细胞培养操作规范课件

1、细胞培养操作细胞培养操作(cozu)规范规范第一页，共二十八页。第二页，共二十八页。第三页，共二十八页。2第四页，共二十八页。第五页，共二十八页。第六页，共二十八页。第七页，共二十八页。第八页，共二十八页。第九页，共二十八页。第十页，共二十八页。第十一页，共二十八页。第十二页，共二十八页。第十三页，共二十八页。第十四页，共二十八页。第十五页，共二十八页。第十六页，共二十八页。第十七页，共二十八页。第十八页，共二十八页。第十九页，共二十八页。第二十页，共二十八页。第二十一页，共二十八页。细胞消化时间细胞消化时间(shjin)的控制：的控制：第二十二页，共二十八页。n4:细胞冻存： 吸出旧培养液加

2、PBS冲洗两次胰酶消化加培养基中止消化，（以上步骤同细胞传代）细胞计数离心收集细胞，吸弃上清，加入冻存液调整细胞密度(md)至1106个/ml将细胞移入冻存管，写好标签（细胞种类，冻存时间）4 第二十三页，共二十八页。5:细胞(xbo)计数细胞计数细胞计数(j sh)板计数板计数(j sh)室构造室构造数红色边框标记的四个方格内的细胞(xbo)总数（如有压线则计上不计下，计左不计右）细胞数/ml=（4个大方格细胞总数/4）104稀释倍数第二十四页，共二十八页。四、细胞培养注意事项 1. 实验进行前，无菌室及无菌操作台(laminar flow) 以紫外灯照射20-30分钟灭菌，以75 %酒精

3、擦拭无菌操作(cozu)抬面，并开启无菌操作(cozu)台风扇运转10 分钟后，才开始实验操作。每次操作只处理一株细胞株，且即使培养基相同亦不共享培养基，以避免失误混淆或细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，以75 %酒精擦拭无菌操作抬面。操作间隔应让无菌操作台运转10 分钟以上后，再进行下一个细胞株之操作 第二十五页，共二十八页。n2. 无菌操作工作区域应保持清洁及宽敞，必要物品，例如试管架、吸管吸取器或吸管盒等可以暂时放置，其它实验(shyn)用品用完即应移出，以利于气流之流通。容器、培养瓶、培养板和培养皿实验(shyn)用品以75 % 酒精 擦拭外部后才带入无菌操作台内。实验操实

4、验操作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非作应在台面之中央无菌区域，勿在边缘之非无菌区域操作。切记开启鼓风。无菌区域操作。切记开启鼓风。n3、 小心取用无菌之实验物品，避免造成污染。勿碰触吸管尖头部或是容器瓶口，亦不要在打开之容器正上方操作实验。容器打开后，以手夹住瓶盖并握住瓶身，倾斜约45 角取用，尽量勿将瓶盖盖口朝下放置桌面。 第二十六页，共二十八页。n4.一次将所有的所需要试剂、工具放入工作(gngzu)台。不要半路走出工作(gngzu)间拿东西，传递东西进工作(gngzu)室需酒精擦拭灭菌 第二十七页，共二十八页。细胞培养操作规范内容(nirng)总结细胞培养操作规范。 箱内蒸馏水槽中定期更换灭菌蒸馏水3000毫升，以保持箱内湿度。将吸管、废液缸放入工作台开启细胞培养房及工作台紫外消毒20分钟，。加入2ml消化(xiohu)液晃动培养瓶使消化(xiohu)液覆盖整个细胞界面后吸弃培养液。吸出旧培养液加PBS冲洗两次胰酶消化(xiohu)加培养基中止消化(xiohu)