20聚乙二醇2.5mol/L 氯化钠水 20g50ml 5 mol/L 氯化钠或14.6g 固体氯化钠补足 100ml加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积 100ml，用磁力搅拌器搅 拌溶解。20× SSC成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量300mmol/L 柠檬酸三钠（二水）88.2g3mol/L 氯化钠175.3g水补足 1L溶解柠檬酸三钠（二水）

10、和氯化钠于约0.9L水中，加几滴 10N NaOH溶液调 pH为7.0，用水补足体积至 1L。DEPC（焦碳酸二乙酯）处理水加 100ul DEPC于 100ml 水中，使 DEPC的体积分数为0.1。在 37温浴至少 12h，然后在 15psi 条件下高压灭菌 20min，以使残 余的 DEPC失活。 DEPC会与胺起反应，不可用 DEPC处理 Tris缓冲液。甲酰胺（ deionized formamide）直接购买或加 DowexXG8混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅 拌器轻轻搅拌 1h，可去除甲酰胺中的离子。经 Whatman 1 号滤纸过滤除去树脂 后分成小份，充氮气于 -

11、80贮存（防止氧化）。磷酸缓冲液（ phosphate buffer）按照下表所给定的体积，混合 1mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和 1mol/L 磷酸 氢二钠（双碱）贮液，获得所需 pH的磷酸缓冲液。配制 1mol/L 的磷酸二氢钠 （NaH2PO·4H2O）贮液：溶解 138g于足量水中，使终体积为 1L;1mol/L 磷酸氢二钠（ Na2HPO4）贮 液:溶解 142g 于足量水中使终体积为 1L。1mol/L 磷酸二氢钠（ ml）1mol/L 磷酸氢二钠（ ml）最终 pH 值8778508157757356856255655104503903302801231501852

12、2526531537543549055061067020 / 207206.06.16.26.36.46.56.66.76.86.97.07.17.2TE（用于悬浮和贮存 DNA） 成分及终浓度配制 100ml 溶液各成分的用量10mmol/L Tris HCl1mmol/L EDTA水 1ml 1mol/L Tris-HCl（ pH7.4-8.0，25）200ul0.5 mol/L EDTA( pH 8.0）98.8mlTris缓冲液（ Tris-HCl buffer）将 121g 的 Tris 碱溶解于约0.9L 水中，再根据所要求的 pH（25下）加一定量的浓盐酸（11.6N），用水调整

13、终体积至 1L。浓盐酸的体积（ ml）8.6142128.53846566671.376二.电泳缓冲液、染料和凝胶加样液电泳缓冲液50× Tris乙- 酸（ TAE）缓冲液成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量2mol/L Tris 碱1mol/L 乙酸100 mmol/L EDTA水 5× Tris硼- 酸（ TBE）缓冲液 成分及终浓度配制 1L 溶液各成分的用量445 mmol/L Tris 碱445 mmol/L 硼酸盐10 mmol/L EDTA水 pH9.08.88.68.48.28.07.87.67.47.2242g57.1 ml 的冰乙酸(17.4 mol

14、/L) 200ml 的0.5 mol/L EDTA( pH8.0)补足 1L54g27.5g 硼酸20 ml 的0.5 mol/L EDTA( pH8.0)补足 1L染料1溴酚蓝( bromophenol blue )加 1g 水溶性钠型溴酚蓝于 100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。1二甲苯青 FF(xylene cyanole FF)溶解 1g 二甲苯青 FF于足量水中，定容到 100ml。10mg/ml 的溴化乙锭( ethidium bromide )小心称取 1g溴化乙锭，转移到广口瓶中，加 100ml 水，用磁力搅拌器搅拌 直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于 4贮存。凝胶上

15、样液( gel loading solutions)6×碱性凝胶上样液(室温贮存)成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.3 N 氢氧化钠6 mmol/L EDTA18聚蔗糖（ 400 型）0.15溴甲酚绿0.25二甲苯青 FF水 300ul 10N 氢氧化钠120ul0.5mol/L EDTA（pH8.0）1.8g15mg25mg补足到 10ml6×聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA15聚蔗糖（ 400 型）1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul0.

16、5mol/L EDTA（pH8.0）1.5g 水补足到 10ml6×溴酚蓝/二甲苯青 /聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.25溴酚蓝0.25二甲苯青 FF15聚蔗糖（ 400型）水 2.5ml 1溴酚蓝2.5ml 1二甲苯青 FF1.5g补足到 10ml6×甘油凝胶上样液（ 4贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA50甘油水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul0.5mol/L EDTA（pH8.0）3ml3.9ml6×蔗糖凝胶上样

17、液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量0.15溴酚蓝0.15二甲苯青 FF5 mmol/L EDTA40聚蔗糖水 1.5ml 1溴酚蓝1.5ml 1二甲苯青 FF100ul0.5mol/L EDTA（pH8.0）4g补足到 10ml10×十二烷基硫酸钠 / 甘油凝胶上样液（室温贮存）成分及终浓度配制 10ml 溶液各成分用量 0.2溴酚蓝0.2二甲苯青 FF200 mmol/L EDTA0.1SDS50甘油水 20mg20mg4ml0.5mol/L EDTA(pH8.0)100ul 10SDS5ml 补足到 10ml 三.常用培养基LB培养基 将下列组分溶解在 0.

18、9L水中： 蛋白胨酵母提取物氯化钠 10g5g10g 如果需要用 1NNaOH(1ml)调整 pH 至7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。SOB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨 5g1 mol/L 氯化钾 20g 氯化钠2.5ml酵母提取物0.5g用水补足体积到 1L。分成 100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温 后，再在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1mol/L 氯化镁。 SOC培养基成分、方法同 SOB培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每 100ml 的小份中加 1ml 灭过菌的 1

19、mol/L 氯化镁外，再加 2ml 灭菌的 1mol/L 葡萄 糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到 100ml，用0.22um 的滤膜过滤除菌）。TB培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨酵母提取物甘油12g24g4ml各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60，再加 100ml 灭菌的 170mmol/LKH2PO4/0.72mol/LK2HPO4的溶液（2.31g的 KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为 100ml。高压灭菌或用0.22um 的滤膜过滤除菌）。2× YT培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨酵母提取物氯化钠16g10g4ml如

20、果需要用 1NNaOH（1ml）调整 pH 至7.0，再补足水至 1L。注：琼脂平板需添加琼脂粉 12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉 7g/L。YPD培养基将下列组分溶解在0.9L水中：蛋白胨酵母提取物葡萄糖20g10g20g用水补足体积为 1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺 陷型每升培养基添加1.6g 色氨酸，因为 YPD培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需 要在高压灭菌前加入 20g 琼脂粉。四.常用抗生素氨苄青霉素( ampicillin)( 100mg/ml)溶解 1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于 - 20贮存。常以 25ug/ml 50ug/ml 的终浓度添加于生长培养基。羧苄青霉素( carbenicillin)( 50mg/ml )溶解0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至 10ml。分装成小份于 - 20贮存。常以 25ug/ml 50ug/ml 的终浓度添加于生长