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文档简介

1、精品文档1. 目的 : 医院是病原微生物较集中 , 抵抗力低的人群密集的地方 , 加之化疗、放疗等手段的采用,影响病人免疫机能下降,大量使用抗生素,引起耐药菌株增多,菌群失调,以及先进医疗仪器广泛应用等原因, 增加消毒灭菌的难度, 致使院内感染已成为当前医疗实践的严重障碍, 直接影响医疗效果。进一步规范院内感染监测标本的程序,更好、更快检测病原微生物的生长情况,预防医院感染的发生。2. 设备、试剂与材料2.1VITEK 2 compact 鉴定药敏分析系统2.2VITEK 32 鉴定药敏分析系统2.3美国 FORMA级生物安全柜2.4显微镜2.5酒精灯2.6接种环2.7恒温培养箱2.8各种培养

2、基2.9革兰氏染色液2.10触酶试剂2.11氧化酶试剂2.12移液器2.13无菌吸嘴3. 院感标本采集3 1 空气的采样3 1 1 采样时间选择消毒处理后与进行医疗活动之前期间采样。3 1 2 采样高度与地面垂直高度80-150CM。3 1 3 布点方法室内面积 30m2,设一条对角线上取三点,即中心一点,两端各距墙1m2处各取一点;室内面积30m,设东、西、南、北、中5 点,其中东、西、南、北点均距墙1m。3 1 4 采样方法用 9cm 直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5min 后送检。3 2 物体表面采样3 2 1 采样时间选择消毒处理后4 小时内进行采样。3 2 2 采样面积222被采表

3、面 100cm ,取全部表面;被采表面100cm,则取100cm。3 2 3 采样方法用 5× 5 cm2 的标准来灭菌规格板,放在被检物体表面,用无菌规格板,放在被检物体表面, 用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子1 支,在规格板内横竖往返各涂抹5 次,并随之转动棉拭子,连续采样1-4 个规格板面积,剪支手接触部位,将棉拭子放入装10ml 采样液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体的方法采样。3 3 医护人员手采样.精品文档3 3 1 采样时间在接触病人、从事医疗活动前进行采样。332 采样面积及方法被检人五指并拢,将浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子一枝在双2手指曲面从

4、指跟到指端来回涂擦各两次(一只手涂擦面积 30 cm),并随之转动采样棉拭子,剪去手接触部位, 将棉拭子放入装有 10ml 采样液的试管内送检。 采样面积按平方厘米 ( cm2)计算。3 4 医疗用品采样3 4 1 采样时间在消毒或灭菌处理后,存放有效期内采样。342 采样方法右用破坏性方法取样的医疗用品,如输液(血)器、 注射器和注射针等,取其中的一部分放培养液中培养。对不能用破坏性方法取样的特殊医疗用品,可用浸有无菌生理盐水采样液的棉拭子在被检物体表面涂抹采样,被采表面100cm2,取全部表面;被采22表面 100cm,取 100cm。3 5 使用中消毒剂的采集3 5 1 采样时间采取使用

5、中的消毒剂。3 5 2 采样方法在无菌条件下,用无菌注射器抽取1ml 被检样品,加入10ml 稀释液混匀。(对于醇类与酚类消毒剂稀释液用灭菌生长盐水;对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂,需在灭菌生理盐水中加入0.1%硫代硫酸钠;对于洗必泰、季铵盐类消毒剂,需在灭菌生理盐水中加入3%( w/v)吐温 80 和 0.3%卵磷脂;对于醛类消毒剂,需在灭菌生理盐水中加入0.3%甘氨酸;对于含有表面活性剂的各种消毒剂,需在灭菌生理盐水中加入3%( w/v )吐温 80,以中和被检样液的残效作用。)3 6 内镜的采样3 6 1 咽喉镜、支纤镜用 10ml 戊二醛中和液冲洗内镜后,送检实验室。3 6

6、 2 胃镜、消化镜、宫腔镜用 10ml0.1%硫代硫酸钠中和液冲洗内镜后,送检实验室。3 6 3 鼻咽镜、过氧化氢消毒的腔镜类用 10ml 生理盐水中和液冲洗内镜后,送检实验室。3 7 透析液的采样用灭菌的空试管取透析液10ml 送检。4. 院感标本的运送及交接签收4 1 标本的采集4 11 空气标本的采集由临床科室负责完成,标本采集完毕,由临床各科在规定的时间内将标本安全送回实验室。4 12 物体表面、医务人员手、消毒剂、内镜等由院感科负责组织采样,在规定时间内将标本安全送达实验室。4 2 采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测,送检时间不得超过6 小时,若样品保存于 0-4 条件时,送检时

7、间不得超过24 小时。4 3 标本收回实验室后, 将标本的信息登记在“院感监测登记本”上。4 4 微生物室工作人员的验收根据微生物室院感标本拒收标准进行检查,对不符合要求.精品文档的,将拒收,立即退回给送检人员,指出问题,告知标本重取,所有拒收标本均需在标本拒收记录本上登记。拒收情况如下:4 4 1 空气培养平板数目击者不正确(房间小于30 平方米做3 个平板培养,房间大于30平方米做5 个平板培养) 。4 4 2 未注明标本采集科别、来源和培养目的。4 4 3 标本明显受污染。5.检测步骤见本文件末面流程图5 1 空气标本的检测511 细菌室收到标本后,将标本编写当日日期,用平板压住验单,直

8、接放入35培养箱培养 48 小时后,观察结果。5 12 有菌生长,则挑取可疑菌落进行鉴定,排除金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出。5 1 3 结果计算及菌落换算空气细菌菌落总数(cfu/m 3) =50000N/AT,式中A平板面积, cm2;T平板暴露时间,min;N平均菌落数,cfu/ 平皿。即平皿上1 个菌落等于空气中菌落数为157 cfu/m 3 ,如果标本为3 个点时换算 =平皿上的菌落数×157÷点数。5 2 物体表面样本检测5 2 1 细菌室收到标本后,将标本编号,振摇80 次后,吸500ul 于普通琼脂平板中,把平板摇均匀,放入35培

9、养箱培养48 小时后,观察结果。5 22 有菌生长,则挑取可疑菌落进行鉴定,排除金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出,如为儿科、爱婴区、新生儿科、儿科ICU 的标本时,还要排除沙门氏菌的检出。523 结果计算及菌落换算物体表面细菌菌落总数( cfu/c2m)=平皿上菌落数×采样液稀释倍数 ( A)/ 采样面积 (cm2)。采样液稀释倍数即是采集液总量与接种的采集液量之比值,即平皿上 1 个菌落等到于物体表面上菌落数为0.2cfu/cm 2。5 3 医护人员手样本检测5 3 1 将标本编号,振摇80 次后,吸 500ul于普通琼脂平板中,如为儿科、爱婴区、新生儿科

10、、儿科ICU 的标本时,加做一个HE平板,以监测沙门氏菌的检出。把平板摇均匀,放入 35培养箱培养48 小时后,观察结果。5 32 有菌生长,则挑取可疑菌落进行鉴定,排除金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出。533 结果计算及菌落换算手细菌菌落总数(cfu/cm2)=平皿上菌落数×采样液稀释倍数( A) /30 × 2( cm2),即平皿上1 个菌落等到于物体表面上菌落数为0.33cfu/cm2。5 4 灭菌或一次性医疗用品样本检测541 样本采集完成后,接种于肉汤培养基,置35培养箱培养7 天,每天观察一次,培养基有混浊则转种普通平板继续培养,观察最

11、后结果。.精品文档5 4 2 有菌生长,则挑取可疑菌落进行鉴定,结果报告是否检出细菌。5 5 使用中消毒剂5 5 1 细菌室收到标本后,将标本编号,振摇80 次后,吸500ul 于普通琼脂平板中,如为儿科、爱婴区、新生儿科、儿科ICU的标本时,加做一个HE平板,以监测沙门氏菌的检出。把平板摇均匀,放入35培养箱培养48 小时后,观察结果。另接种于1 个沙保劳培养基,置28培养箱培养7 天,每天观察一次,观察最后结果。5 5 2 有菌生长,则挑取可疑菌落进行鉴定,结果报告是否检出细菌及真菌。5 5 3 结果计算及菌落换算使用中消毒剂细菌菌落总数(cfu/ ml) =平皿上菌落平均数×采

12、样液稀释倍数 ( A)/ 采样体积( 1ml),即平皿上1 个菌落等于消毒剂中菌落数为10 cfu/ml。5 6 灭菌效果监测561 压力蒸汽灭菌效果监测采用嗜热脂肪芽胞杆菌菌片,放于溴甲酚紫蛋白胨水指示剂中,标本送检后,把里面的玻璃压碎,置于56培养箱培养48 小时,如指示剂颜色为紫色,说明无嗜热脂肪芽胞杆菌生长;如指示剂颜色为黄色则说明有嗜热脂肪芽胞杆菌生长。5 62 气体灭菌效果监测采用枯草芽胞杆菌菌片,放于溴甲酚紫蛋白胨水指示剂中,标本送检后, 置于 35培养箱培养48 小时,如指示剂颜色为紫色,说明无枯草芽胞杆菌生长;如指示剂颜色为黄色则说明有芽枯草胞杆菌生长。5 7 内镜标本检测5

13、 7 1 将标本编号,用旋涡器充分震荡(振摇80 次),取 0.5ml ,加入直径9CM的普通琼脂平板上,把平板摇均匀,放入35培养箱培养48 小时后计数,观察结果。5 72 有菌生长,则挑取可疑菌落进行鉴定,排除金黄色葡萄球菌、溶血链球菌、铜绿假单胞菌等致病微生物的检出。5 7 3 结果计算及菌落换算细菌菌落数 / 镜 =平皿菌落数× 205 8 透析液样本检测581 将标本编号, 振摇 80 次后,吸 200ul 于普通琼脂平板中,反平板摇均匀, 放入 35培养箱培养48 小时,观察结果。5 8 2 有菌生长,则挑取可疑菌落进行鉴定,排除金黄色葡萄球菌,、溶血链球菌、铜绿假单胞菌

14、等致病微生物的检出。5 8 3 结果计算:透析液细菌菌落总数=平皿菌落数×56. 质量控制6 1 做好培养基及样本采集液的质量控制,确保其无菌以及适宜于细菌的生长。6 2 标本采集严格按照采集要求进行。6 3 做好培养箱的温度控制。7. 各类环境空气、物体表面、医护人员手细菌菌落总数卫生标准,见下表标准.精品文档类别范围空气物体表面医护人员手cfu/m 3cfu/cm 2cfu/cm 2类层流洁净手术室、层流洁净病房 10 5 5类普通病房、产房、婴儿室、早产儿 200 5 5室、普通保护性隔离室、供应室无菌室、烧伤病房、重症监护病房类儿科病房、 妇产科检查室、 注射室、 500 1

15、0 10换药室、治疗室、供应室清洁室、急诊室、化验室、各类普通病房和房间类传染病科及病房- 15 1572 致病性微生物不得检出金黄色葡萄球菌,、溶血链球菌及其他致病性微生物。在可疑污染情况下进行相应指标的检测,母婴同室、早产儿室、婴儿室、新生儿及儿科病房的物体表面和医护人员手上,不得检出沙门氏菌。7 3 医疗用品卫生标准7 3 1 进入人体无菌组织、器官或接触破损皮肤、粘膜的医疗用品必须无菌。732 接触粘膜的医疗用品细菌菌落总数应20cfu/g或 100 cm2,致病性微生物不得检出。733接触皮肤的医疗用品细菌菌落总数应200cfu/g或 100 cm2,致病性微生物不得检出。7 4使用

16、中消毒剂卫生标准使用中消毒剂:细菌菌落总数应100 cfu/ml ;致病性微生物不得检出。7 5内镜消毒后的卫生标准细菌菌落总数应20cfu/ 件;致病性微生物不得检出。7 6透析液消毒后的卫生标准761入水口细菌菌落总数应 200cfu/ml;致病性微生物不得检出。762出水口细菌菌落总数2000cfu/ml;致病性微生物不得检出。8. 院感标本报告的录入8 1 在电脑点击“院感系统”,进入“院内检测” ,在“环境卫生学及消毒灭菌效果监测结果”中根据检测的结果输入相关的项目。输入抽检科别、标本类别、抽检项目、报告结果/细菌总数、标本单位、检出细菌、送检日期、报告日期、检验者、院感受办抽查、次

17、数。结果输完后按保存键,审核无误后按审核键。按录入键继续下一标本的录入。录入完毕退出系统。8 2 阴性院内感染监测标本的报告方式8 21 空气、物体表面、消毒液、灭菌生物监测菌片培养结果阴性发报告为“无菌生长”。8 2 2 无菌物品培养结果阴性发报告为“无细菌生长”。.精品文档8 3 阳性院内感染监测标本的报告方式8 3 1 空气培养结果阳性发报告为“ XX cfu/m 3”。832物体表面培养结果阳性发报告为“XX cfu/cm 2”。833消毒液培养结果阳性发报告为“XX cfu/ml ”。834生物监测菌片培养结果阳性发报告为“检出枯草芽胞杆菌/ 嗜热脂肪芽胞杆菌” 。835无菌物品阳性发报告为“检出细菌” 。9. 参考文献1中华人民共和国卫生部,制定,医院感染管理文件汇编,附录A:采样及检查方法。2任南,主编, 实用医院感染监测方法与技术,湖南,湖南科学技术出版社,2008.3.精品文档院感标本处理流程图手、台面、物表震荡标本约20 秒,吸 500ul 到普通平板上置 35培养箱培养48 小时后看结果消毒液培养震荡标本约20 秒,吸 50

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