微生物实验课件全部

1、实验一实验一 实验室环境和实验室环境和人体表面微生物的检查人体表面微生物的检查一、目的要求一、目的要求1 1证明实验室环境与体表存在微生物证明实验室环境与体表存在微生物2 2体会无菌操作的重要性体会无菌操作的重要性3 3比较来自不同场所与不同条件下细菌的比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型数量和类型4 4、观察不同类群微生物的菌落特征、观察不同类群微生物的菌落特征 二、基本原理二、基本原理 n取自不同来源的样品接种于平板培养基上，在取自不同来源的样品接种于平板培养基上，在3737下培养下培养1 12 2天，每一菌体即能通过繁殖形天，每一菌体即能通过繁殖形成一个可见的细胞群体的集落成一个

2、可见的细胞群体的集落菌落。菌落。n每一种细菌所形成的菌落都有其特点，如菌落每一种细菌所形成的菌落都有其特点，如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。n因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数因此，可通过平板培养来检查环境中细菌的数量和类型。量和类型。三、实验器材三、实验器材n培养基培养基 肉膏蛋白胨琼脂平板肉膏蛋白胨琼脂平板n溶剂和试剂溶剂和试剂 无菌水无菌水n仪器和其他用具仪器和其他用具 灭菌

3、棉签（装在试管灭菌棉签（装在试管内），接种环，试管架，酒精灯或煤气内），接种环，试管架，酒精灯或煤气灯，记号笔（或蜡笔），废物缸。灯，记号笔（或蜡笔），废物缸。n2 2实验室细菌检查实验室细菌检查（1 1）空气）空气 将一个肉膏蛋白胨琼脂平将一个肉膏蛋白胨琼脂平板放在当时做实验的实验室，移去皿板放在当时做实验的实验室，移去皿盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；盖，使琼脂培养基表面暴露在空气中；将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌将另一肉膏蛋白胨琼脂平板放在无菌室或无人走动的其他实验室，移去皿室或无人走动的其他实验室，移去皿盖。一小时后盖上两个皿盖。盖。一小时后盖上两个皿盖。n1 1 标记标记 首先将

4、器皿用记号笔做上记号，首先将器皿用记号笔做上记号，培养培养皿的记号一般写在皿底上。皿的记号一般写在皿底上。 用记号笔写上班级、姓名、日期及样用记号笔写上班级、姓名、日期及样品来源。字尽量小些，写在皿底的一品来源。字尽量小些，写在皿底的一边。边。（b b）取棉签）取棉签 左手拿含有棉签的试管，在火左手拿含有棉签的试管，在火焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持焰旁用右手的手掌边缘和小指、无名指夹持棉塞（或试管帽），将其取出（棉塞（或试管帽），将其取出（图图-2-2），），将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火将管口很快地通过煤气灯（或酒精灯）的火焰，烧灼管口；轻轻地倾斜试管，用右手的焰，烧灼管口

5、；轻轻地倾斜试管，用右手的拇指和食指将棉签小心地取出（拇指和食指将棉签小心地取出（图图-2-2）。）。放回棉塞（或试管帽）（放回棉塞（或试管帽）（图图-2-2），并将空），并将空试管放在试管架上。试管放在试管架上。 （c c）弄湿棉签）弄湿棉签 左手取灭菌水试管，如上左手取灭菌水试管，如上法拔出棉塞（或试管帽）并烧灼管口，法拔出棉塞（或试管帽）并烧灼管口，将棉签插入水中，再提出水面，在管壁将棉签插入水中，再提出水面，在管壁上挤压一下以除去过多的水分，小心将上挤压一下以除去过多的水分，小心将棉签取出，烧灼管口，放回棉塞（或试棉签取出，烧灼管口，放回棉塞（或试管帽），并将灭菌水试管放在试管架上。管

6、帽），并将灭菌水试管放在试管架上。（d d）取样）取样 将湿棉签在实验台面或门旋钮将湿棉签在实验台面或门旋钮上擦拭约上擦拭约2 2平方厘米的范围。平方厘米的范围。 （e e）接种）接种 按图按图-2-2在火焰旁用左手拇指在火焰旁用左手拇指和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉和食指或中指使平皿开启成一缝。再将棉签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下）签伸入，在琼脂表面顶端接种（滚动一下）（图图-2-2），立即闭合皿盖。并按），立即闭合皿盖。并按图图-2-2将原放棉签的空试管拔出棉塞（或试管将原放棉签的空试管拔出棉塞（或试管帽），烧灼管口，插入用过的棉签，将试帽），烧灼管口，插入用过的棉签，将试管放

7、回试管架。管放回试管架。 （f f）划线）划线 另取接种环在火焰上灭菌，如另取接种环在火焰上灭菌，如图图-4-4，先将环端烧热（，先将环端烧热（图图-4-4，1 1），），然后将接种环提起垂直放在火焰上（然后将接种环提起垂直放在火焰上（图图-4-4，2 2），以使火焰接触金属丝的范围），以使火焰接触金属丝的范围广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，广一些，待接种环烧红，再将接种环斜放，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分，沿环向上，烧至可能碰到培养皿的部分，再移向环端，如此很快地来回通过火焰数再移向环端，如此很快地来回通过火焰数次（次（图图-4-4，3 3）。）。 左手拿起平板，同样开启一缝，将

8、灭过左手拿起平板，同样开启一缝，将灭过菌并冷却了的接种环（可在琼脂表面边菌并冷却了的接种环（可在琼脂表面边缘空白处试温度，若发出溅泼声，表示缘空白处试温度，若发出溅泼声，表示太烫），通过琼脂顶端的接种区，向下太烫），通过琼脂顶端的接种区，向下划线，直到平板的一半处（划线，直到平板的一半处（图图-3-3，C C）。）。注意：接种环与琼脂表面的角度要小，注意：接种环与琼脂表面的角度要小，移动的压力不能太大，否则会刺破琼脂。移动的压力不能太大，否则会刺破琼脂。 闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右闭合皿盖，左手将平板向左转动至空白处，右手拿的接种环再在火焰上烧灼，使冷。接种环手拿的接种环再在火焰

9、上烧灼，使冷。接种环 通过前面划的线条再在琼脂的另一半，按通过前面划的线条再在琼脂的另一半，按图图-3 3，D D从上向下来回划线至从上向下来回划线至1 12 2处。处。 烧灼接种环，转动平板，按烧灼接种环，转动平板，按图图-3-3，E E，划，划最后最后1 14 4，立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回，立刻盖上皿盖，烧灼接种环，放回原处。原处。 整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火整个划线操作均要求无菌操作，即靠近火焰，而且动作要快。焰，而且动作要快。n 3 3人体细菌的检查人体细菌的检查（1 1）手指（洗手前与洗手后）手指（洗手前与洗手后） （a a）分别在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手）分别

10、在两个琼脂平板上标明洗手前与洗手后（当然，班级、姓名、日期各项在每次写标后（当然，班级、姓名、日期各项在每次写标签时是必不可少的）。签时是必不可少的）。（b b）移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的）移去皿盖，将未洗过的手指在琼脂平板的表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。表面，轻轻地来回划线，盖上皿盖。（c c）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗）用肥皂和刷子，用力刷手，在流水中冲洗干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，干净，干燥后，在另一琼脂平板表面来回移动，盖上皿盖。盖上皿盖。（2 2）头发）头发 在揭开皿盖的琼脂平板的上在揭开皿盖的琼脂平板的上方，用手将头发用力摇动数次，使细方，用手将

11、头发用力摇动数次，使细菌降落到琼脂平板表面，然后盖上皿菌降落到琼脂平板表面，然后盖上皿盖。盖。（3 3）咳嗽）咳嗽 将去盖琼脂平板放在离口约将去盖琼脂平板放在离口约6 68cm8cm处，对着琼脂表面用力咳嗽，处，对着琼脂表面用力咳嗽，然后盖上皿盖。然后盖上皿盖。（4 4）鼻腔）鼻腔（a a）按照实验台检查法的步骤（）按照实验台检查法的步骤（b b）和）和（c c），取出棉签，并将其弄湿。），取出棉签，并将其弄湿。（b b）用湿棉签在鼻腔内滚动数次。）用湿棉签在鼻腔内滚动数次。（c c）按实验台检查法的步骤（）按实验台检查法的步骤（e e）和（）和（f f），），接种与划线，然后盖上皿盖。接种与

12、划线，然后盖上皿盖。 4 将所有的琼脂平板翻转，使皿底在上，放将所有的琼脂平板翻转，使皿底在上，放 37培养箱，培养培养箱，培养12天。天。n5 5结果记录方法结果记录方法（1 1）菌落计数在划线的平板上，如果菌落很多）菌落计数在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后而重叠，则数平板最后1/41/4面积内的菌落数。面积内的菌落数。不是划线的平板，也一分为四，数不是划线的平板，也一分为四，数1/41/4面积的面积的菌落数。菌落数。（2 2）根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征）根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌

13、数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。开的单个菌落。n菌落特征描写方法如下：菌落特征描写方法如下：（a a）大小）大小 大、中、小、针尖状。可先将整大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。小的标准，或由教师指出一个大小范围。（b b）颜色）颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、黄色、金黄色、

14、灰色、乳白色、红色、粉红色等。红色、粉红色等。（c c）干湿情况）干湿情况 干燥、湿润、粘稠。干燥、湿润、粘稠。（d d）形态）形态 圆形、不规则等。圆形、不规则等。 （e e）高度扁平、隆起、凹下。）高度扁平、隆起、凹下。（f f）透明程度）透明程度 透明、半透明、不透明。透明、半透明、不透明。（g g）边缘）边缘 整齐、不整齐。整齐、不整齐。 五、实验报告五、实验报告菌落观察菌落观察六、思考题六、思考题 (1)(1)列举列举2 23 3类微生物，说明类微生物，说明他们在本实验条件下（肉膏蛋他们在本实验条件下（肉膏蛋白胨琼脂平板，白胨琼脂平板，3737）不能生）不能生长。长。（2 2）比较各

15、种来源的样品，哪）比较各种来源的样品，哪一种样品的平板菌落数与菌落一种样品的平板菌落数与菌落类型最多？为什么？类型最多？为什么？（3 3）人多的实验室与无菌室）人多的实验室与无菌室（或无人走动的实验室）相比，（或无人走动的实验室）相比，平板上的菌落数与菌落类型有平板上的菌落数与菌落类型有什么区别？你能解释一下造成什么区别？你能解释一下造成这种区别的原因吗？这种区别的原因吗？（4 4）比较洗手前后）比较洗手前后的手指平板，菌落的手指平板，菌落数有无区别？谈谈数有无区别？谈谈你的体会。你的体会。（5 5）通过本次实验，）通过本次实验，在防止培养物的污在防止培养物的污染与防止细菌的扩染与防止细菌的扩

16、散方面，你学到些散方面，你学到些什么？有什么体会？什么？有什么体会？你如何体会你如何体会“为什为什么既是我们的朋友么既是我们的朋友又是我们的敌人又是我们的敌人”。实验二实验二 细菌形态观察和染色实验细菌形态观察和染色实验一、目的要求一、目的要求n学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操学习微生物涂片、染色基本技术和无菌操作技术作技术; ;n初步掌握革兰氏染色法初步掌握革兰氏染色法; ;n巩固显微镜（油镜）的使用方法巩固显微镜（油镜）的使用方法; ;n初步认识细菌的形态特征。初步认识细菌的形态特征。二、二、基本原理基本原理革兰革兰氏染氏染色程色程序序结结晶晶紫紫初初染染碘碘液液媒媒染染乙乙醇醇脱脱色

17、色番番红红复复染染最最终终结结果果原理原理革兰革兰氏阳氏阳性菌性菌(G+)蓝蓝紫紫色色蓝蓝紫紫色色蓝蓝紫紫色色蓝蓝紫紫色色蓝蓝紫紫色色细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类细胞壁肽聚糖层呈网状，壁厚、类脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、脂含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水、网状结构孔径缩小，透性降低，结网状结构孔径缩小，透性降低，结晶紫晶紫碘的复合物仍保留在细胞内碘的复合物仍保留在细胞内革兰革兰氏阴氏阴性菌性菌(G-)蓝蓝紫紫色色蓝蓝紫紫色色无无色色红红色色红红色色细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高，细胞壁肽聚糖层薄、类脂含量高，乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细乙醇脱色时类脂质被乙醇溶解，细胞壁透性增大，结晶紫胞壁透

18、性增大，结晶紫碘的复合碘的复合物较易洗脱出来物较易洗脱出来三、器材三、器材v菌种菌种 大肠杆菌大肠杆菌约约24h24h营养琼脂斜面培养物，营养琼脂斜面培养物，金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌约约24h24h营养琼脂斜面培养物，营养琼脂斜面培养物，枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌121224h24h营养琼脂斜面培养物。营养琼脂斜面培养物。v染色剂染色剂 革兰氏染色液。革兰氏染色液。v仪器或者其他用具仪器或者其他用具 显微镜，酒精灯，载显微镜，酒精灯，载玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二玻片，接种环，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，生理盐水等甲苯），擦镜纸，生理盐水等 v涂片涂片 涂成薄膜涂成薄膜 干

19、燥干燥 自然干燥自然干燥 固定固定 通过火焰通过火焰2 23 3次次 结晶紫初染结晶紫初染 1-2min 1-2min 碘液媒染碘液媒染 1min 1min 乙醇脱色乙醇脱色 至流出的乙醇无紫色至流出的乙醇无紫色 番红复染番红复染 2min 2min 油镜镜检观察。油镜镜检观察。四、操作步骤四、操作步骤v混合涂片涂色混合涂片涂色 按上述方法，在同一载玻片上，按上述方法，在同一载玻片上，以以大肠杆菌和枯草芽孢杆菌大肠杆菌和枯草芽孢杆菌或或大肠杆菌和金黄色葡大肠杆菌和金黄色葡萄球菌萄球菌作混合涂片、染色、镜检进行比较。作混合涂片、染色、镜检进行比较。现场演示现场演示 1 1 载玻片要洁净无油迹；滴

20、生理盐水和取菌载玻片要洁净无油迹；滴生理盐水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚；不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚； 2 2 热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破热固定温度不宜过高，否则会改变甚至破坏细胞形态；坏细胞形态； 3 3 染色时，每一步骤后都要立即水洗；染色时，每一步骤后都要立即水洗； 4 4 革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革革兰氏染色结果是否正确，乙醇脱色是革兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性兰氏染色操作的关键环节。脱色不足，阴性菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误菌被误染成阳性菌，脱色过度，阳性菌被误染成阴性菌，脱色时间一般染成阴性菌，脱色时间一般202030S3

21、0S。注意：注意：五、实验报告五、实验报告 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(G+)大肠杆菌大肠杆菌(G-)枯草芽孢杆菌枯草芽孢杆菌(G+) 六、思考题六、思考题v你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果你认为哪些环节会影响革兰氏染色结果的正确性？其中最关键的环节是什么？的正确性？其中最关键的环节是什么？v现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的现有一株细菌宽度明显大于大肠杆菌的粗壮杆菌，请你利用大肠杆菌鉴定其革粗壮杆菌，请你利用大肠杆菌鉴定其革兰氏染色反应结果及其正确性。兰氏染色反应结果及其正确性。v热固定的目的是什么？热固定的目的是什么？实验三实验三 细菌的特殊染色技术细菌的特殊染色技术一、目的要求一、目

22、的要求学习并掌握芽孢染色法。学习并掌握芽孢染色法。初步了解芽孢杆菌的形态特征。初步了解芽孢杆菌的形态特征。学习并掌握荚膜染色法。学习并掌握荚膜染色法。二、基本原理二、基本原理n用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条用着色力强的染色剂孔雀绿，在加热条件下染色，使染料不仅进入菌体也可进件下染色，使染料不仅进入菌体也可进入芽孢内，入芽孢内，进入菌体的染料经水洗后被进入菌体的染料经水洗后被脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，脱色，而芽孢一经着色难以被水洗脱，再用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍再用对比度大的复染剂染色后，芽孢仍保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被保留初染剂的颜色，而菌体和芽孢囊被染成复染剂的颜色

23、，使芽孢和菌体更易染成复染剂的颜色，使芽孢和菌体更易于区分。于区分。n荚膜是包围在细菌胞外的一层粘液状或荚膜是包围在细菌胞外的一层粘液状或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或胶质状物质，其成分为多糖、糖蛋白或多肽。由于多肽。由于荚膜与染料的亲和力弱、不荚膜与染料的亲和力弱、不易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗易着色；而且可溶于水，易在用水冲洗时被除去。时被除去。所以通常用衬托染色法染色，所以通常用衬托染色法染色，使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在使菌体和背景着色，而荚膜不着色，在菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水菌体周围形成一透明圈。由于荚膜含水量高，制片时通常不用热固定，以免变量高，制片时通常

24、不用热固定，以免变形影响观察。形影响观察。三、器材三、器材n菌种菌种 枯草芽孢杆菌约枯草芽孢杆菌约2d2d营养琼脂斜营养琼脂斜面培养物；褐球固氮菌约面培养物；褐球固氮菌约2d2d无氮培养基无氮培养基琼脂斜面培养物。琼脂斜面培养物。 染色剂染色剂 5%5%孔雀绿水溶液，孔雀绿水溶液，0.5%0.5%番红番红水溶液，绘图墨水。水溶液，绘图墨水。 仪器和其他用具仪器和其他用具 小试管，滴管，烧小试管，滴管，烧杯，试管架，载玻片，盖玻片，滤纸，杯，试管架，载玻片，盖玻片，滤纸，木夹子，显微镜等。木夹子，显微镜等。四、操作步骤四、操作步骤(1) Schaeffer(1) SchaefferFultonF

25、ulton氏芽孢染色法氏芽孢染色法制片制片 常规涂片、干燥、固定。常规涂片、干燥、固定。染色染色 加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住加数滴孔雀绿染液于涂片上，用木夹夹住载玻片一端，在微火上载玻片一端，在微火上加热至染料冒加热至染料冒蒸汽并开始计时，维持蒸汽并开始计时，维持5min5min。n水洗水洗 待玻片冷却后，用缓流自来水冲待玻片冷却后，用缓流自来水冲 洗，直至流出的水无色为止。洗，直至流出的水无色为止。n复染复染 用番红染液用番红染液复染复染2min2min。n水洗水洗 用缓流水冲洗后，吸干。用缓流水冲洗后，吸干。n镜检镜检 油镜观察。油镜观察。芽孢呈绿色，芽孢囊芽孢呈绿色，芽孢囊 及

26、营养体为红色。及营养体为红色。（2 2）荚膜的湿墨水染色法）荚膜的湿墨水染色法n制备菌和墨水混合液制备菌和墨水混合液 加一滴墨水于洁净加一滴墨水于洁净 的载玻片上，然后挑取少量菌的载玻片上，然后挑取少量菌 体与其混合均匀。体与其混合均匀。加盖玻片加盖玻片 将一洁净盖玻片盖在混合液将一洁净盖玻片盖在混合液 上，然后在盖玻片上放一张滤上，然后在盖玻片上放一张滤 纸，轻轻按压以吸去多余的混纸，轻轻按压以吸去多余的混 合液。合液。n镜检镜检 用低倍镜和高倍镜观察，用低倍镜和高倍镜观察，背背 景灰色，菌体较暗，在菌体景灰色，菌体较暗，在菌体 周围呈现明亮透明圈即为荚周围呈现明亮透明圈即为荚 膜。膜。注意

27、：注意：n1 芽孢孔雀绿染色加热过程中，要芽孢孔雀绿染色加热过程中，要及时补充染液，切勿让涂膜干涸。及时补充染液，切勿让涂膜干涸。n2 2 芽孢染色水洗时，勿用瀑水对着芽孢染色水洗时，勿用瀑水对着菌膜冲洗，以免细菌被水冲掉。菌膜冲洗，以免细菌被水冲掉。n3 3 荚膜湿墨水染色时，加盖玻片勿荚膜湿墨水染色时，加盖玻片勿留气泡，以免影响观察。留气泡，以免影响观察。芽孢芽孢荚膜荚膜五、实验报告五、实验报告1 1 芽孢染色结果芽孢染色结果 绘图表示枯草芽孢杆菌绘图表示枯草芽孢杆菌的形态特征（注意芽孢的形状、着生位的形态特征（注意芽孢的形状、着生位置及芽孢囊的形状特征）。置及芽孢囊的形状特征）。2 2

28、荚膜染色结果荚膜染色结果 绘图说明你所观察到的绘图说明你所观察到的细菌的菌体和荚膜的形态。细菌的菌体和荚膜的形态。六、思考题六、思考题n用用SchaefferSchaefferFultonFulton氏染色法加热染色时，氏染色法加热染色时，若因一时疏忽玻片上的染液被烘干，此时能若因一时疏忽玻片上的染液被烘干，此时能否立即补加染液？为什么？否立即补加染液？为什么？n若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少若涂片中观察到的只是大量游离芽孢，很少看到芽孢囊及营养体细胞，你认为这是什么看到芽孢囊及营养体细胞，你认为这是什么原因？原因？n通过荚膜染色法染色后，为什么被包在荚膜通过荚膜染色法染色后，为什么被

29、包在荚膜里面的菌体着色而荚膜不着色？里面的菌体着色而荚膜不着色？实验四实验四 微生物菌落制片技术微生物菌落制片技术一、目的要求一、目的要求 1 1 学习并掌握放线菌形态的制片方法学习并掌握放线菌形态的制片方法 2 2学习并掌握霉菌的制片方法。学习并掌握霉菌的制片方法。二、基本原理二、基本原理 放线菌插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上放线菌插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。

30、这种方轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。于观察不同生长期的形态。v霉菌载玻片培养法：无菌操作将培养基琼脂霉菌载玻片培养法：无菌操作将培养基琼脂薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，薄层置于载玻片上，接种后盖上盖玻片培养，霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内霉菌即在载玻片和盖玻片之间的有限空间内沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载沿盖玻片横向生长。培养一定时间后，将载玻片上的培养物置显微镜下观察。玻片上的培养物置显微镜下观察。v这种方法既可以保持了霉菌自然生长状态，这种

31、方法既可以保持了霉菌自然生长状态，还便于观察不同发育期的培养物。还便于观察不同发育期的培养物。三、器材三、器材 v菌种菌种 链霉菌；曲霉，青霉，根霉链霉菌；曲霉，青霉，根霉v培养基培养基 马铃薯琼脂培养基马铃薯琼脂培养基v仪器或其他用具仪器或其他用具 灭菌平皿、载玻片、盖灭菌平皿、载玻片、盖玻片、玻片、U U形玻棒，接种环，解剖刀，镊子，形玻棒，接种环，解剖刀，镊子，20%20%的甘油，显微镜等。的甘油，显微镜等。 四、操作步骤四、操作步骤 v 1.1.放线菌扦片法放线菌扦片法v 倒平板倒平板 取融化并冷至约取融化并冷至约5050 的高氏的高氏1 1 号号 琼脂约琼脂约20mL20mL 倒平板

32、，凝固待用；倒平板，凝固待用； 接接 种种 用接种环挑取菌种斜面培养物在琼用接种环挑取菌种斜面培养物在琼 脂平板上划线接种。脂平板上划线接种。 插插 片片 以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻 片以大约片以大约4545 角插入琼脂内，插角插入琼脂内，插 片数量可根据需要而定。片数量可根据需要而定。 培养培养 将插片平板倒置，将插片平板倒置，2828 培养培养3 3 5d5d 。 镜检镜检 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面 培养物，将有菌的一面朝上放在载培养物，将有菌的一面朝上放在载玻玻 片上，直接镜检。片上，直接镜检。 注意注意1 1 划线要细密

33、些划线要细密些, ,以利插片；以利插片；2 2 插片要插在接种线上；插片要插在接种线上；3 3 观察时观察时, ,宜用略暗光线；先用低倍镜找到宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。适当视野，再换高倍镜观察。 v2 2 霉菌载玻片培养法霉菌载玻片培养法 培养小室的灭菌培养小室的灭菌 琼脂块的制作琼脂块的制作 取已灭菌的马铃薯培养基取已灭菌的马铃薯培养基6 67mL7mL注入另一灭菌的平皿中，使之凝固成薄注入另一灭菌的平皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成层。用解剖刀切成0.50.51cm1cm2 2的琼脂块，的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上并将其移至上述培养室中的载玻片上

34、（每片放两块）。（每片放两块）。 接种接种 用尖细的接种针挑取少量的孢子接种于用尖细的接种针挑取少量的孢子接种于 琼脂块的边缘上，无菌操作用镊子将盖琼脂块的边缘上，无菌操作用镊子将盖 玻片覆盖在琼脂块上。玻片覆盖在琼脂块上。 培养培养 先在平皿的滤纸上加先在平皿的滤纸上加3 35ml5ml灭菌的灭菌的20%20% 甘油，然后盖上皿盖，甘油，然后盖上皿盖，2828培养。培养。 镜检镜检 根据需要可在不同的培养时间内取出载根据需要可在不同的培养时间内取出载 玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。注意注意1 1 制作过程应注意无菌操作；制作过程应注意无菌操作；2 2

35、 接种量要少，尽可能将分散的孢子接种接种量要少，尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察；密影响观察；3 3 观察时观察时, ,宜用略暗光线；先用低倍镜找到宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察。适当视野，再换高倍镜观察。 五、实验报告五、实验报告 v1 1 绘图说明你所观察到的放线菌的主绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。要形态特征。v2 2 绘制曲霉、青霉、根霉的个体形态绘制曲霉、青霉、根霉的个体形态图，并注明各部位图，并注明各部位名称。名称。v3 简述简述曲霉、青霉、根霉的菌落颜色及曲霉、青霉、根霉的菌落

36、颜色及特征。特征。六、思考题六、思考题v1 1 镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？生菌丝？v2 2 你主要根据哪些形态特征来区分上述三种霉你主要根据哪些形态特征来区分上述三种霉菌？菌？v3 3 根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认为上述哪些过程中的哪些步骤可以根据具体情为上述哪些过程中的哪些步骤可以根据具体情况作一些改进或可用其他的替代方法？况作一些改进或可用其他的替代方法？实验四实验四 霉菌、放线菌的霉菌、放线菌的形态观察形态观察一、目的要求一、目的要求 1 1 初步了解放线菌、霉菌的形态特征。初步了解

37、放线菌、霉菌的形态特征。2 2 观察放线菌、霉菌菌落特征。观察放线菌、霉菌菌落特征。3 3 了解三类常见霉菌的基本形态特征。了解三类常见霉菌的基本形态特征。 二、基本原理二、基本原理 n放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性细菌，常见放线菌大多形成菌丝体，紧兰氏阳性细菌，常见放线菌大多形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的叫贴培养基表面或深入培养基内生长的叫基内菌丝基内菌丝（简称（简称“基丝基丝”，) ) ，基丝生长到一定阶段还能，基丝生长到一定阶段还能向空气中生长出向空气中生长出气生菌丝气生菌丝 简称简称“气丝气丝”) ) ，并，

38、并进一步分化产生进一步分化产生孢子丝及孢子孢子丝及孢子。n在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，层，气丝色暗，基丝较透明。气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状状n能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。特征是放线菌分类鉴定的重要依据。n霉菌是可产生复杂分枝的菌丝体，分为基内菌丝霉菌是可产生

39、复杂分枝的菌丝体，分为基内菌丝和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段后分化产和气生菌丝，气生菌丝生长到一定阶段后分化产生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。生繁殖菌丝，由繁殖菌丝产生孢子。n 霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）其孢子的形态特霉菌菌丝体（尤其是繁殖菌丝）其孢子的形态特征是分类的重要依据。例如：征是分类的重要依据。例如：青霉的繁殖菌丝无青霉的繁殖菌丝无顶囊，经多次分枝，产生几轮对称或不对称的小顶囊，经多次分枝，产生几轮对称或不对称的小梗，小梗上着生成串的青色分生孢子，孢子囊形梗，小梗上着生成串的青色分生孢子，孢子囊形如如“扫帚扫帚”。而曲霉的分生孢子梗顶端膨大成顶而曲霉的分生孢子梗顶端膨大成顶囊，

40、成球形。囊，成球形。霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌霉菌菌丝和孢子的宽度通常比细菌和放线菌粗得多（约和放线菌粗得多（约3 310um10um），常是细菌菌体宽），常是细菌菌体宽度的几倍至几十倍，因此，用低倍镜即可观察。度的几倍至几十倍，因此，用低倍镜即可观察。 三、器材 菌种菌种 链霉菌链霉菌 培养基培养基 灭菌的高氏灭菌的高氏I I 号琼脂号琼脂 仪器或其他用具仪器或其他用具 经灭菌的：平皿、玻璃纸、经灭菌的：平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒以及载玻片，接种环，接种盖玻片、玻璃涂棒以及载玻片，接种环，接种铲，镊子，石炭酸复红染液，显微镜等。铲，镊子，石炭酸复红染液，显微镜等。 n 1 1、 菌种

41、：曲霉（菌种：曲霉（Aspergillus sp.Aspergillus sp.），青霉，），青霉，根霉（根霉（Rhizopus sp.Rhizopus sp.）和毛霉（）和毛霉（Mucor sp.Mucor sp.）培养培养2 25d5d的马铃薯琼脂平板培养物。的马铃薯琼脂平板培养物。 2 2、 溶液或试剂溶液或试剂 乳酸石炭酸棉蓝染色液。乳酸石炭酸棉蓝染色液。 3 3、 仪器或其它用具仪器或其它用具 无菌吸管、平皿、载玻无菌吸管、平皿、载玻片、盖玻片、片、盖玻片、U U形玻棒、解剖刀、镊子、形玻棒、解剖刀、镊子、50%50%乙乙醇、醇、20%20%的甘油以接种针、显微镜等。的甘油以接种针、

42、显微镜等。 四、操作步骤四、操作步骤 n1.1.插片法插片法（ 1 1 ）倒平板）倒平板 取融化并冷至大约取融化并冷至大约5050 的的 高高氏氏1 1 号琼脂约号琼脂约2020 mLmL倒平板，凝固待用。倒平板，凝固待用。（2 2）接种）接种 用接种环挑取菌种斜面培养物（孢用接种环挑取菌种斜面培养物（孢子）在琼脂平板上划线接种。划线要密些子）在琼脂平板上划线接种。划线要密些, ,以以利插片。利插片。n（3 3）插片）插片 以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以无菌操作用镊子将灭菌的盖玻片以大约以大约4545 。角插入琼脂内（插在接种线上），角插入琼脂内（插在接种线上），插片数量可根据需要而定。插片

43、数量可根据需要而定。 ( ( 4 4 ）培养）培养 将插片平板倒置，将插片平板倒置，2828 培养，培培养，培养时间根据观察的目的而定，通常养时间根据观察的目的而定，通常3 35d5d 。 ( ( 5 5 ）镜检）镜检 用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面用镊子小心拔出盖玻片，擦去背面培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，培养物，然后将有菌的一面朝上放在载玻片上，直接镜检。直接镜检。 观察时观察时, ,宜用略暗光线；先用低倍镜找到适宜用略暗光线；先用低倍镜找到适当视野，再换高倍镜观察，如果用当视野，再换高倍镜观察，如果用0.1%0.1%美蓝对美蓝对培养后的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。培养后

44、的盖玻片进行染色后观察，效果会更好。n2 2、载玻片培养观察法、载玻片培养观察法（1 1）培养小室的灭菌）培养小室的灭菌 在平皿皿底铺一张略小在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆滤片，再放一于皿底的圆滤片，再放一U U形玻棒，其上放一形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖、包扎后于于121121灭菌灭菌30min30min，烘干备用。，烘干备用。（2 2）琼脂块的制作）琼脂块的制作 取已灭菌的马铃薯（或察氏）取已灭菌的马铃薯（或察氏）琼脂培养物琼脂培养物6 67ml7ml注入另一灭菌的平皿中，使注入另一灭菌的平皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成之凝固

45、成薄层。用解剖刀切成0.50.51cm1cm2 2的琼脂的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两块）片放两块）制作过程应注意无菌操作。制作过程应注意无菌操作。n（3 3）接种）接种 用尖细的接种针挑取少量的孢子接种于用尖细的接种针挑取少量的孢子接种于琼脂块的边缘，无菌操作用镊子将盖玻片覆盖在琼琼脂块的边缘，无菌操作用镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。接种量要少，尽可能将分散的孢子接种在脂块上。接种量要少，尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。 （4 4）培养）培养 先在平

46、皿的滤纸上加先在平皿的滤纸上加3 35ml5ml灭菌的灭菌的20%20%甘油（用于保持平皿内的湿度），盖上皿盖，甘油（用于保持平皿内的湿度），盖上皿盖，2828培养。培养。 （5 5）镜检）镜检 根据需要可以在不同的培养时间内取根据需要可以在不同的培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。五、实验报告五、实验报告 n1 1 结果结果 绘图说明你所观察到的放线菌的主要形绘图说明你所观察到的放线菌的主要形态特征。态特征。n2 2 绘图示青霉、黑曲霉的分生孢子梗、分生孢子绘图示青霉、黑曲霉的分生孢子梗、分生孢子实验结果实验结果 (1) (1) 曲霉、

47、青霉、根霉的菌落颜色及特征。曲霉、青霉、根霉的菌落颜色及特征。 (2) (2) 绘制曲霉、青霉、根霉的个体形态图，绘制曲霉、青霉、根霉的个体形态图，并注明各部位名称。并注明各部位名称。六、思考题六、思考题（l l）试比较三种培养和观察放线菌方法的优）试比较三种培养和观察放线菌方法的优缺点。缺点。（2 2）玻璃纸培养和观察法是否还可用于其他）玻璃纸培养和观察法是否还可用于其他类群微生物的培养和观察？为什么？类群微生物的培养和观察？为什么？（3 3）镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝）镜检时，你如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？和气生菌丝？ n（1 1）你主要根据哪些形态特征来区分上述）你主要根

48、据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？四种霉菌？ （2 2）根据载玻片培养观察方法的基本原）根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认为上述哪些过程中的哪些步骤可理，你认为上述哪些过程中的哪些步骤可以根据具体情况作一些改进或可用其他的以根据具体情况作一些改进或可用其他的替代方法？替代方法？ （3 3）你认为在显微镜下，细菌、放线菌、）你认为在显微镜下，细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的主要区别是什么？酵母菌和霉菌的主要区别是什么？实验六实验六 微生物显微微生物显微镜镜直接计数法直接计数法一、目的要求一、目的要求1 1明确显微镜计数的原理。明确显微镜计数的原理。2 2学习使用血球计数板进行微生物计数的方学习使

49、用血球计数板进行微生物计数的方法。法。二、基本原理二、基本原理l利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种利用血球计数板在显微镜下直接计数，是一种常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、常用的微生物计数方法。此法的优点是直观、快速。快速。l将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在将经过适当稀释的菌悬液（或孢子悬液）放在血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，血球计数板载玻片与盖玻片之间的计数室中，在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一在显微镜下进行计数。由于计数室的容积是一定的（定的（0.1mm0.1mm3 3），所以可以根据在显微镜下观），所以可以根据在显微镜下观察到的微生物数目来换算成单位

50、体积内的微生察到的微生物数目来换算成单位体积内的微生物总数目。物总数目。l由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故由于此法计得的是活菌体和死菌体的总和，故又称为总菌计数法。又称为总菌计数法。l血球计数板，通常是血球计数板，通常是一块特制的载玻片，一块特制的载玻片，其上由四条槽构成三其上由四条槽构成三个平台。中间的平台个平台。中间的平台又被一短横槽隔成两又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上半，每一边的平台上各刻有一个方格网，各刻有一个方格网，每个方格网共分九个每个方格网共分九个大方格，中间的大方大方格，中间的大方格即为计数室，微生格即为计数室，微生物的计数就在计数室物的计数就在计数室中进行。中进

51、行。l计数室的刻度一般有两计数室的刻度一般有两种规格，一种是一个大种规格，一种是一个大方格分成方格分成1616个中方格，个中方格，而每个中方格又分成而每个中方格又分成2525个小方格，共个小方格，共400400小格；小格；l另一种是一个大方格分另一种是一个大方格分成成2525个中方格，而每个个中方格，而每个中方格又分成中方格又分成1616个小方个小方格，总共也是格，总共也是400400小格。小格。所以无论是哪种规格的所以无论是哪种规格的计数板，每一个大方格计数板，每一个大方格中的小方格数都是相同中的小方格数都是相同的。的。 每一个大方格边长为每一个大方格边长为1mm1mm，则每一大方格的面积为

52、则每一大方格的面积为1mm1mm2 2，盖上盖玻片后，载玻片与盖盖上盖玻片后，载玻片与盖玻片之间的高度为玻片之间的高度为0.1mm0.1mm，所以计数室的容积为所以计数室的容积为0.1mm0.1mm3 3。其计算方法如下：其计算方法如下： 1 116162525计数板计算公式计数板计算公式 细胞数细胞数/ml=(100/ml=(100小格内的细小格内的细胞数胞数/ 100)/ 100)40040010001000稀释倍数稀释倍数 2 225251616计数板计算公式计数板计算公式 细胞数细胞数/ml=(80/ml=(80小格内的细小格内的细胞数胞数/ 80)/ 80)4004001000100

53、0稀稀释倍数释倍数三、器材三、器材l菌种：酵母菌悬液菌种：酵母菌悬液l仪器或其他用具：血球计数板，显微镜，仪器或其他用具：血球计数板，显微镜，盖玻片，无菌毛细管等。盖玻片，无菌毛细管等。四、操作步骤四、操作步骤l1 1菌悬液制备菌悬液制备 以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度以无菌生理盐水将酿酒酵母制成浓度适当的菌悬液。适当的菌悬液。l2 2镜检计数室镜检计数室 在加样前，先对计数板的计数室进行在加样前，先对计数板的计数室进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行镜检。若有污物，则需清洗后才能进行计数。计数。l3 3加样品加样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻

54、片，再用无菌的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一的细口滴管将稀释的酵母菌液由盖玻片边缘滴一小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作小滴（不宜过多），使菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。用自行进入计数室，一般计数室均能充满菌液。取样时先要摇匀菌液体；加样时计数室不可有气取样时先要摇匀菌液体；加样时计数室不可有气泡产生。静置泡产生。静置5 51010分钟即可计数。分钟即可计数。l4 4显微镜计数显微镜计数 将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍将血球计数板置于显微镜载物台上，先用低倍镜找到计数室所在位置，然后换成高倍镜进行计镜找到计数室所在位置，然后换成高倍

55、镜进行计数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调数。在计数前若发现菌液太浓或太稀，需重新调节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格节稀释度后再计数。一般样品稀释度要求每小格内约有内约有5 51010个菌体为宜。个菌体为宜。 若选用若选用25251616规格的计数板则每个计数室选规格的计数板则每个计数室选5 5个个中方格，可选中方格，可选4 4个角和中央的中格（即个角和中央的中格（即8080个小格），个小格），若选用若选用16162525规格的计数板，则数四个角：左上、规格的计数板，则数四个角：左上、右上、左下、右下的四个中方格，（即右上、左下、右下的四个中方格，（即100100小格）小格）

56、中的菌体进行计数。中的菌体进行计数。 位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。位于格线上的菌体一般只数上方和右边线上的。 如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，如遇酵母出芽，芽体大小达到母细胞的一半时，即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数即作两个菌体计数。计数一个样品要从两个计数室中计得的值来计算样品的含菌量。室中计得的值来计算样品的含菌量。显微镜及显微镜下的微生物显微镜及显微镜下的微生物l5 5清洗血球计数板清洗血球计数板 使用完毕后，将血球计数板在水笼头上用水使用完毕后，将血球计数板在水笼头上用水柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或柱冲洗，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用

57、吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残用吹风机吹干。镜检，观察每小格内是否有残留菌体或其化沉淀物。若不干净，则必须重复留菌体或其化沉淀物。若不干净，则必须重复洗涤至干净为止。洗涤至干净为止。五、实验报告五、实验报告各中格中菌数AB菌数/ml二室平均数12345第一室第二室六、思考题六、思考题 （1 1）为什么用两种不同规格的计数板测同一样）为什么用两种不同规格的计数板测同一样品时，其结果一样？品时，其结果一样？ （2 2）根据你的体会，说明用血细胞技术的误差）根据你的体会，说明用血细胞技术的误差 主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差、力主要来自哪些方面？应如何尽量减少误差、力求准确？求准确？

58、（3 3）某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存）某单位要求知道一种干酵母粉中的活菌存活率，请设计活率，请设计1 12 2种可行的检测方法。种可行的检测方法。一、目的和要求一、目的和要求 n1 1观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区观察酵母菌的出芽繁殖方式，学习区分酵母菌死活细胞的实验方法。分酵母菌死活细胞的实验方法。n2 2掌握酵母菌的一般形态特征及其与细掌握酵母菌的一般形态特征及其与细菌的区别。菌的区别。 实验七实验七 酵母菌细胞酵母菌细胞的形态观察、死活细胞的形态观察、死活细胞的鉴别的鉴别二、基本原理二、基本原理 n1 1形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真形态观察：酵母菌是不运动的单细胞真核微

59、生物，通常比常见细胞大几倍甚至十核微生物，通常比常见细胞大几倍甚至十几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性几倍。大多数酵母菌以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。合产生子囊孢子。n2 2死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，死活鉴定：美蓝是一种无毒性的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美它的氧化型呈蓝色，还原型呈无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝由蓝色的氧化型变为无色能力，能使美蓝由蓝色的氧化型

60、变为无色的还原型。的还原型。因此，具有还原能力的酵母活因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。的衰老细胞则成蓝色或淡蓝色。三、器材三、器材 n1 1、染液：吕氏碱性美蓝染液、染液：吕氏碱性美蓝染液n2 2、菌种：酿酒酵母的斜面培养物、菌种：酿酒酵母的斜面培养物n3 3、仪器和其他用具：、仪器和其他用具： 显微镜、载玻片、显微镜、载玻片、盖玻片等盖玻片等四、操作步骤四、操作步骤 n1 1、美蓝浸片的观察：、美蓝浸片的观察：1 1）在载玻片中央加一滴）在载玻片中央加一滴0.1%0.1%吕氏碱性美蓝染吕氏碱性美蓝染