【课件】单元02细胞工程【复习课件】高二（人教版2019选择性必修3）

1、高二年级选择性必修三高二年级选择性必修三单元单元02细胞工程细胞工程 1 复习目标要求复习目标要求1.简述植物组织培养的原理和过程。2.简述植物体细胞杂交的原理和过程。3.举例说明植物细胞工程的应用。4.简述动物细胞培养的条件、过程及应用。5.概述单克隆抗体的制备及应用。6.简述动物体细胞核移植的过程及应用。6.简述胚胎形成经过受精及胚胎早期发育过程。7.简述胚胎工程技术包括体外受精、胚胎移植和胚胎分割等。 2 单元网络构建单元网络构建一、细胞工程及细胞的全能性植物细胞工程的基本技术二、植物组织培养技术三、植物体细胞杂交技术1.细胞工程的概念2. 细胞的全能性1.植物组织培养的概念？2.植物组

2、织培养的理论基础是什么？3.植物组织培养的一般过程是什么（要求会默写）？4.理解什么是外植体、脱分化（需遮光）、愈伤组织、再分化（需光照为什么？）5.案例：菊花的组织培养原理、目的（了解）、具体步骤、注意事项？6.归纳细胞表现出全能性的条件（5条）？1.植物体细胞杂交技术的概念、原理？2.酶解法：用的什么酶，得到的是什么？3.人工诱导原生质体融合的两种方法：物理法（2个）、化学法（2个）？ 此外，原生质体融合成功的标志、植物细胞杂交成功的标志是什么？4.体细胞杂交的意义？5.植物体细胞杂交过程示意图要熟悉（详见ppt）？a.细胞的全能性概念？b.细胞具有全能性的原因？c.体现细胞的全能性的标志

3、？d.不体现细胞的全能性的实例？e.不体现细胞的全能性的原因？f. 细胞的全能性大小举例？ 2 单元网络构建单元网络构建一、植物繁殖的新途径植物细胞工程的应用二、作物新品种的培育三、细胞产物的工厂化生产1.快速繁殖2.作物脱毒1.单倍体育种2.突变体的利用a.概念b.优点c.实际应用a.原因b.方法c.注意的问题a.方法；b.过程c.优点；d.案例a.如何产生；b.利用；c.原理；d.成就；e.优缺点a.什么是次生代谢物b.什么是细胞产物的工厂化生产c.细胞产物种类d.为什么一般组织培养到愈伤组织即可 2 单元网络构建单元网络构建一、概述动物细胞培养二、动物细胞培养条件三、动物细胞培养的过程掌

4、握动物细胞培养的概念、原理、地位、关键操作1.动物细胞培养需要满足的条件（详见ppt）2.营养：什么是合成培养基、培养动物常用的培养基、为什么加血清3.无菌、无毒的环境：为什么培养液定期更换、如何防止微生物污染4.温度、pH和渗透压：适宜的温度、pH是多少，维持适宜渗透压的目的5.气体环境：所需气体组成、O2和CO2的作用、培养容器是什么、培养仪器是什么1.动物细胞培养过程示意图（P45掌握）2.重要名词：原代培养、传代培养、细胞贴壁、接触抑制3.选取什么样的材料，取材原因？4.如何制成细胞悬液？将组织分散成单个细胞的原因？将组织分散成单个细胞的方法？5.用胰蛋白酶分散细胞，可以说明什么问题？

5、可以用胃蛋白酶处理吗，为什么？6.酶解法较温和，一定不会对动物细胞造成损伤，对吗？7.体外培养的细胞有哪两大类？两类细胞的生长有什么特点？8.分瓶进行传代培养的原因？分瓶的具体做法是什么（注意：两类细胞处理收 集方式不同）？离心的作用是什么？9.动物细胞培养和植物组织培养的比较（详见PPT表格）四、干细胞培养及应用1.干细胞分布在哪里、干细胞分哪两类2.胚胎干细胞：分布、特点、应用实例（了解）3.成体干细胞：分布、常见类型、特点、实例（了解）4.干细胞的应用：造血干细胞、神经细胞、诱导多能干细胞的应用（了解）5.干细胞应用面临的问题是什么6.诱导多能干细胞的局限性、概念、优点、应用（了解）、制

6、备iPS细胞的其他方法、iPS细胞的来源 2 单元网络构建单元网络构建一、动物细胞融合技术动物细胞融合技术与单克隆抗体二、单克隆抗体的制备三、单克隆抗体的应用1.动物细胞融合的概念、结果、原理、意义是什么2.动物细胞融合常用的方法、融合完成的标志是什么，关于应用（了解即可）3.动物细胞融合和植物体细胞杂交的比较（重点掌握）1.单克隆抗体制备的研究背景（共4点，了解即可）1.诊断试剂：原理、实例2.运载药物：原理、实例、优点3.治疗疾病：实例1.技术：动物细胞融合技术、动物细胞培养技术2.原理：细胞膜具有一定的流动性、细胞增殖3.诱导融合的方法？动物特有的？4.免疫处理（注射特定抗原）目的？5.

7、第一次筛选方法？筛选原理？目的？6.杂交瘤细胞的特点？7.第二次筛选方法？目的？检测原理？8.大量培养杂交瘤细胞方法？9.获取单克隆抗体的途径？10.单克隆抗体的优点？11.单克隆抗体制备的过程示图（P49一定要熟悉）2.单克隆抗体制备 2 单元网络构建单元网络构建一、动物细胞核移植技术概述动物细胞核移植技术和克隆动物二、体细胞核移植的过程三、体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题1.动物细胞核移植技术的概念、结果、原理、生殖方式分别是什么2.哺乳动物核移植分哪两类，各自特点是什么？3.非人灵长类动物体细胞核移植的困难原因（了解）1.体细胞核移植流程图（P53掌握)2.体细胞核移植1.畜牧生产

8、 2.保护濒危动物3.医药卫生 4.治疗人类疾病5.科研 6.存在的问题（3条）1.用到的技术（4个）2.采集的卵母细胞应培养到什么时期、选取该时期的原因是什么？3.卵母细胞去核的方法，“去核” 去的是什么？去核的原因？4.供体细胞注入卵母细胞的优点？5.诱导融合的方法？融合的结果？什么是重构胚胎？6.激活重构陪的方法？处理重构胚的目的？7.实验结论是什么？8.体细胞核移植技术培育的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？（要求熟悉） 2 单元网络构建单元网络构建一、胚胎工程概述胚胎工程的理论基础二、受精三、胚胎早期发育1.胚胎工程的概念；2.操作对象；3.技术种类；特点；

9、理论基础1.受精的概念、受精的场所、受精的过程包括哪两个阶段2.精子获能3.卵子的准备4.受精阶段1.精子获能的概念 2.研究精子获能机制的意义3.精子获能的方法 4.成熟精子的结构（详见ppt）1.卵子一般在排出2-3h后才能被精子穿入 2.排出的卵子成熟程度不同（举例说明）3.卵子的成熟场所：输卵管 4.卵子具备受精能力的时期：M期1.精子如何穿越卵细胞膜外结构 2.防止多精入卵的两个屏障3.透明带反应具体表现 4.卵细胞膜反应具体表现5.透明带反应发生时间 6.卵细胞膜反应发生时间7.雄原核怎么形成 8.雌原核怎么形成9.受精的两个标志1.早期发育的场所、过程（详见ppt） 2.卵裂的场

10、所、分裂方式、特点（2条）、其他表现（常考）3.桑葚胚的概念、特点4.囊胚的概念、特点、结构组成（3 部分）5.内细胞团的位置、作用；滋养层的的位置、作用6.孵化的概念7.原肠胚：熟读课本P58小字部分 2 单元网络构建单元网络构建胚胎工程技术及其应用一、体外受精二、胚胎移植1.体外受精的过程（3步）2.采集到的卵母细胞和精子要如何处理？3.体外受精的意义1.胚胎移植的概念、胚胎的来源2.什么是供体、选择供体的标准、供体的职能3.胚胎移植的实质、地位、意义、描述胚胎移植的过程4.胚胎移植时对供体、受体进行的相同处理是什么？处理的目的是？只对供体进行的操作是什么，用的什么激素？5.配种或人工受精

11、应选择什么样的公牛6.胚胎收集的基础是什么、该阶段检查的目的、胚胎保存的方法7.选择什么阶段的胚胎进行移植8.移植后第二次检查的目的是什么？1.胚胎分割的概念2.胚胎分割的方法、所需的主要仪器是什么（了解）、分割工具（了解）3.胚胎分割产生后代的特点4.胚胎分割属于哪种生殖方式5.胚胎分割的理论基础是什么？6.选择什么阶段的胚胎进行分割？7.对囊胚分割需要注意什么？8.分割胚胎的操作环境及分割后胚胎的去向？9.胚胎分割的过程（图2-25要求熟悉），性别鉴定的取样部位？性别鉴定的方法？10.胚胎分割的优点?11.胚胎分割的局限性（了解）三、胚胎分割3 知识梳理知识梳理2.注意，基因工程是_的操作

12、DNA分子水平上1.细胞工程：指应用细胞生物学、分子生物学和发育生物学等多学科的原理和方法，通过细胞器、细胞或组织水平上的操作，有目的的获得特定的细胞、组织、器官、个体或其产品的一门综合性的生物工程。根据操作对象，可分为植物细胞工程、动物细胞工程、胚胎工程三大领域。 一、细胞工程及细胞的全能性3 知识梳理知识梳理3. 细胞的全能性a. 细胞的全能性概念：细胞经过分裂和分化后，仍然具有产生完整生物体或分化成其他各种细胞的潜能。b. 细胞具有全能性的原因：细胞内含有形成完整个体所需的全套遗传信息。c. 体现细胞的全能性的标志： 细胞 完整个体或其他各种细胞实例：1）胡萝卜韧皮部细胞发育成完整植株

13、2）受精卵发育成个体（动植物） 3）蜜蜂受精卵发育成工蜂，卵细胞发育成雄峰 4）用一片叶子、一片花瓣、一粒花粉繁殖出新的植株d. 不体现细胞的全能性的实例： 在生物的生长发育过程中，并不是所有的细胞都表现出全能性，比如，芽原基只能发育为芽，叶原基只能发育为叶。e. 不体现细胞的全能性的原因： 基因在特定时间、空间条件下选择性表达。受精卵生殖细胞体细胞；植物细胞动物细胞；分化程度低的细胞分化程度高的细胞f. 细胞的全能性大小：3 知识梳理知识梳理细胞全能性实例：-多肉进行叶插繁殖1.选取多肉上健康、饱满的叶片。2.用剪刀切下整片叶片，切口要平滑、整齐。也可以直接用手轻轻掰下叶片。3.平躺放在沙床

14、上，叶片间隔相聚23厘米。4.叶片切口不要有碰脏，摆放通风处23天，晾干。5.待叶片晾干后移至半阴处养护。6.约23周后生根，或从叶基处长出不定芽。7.叶插成功3 知识梳理知识梳理二、植物组织培养技术外植体脱分化愈伤组织再分化胚状体、根、芽等试管苗驯化移栽完整植株1.植物组织培养：3. 一般过程：指离体的植物器官、组织或细胞等，培养在人工控制的培养基上，给予适宜的培养条件，诱导其分化为完整植株的技术。移栽成活2.理论基础：细胞的全能性 外植体如：茎尖、根尖适宜的温度、pH值、养料、激素、充足氧气、无菌环境3 知识梳理知识梳理4. 详解1）外植体：离体培养的植物器官、组织或细胞2）脱分化：已分化

15、的细胞,经过诱导后,失去其特有的结构和功能而转变成未分 化细胞的过程。注意：要进行遮光3）愈伤组织：经激素诱导脱分化形成。由一团排列疏松而无规则,高度液泡化 的呈无定形状态的薄壁细胞组成。注意：无叶绿体，可进行有丝 分裂。4）再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养,又可以重新分化成胚状体、 根、芽等,这个过程叫做再分化。注意：需要光照，因为芽发育成 叶，叶肉细胞中叶绿素的合成需要光照二、植物组织培养技术3 知识梳理知识梳理案例：菊花的组织培养外植体脱分化愈伤组织再分化胚状体、根、芽等试管苗完整植株移栽1. 原理：2. 目的：1）了解植物组织培养的基本原理2）了解生长素和细胞分裂素的浓度、用量

16、比例对菊花愈伤组织形成 和分化的影响3）尝试进行植物组织培养3. 步骤： 1）制备外植体；2）接种到诱导愈伤组织培养基3）接种到诱导生芽培养基；4）接种到诱导生根培养基5）移栽3 知识梳理知识梳理菊花的组织培养酒精30S无菌水2-3次次氯酸钠溶液30min幼嫩的菊花茎段2-3次无菌水洗超净工作台或接种箱消毒与无菌水冲洗切割与接种脱分化 避光有光时，往往容易形成维管组织，而不易形成愈伤组织。愈伤组织培养培养温度：18-220C3 知识梳理知识梳理接种室试管苗若先生根后面就不易生芽移栽培养室3 知识梳理知识梳理4. 注意 1）实验中使用的培养基和所有的器械都要灭菌。接种操作必须在酒精灯火焰旁进行，

17、并且每次使用后 的器械都要灭菌。 2）接种时注意外植体的方向，不要倒插。 3）诱导愈伤组织期间一般不需要光照，在后续的培养过程中，每日需要给予适当时间和强度的光照。 4）植物组织培养中两个重要激素：生长素和细胞分裂素。它们比值不同，作用不同。若生长素含量高 （生长素/细胞分裂素1），促进根的分化；若细胞分裂素含量高（生长素/细胞分裂素1），促进芽的分化；若含量相当，促进愈伤组织的形成。5. 归纳细胞表现全能性的条件 1）离体状态； 2）无菌操作 3）种类齐全、比例适合的营养物质 4）植物激素（主要是生长素和细胞分裂素）诱导和调节 5）适宜的外界条件（温度、pH、光照等）3 知识梳理知识梳理三、

18、植物体细胞杂交技术 欲培育地上长番茄和地下结马铃薯的“超级作物”。你有什么好妙招？利用传统有性杂交方法能实现吗？为什么？不能，因为不同种生物之间存在着生殖隔离3 知识梳理知识梳理细胞A细胞B原生质体B原生质体A人工诱导融合，并筛选融合原生质体再生出细胞壁杂种细胞AB脱分化愈伤组织再分化杂合植株去壁去壁原生质体融合植物组织培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交过程示意图酶解法3 知识梳理知识梳理3. 融合实例:二、植物体细胞杂交技术1. 概念：将不同来源的植物细胞，在一定条件下融合成杂种细胞，并把杂种细胞培育成新植物体的技术。 4. 步骤说明:1）酶解法去壁：细胞壁纤维素酶、果胶酶原生质体2）理化法促

19、融：物理法：电融合法、离心法化学法：聚乙二醇融合法、高Ca2+ 高pH融合法等3）融合的原生质体（不同来源的植物体细胞）再生出细胞壁为杂种细胞，可诱导形成愈伤组织5. 意义: 打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种。 体细胞杂交利用了细胞膜具有一定的流动性。杂种细胞培育成植株利用了植物细胞的全能性。2. 原理：拓展：原生质体融合成功标志：杂种细胞再生出细胞壁；植物体细胞杂交成功的标志：形成杂种植株。3 知识梳理知识梳理一、植物繁殖的新途径快速繁殖1.概念：用于快速繁殖优良品种的植物组织培养技术称为快速繁殖技术，也叫作微型繁殖技术2.优点：1）保持优良品种的遗传特性；2）高效快速地实现种

20、苗的大量繁殖； 3）不受自然生长季节的限制3.实际应用：运用组织培养的途径，一个单株一年可以繁殖几万到几百万个植株。例如一株葡萄一年繁殖到3万多株；一株兰花一年繁殖到400万株；快速繁殖经济苗木、名贵花卉、珍稀濒危植物等这类自然繁殖速度缓慢，繁殖效率低下或优良性状不易保持的植物。培养无籽西瓜石斛兰花3 知识梳理知识梳理无性繁殖的作物，容易将病毒传染给后代。病毒积累，导致作物产量降低、品质变差。植物分生区病毒极少，切取茎尖进行植物组织培养，可获得脱毒苗。注意注意：脱毒苗不等于抗毒苗，与微型繁殖相比较， 二者无本质区别，只是取材部位不同。脱毒草莓普通草莓1. 原因：2. 方法：作物脱毒3 知识梳理

21、知识梳理脱毒产品甘蔗香蕉马铃薯菠萝3 知识梳理知识梳理选择亲本有性杂交F1代花药离体培养单倍体植 株 诱 导染色体加倍可 育纯合子选择所需类型二、作物新品种的培育单倍体育种后代都是纯合子，能稳定遗传明显缩短育种年限，节约了大量的人力和物力。 (1)方法:花药的离体培养获得单倍体植株，然后经过诱导染色体加倍,当年就能培育出遗传性状相对稳定的纯合植株。 (3)优点: (2)过程:3 知识梳理知识梳理第2年第1年配子：DTDtdTdt单倍体幼苗：DTDtdTdt花药离体培养秋水仙素DDttddTTddtt纯合体:DDTT矮抗 P高杆抗病 DDTT矮杆感病 ddttF1高杆抗病 DdTt单倍体育种选择

22、矮秆抗病即为新品种花药花粉细胞培养愈伤组织分化出小植物单倍体植株接种脱分化再分化移栽 案例花药离体培养3 知识梳理知识梳理（4） 应 用水稻小麦烟草柏树3 知识梳理知识梳理2.突变体的利用 对植物组织培养过程中得愈伤组织进行诱变处理，促其发生突变，诱导分化成植株，筛选对人们有利突变体,进而培育新品种。外植体新品种筛选培育愈伤组织 脱分化 多种突变体诱导分化诱变处理白三叶草抗病、抗盐、含高蛋白、高产。3 知识梳理知识梳理植物组织培养过程中，由于培养细胞一直处于不断增值的状态，易受到培养条件和诱变因素（如射线、化学物质等）的影响而产生突变。1.产生：2.利用：4.成就：筛选对人们有用的突变体,进而

23、培育新品种各国的科学家用这种方法已经筛选到抗病、抗盐、含高蛋白，以及高产的突变体，有的已用于生产。 突变体的利用3.原理：基因突变和植物细胞的全能性。5.优点：提高变异的频率，加速育种进程。大幅度地改良某些性状。难以控制突变方向，有利性状比较少，需要大量处理实验材料。6.缺点：筛选培育脱分化诱导分化外植体愈伤组织诱变处理多种突变体新品种3 知识梳理知识梳理三、细胞产物的工厂化生产4.一般组织培养到愈伤组织即可，因为此时细胞分裂能力旺盛，代谢快，有利于产物生成。1. 次生代谢物：植物代谢产生的一般认为不是植物基本生命活动所必需的产物。特点：是一类小分子有机化合物（如酚类、萜类和含氮化合物等），在

24、植物的抗病、抗虫等方面发挥作用，也是很多药物、香料和色素等的重要来源。2. 细胞产物的工厂化生产：人们期望利用植物细胞培养来获得目标产物，这个过程就是细胞产物的工厂化生产3. 细胞产物种类： 蛋白质，脂肪，糖类，药物，香料，生物碱等5.实例：紫草宁、紫杉醇、人参皂苷3 知识梳理知识梳理1.动物细胞培养的概念 从动物体中_相关的_，将它_，然后在_下，让这些细胞_和_的技术；2.原理：_3.地位：_4.过程中的关键操作：_和_取出组织分散成单个细胞适宜的培养条件生长增殖细胞增殖（有丝分裂）动物细胞工程的基础原代培养传代培养一、动物细胞培养动物细胞培养的条件营养条件其他条件无菌、无毒的环境适宜的温

25、度、pH和渗透压适宜的气体环境糖类、氨基酸、无机盐、维生素等二、动物细胞培养的条件3 知识梳理知识梳理1.营养（1）成分已知成分：将细胞所需的_（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按其_和_严格配制而成的培养基，称为_未知成分：使用合成培养基时，通常需加入_等一些天然成分 为什么？_（2）培养基的物理性质 培养动物细胞一般使用_，也称为_营养物质种类所需量合成培养基血清血清中含有尚未全部研究清楚的细胞所需的营养物质液体培养基培养液注意：这里的糖类不包括淀粉、蔗糖等2.无菌、无毒的环境（1）保证无菌、无毒环境的具体措施对_和_进行_处理；在_下进行操作；还需要_（2）思考题为什么培养液需要定期更换

26、？ _如何防止培养过程中的微生物污染？ _培养液所有培养用具灭菌无菌环境定期更换培养液在细胞培养液中添加一定量的抗生素以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害3 知识梳理知识梳理3.温度、pH和渗透压（1）适宜的温度哺乳动物细胞培养的温度多以_为宜；（2）适宜的pH多数动物细胞生存的适宜pH为_（3）适宜的渗透压维持适宜渗透压的目的_36.50.57.2-7.4维持细胞正常的形态和功能4.气体环境（1）组成动物细胞培养所需气体主要有_和_（2）不同气体的作用O2：_CO2：_（3）培养容器通常采用_或_（4）培养仪器含有_和_的混合气体的_O2CO2O2是细胞代谢所必需的CO2的主

27、要作用维持培养液的pH培养皿松盖培养瓶95%空气5%CO2CO2培养箱3 知识梳理知识梳理取动物组织制成细胞悬液转入培养液原代培养分瓶传代培养动物细胞培养过程图解三、动物细胞培养的过程3 知识梳理知识梳理重要名词解释原代培养 通常将_的细胞培养，即动物组织经_后的_称为原代培养；传代培养 将_的细胞培养称为传代培养；细胞贴壁 _体外培养的细胞需要_才能生长增殖，这类细胞往往贴附在培养瓶的_上，这种现象称为细胞贴壁；接触抑制 当_细胞生长到_时，细胞通常会_；分瓶之前处理初次培养分瓶后大多数贴附于某些基质表面瓶壁贴壁表面相互接触停止分裂增殖3 知识梳理知识梳理1.取动物组织（1）取材_或_的组织

28、、器官（2）取材原因_动物胚胎幼龄动物细胞分化程度低，增殖能力强，容易培养动物细胞培养的具体过程2.制成细胞悬液（1）制成细胞悬液的步骤_（2）将组织分散成单个细胞的原因从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞_，彼此_；_（3）将组织分散成单个细胞的方法_靠在一起限制了生长和增殖将组织分散成单个细胞用培养液将细胞制成细胞悬液机械法用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间能使细胞与培养液充分接触，更易进行物质交换3 知识梳理知识梳理思考：1.用胰蛋白酶分散细胞，可以说明什么问题？2.可以用胃蛋白酶处理吗？为什么？3.酶解法较温和，一定不会对动物细胞造成损伤，对吗？动物细胞间的物质主要是蛋白质不可以；胃

29、蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行不对，使用胰蛋白酶时，要控制好作用时间，因为胰蛋白酶不仅能分解细胞间的蛋白质，长时间作用还会分解细胞膜蛋白等，对细胞造成损伤。3 知识梳理知识梳理3.原代培养（1）具体做法 将_放入_内（2）体外培养细胞的两大类 _；_（3）两类细胞的生长特点 悬浮生长类 _ _贴壁生长类 _细胞悬液培养皿或培养瓶会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻除受密度、有害代谢物、营养物质影响外，还会发生接触抑制能够悬浮在培养液中生

30、长增殖大多数需要贴附于某些基质表面才能生长增殖（细胞贴壁）3 知识梳理知识梳理思考：“细胞增殖到互相接触的时候，糖蛋白识别了这种信息，就会使细胞停止继续繁殖，出现接触抑制的现象”试结合上述解释，举例说明哪种细胞无接触抑制现象，并阐述原因癌细胞,因为癌细胞的细胞膜上糖蛋白等物质减少3 知识梳理知识梳理4.分瓶、传代培养（1）需分瓶进行传代培养的原因 _ _ _（2）分瓶的具体做法 收集细胞 a.悬浮生长类 _ b.贴壁生长类 _悬浮培养的细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质等因素而分裂受阻。贴壁细胞在生长增殖时，除受上述因素影响外，还会发生接触抑制现象。直接用离心法收集重新用胰

31、蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集将收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养3 知识梳理知识梳理思考：1.离心的作用？2.动物细胞培养技术有没有体现动物细胞的全能性？在沉淀中得到细胞，同时去掉上清液中的胰蛋白酶未体现，因为动物细胞培养只是细胞增殖的过程3 知识梳理知识梳理取动物组织制成细胞悬液转入培养液原代培养分瓶传代培养动物胚胎、幼龄动物机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理将组织分散成单个细胞用培养液将细胞制成细胞悬液一类细胞能够悬浮在培养液中生长增殖大多数需要贴附于某些基质表面才能生长增殖直接用离心法收集重新用胰蛋白酶等处理，使之分散成单个细胞，然后再用离心法收集3 知识梳理知识梳理

32、拓展1（了解）：正常细胞能否一直传代培养下去？ 不可以； 细胞的传代培养一般传至10代后就不易传下去，这时细胞能保持细胞正常的二倍体核型；传至10-50代左右时，增殖会逐渐缓慢，以至于完全停止，这时部分细胞的细胞核型可能会发生变化，这一阶段的细胞称为细胞株；继续传代培养时，少部分细胞会克服细胞寿命的自然极限，获得不死性，这些细胞已经发生了突变，正在朝着等同于癌细胞的方向发展，这一阶段的细胞称为细胞系，细胞系的遗传物质一定改变了。3 知识梳理知识梳理植物组织培养动物细胞培养原理培养前处理取材培养基的物理性质培养基的成分特有成分植物细胞的全能性细胞增殖离体用机械法或胰蛋白酶、胶原蛋白酶将组织细胞分

33、散开离体植物器官、组织、细胞动物胚胎或幼龄动物的组织、器官固体液体(又称培养液)有机营养成分无机营养成分植物激素糖类、氨基酸、无机盐、维生素等营养物质及一些天然成分如血清植物激素血清3 知识梳理知识梳理植物组织培养动物细胞培养特殊环境条件结果是否体现细胞的全能性过程相同点再分化需光气体环境一般获得新的植株获得大量细胞是否1.培养过程中细胞都进行有丝分裂，不涉及减数分裂；2.均需无菌操作，需要适宜的温度、pH等条件3 知识梳理知识梳理1.分布 干细胞存在于_、_和_等多种组织和器官中；2.分类 干细胞包括_和_等（1）胚胎干细胞（简称ES细胞）分布：存在于_中特点 _ _应用实例 _早期胚胎骨髓

34、脐带血胚胎干细胞成体干细胞早期胚胎具有分化为成年动物体内的任何一种类型的细胞，并进一步形成机体的所有组织和器官甚至个体的潜能ES细胞在体外分化成心肌细胞、神经元细胞和造血干细胞等四、干细胞培养及其应用3 知识梳理知识梳理（2）成体干细胞分布：存在于_中常见类别：包括_中的_、_中的 _、_中的_等；特点 _ _发现最早、研究最多的、应用最成熟的实例 _成体组织或器官内骨髓造血干细胞神经系统神经干细胞睾丸精原干细胞一般认为，成体干细胞具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织，不具有发育成完整个体的能力造血干细胞，主要存在于成体的骨髓、外周血和脐带血中3 知识梳理知识梳理3.干细胞的应用 有着_

35、能力及_潜能的干细胞，与_的 _等密切相关；4.干细胞应用面临的问题存在_自我更新分化组织、器官发育、再生和修复类型应用造血干细胞神经干细胞诱导多能干细胞（iPS细胞）治疗白血病及一些恶性肿瘤放疗或化疗后引起的造血系统、免疫系统功能障碍等疾病治疗神经组织损伤和神经系统退行性疾病（如帕金森病、阿尔茨海默病等）可治疗小鼠的镰状细胞贫血症，在治疗阿尔兹海默病、心血管疾病等领域的研究也取得了新进展导致肿瘤发生的风险3 知识梳理知识梳理思考：干细胞可以治疗某些顽症的原理是什么？干细胞可以被诱导分化形成新的组织细胞，经移植可使坏死或退化部位得以修复并恢复正常功能。3 知识梳理知识梳理1）胚胎干细胞的局限性

36、 胚胎干细胞必须从_中获取 ，涉及_；2）诱导多能干细胞概念 通过体外诱导_，获得_的一种细胞，称为诱 导多能干细胞，简称_3）诱导多能干细胞优点诱导过程_iPS细胞可以_，将它移植回病人体内后，理论上可以_；胚胎伦理问题成纤维细胞类似胚胎干细胞iPS细胞无需破坏胚胎来源于病人自身的体细胞避免免疫排斥反应*因此，普遍认为iPS细胞的应用前景优于胚胎干细胞4.关于诱导多能干细胞3 知识梳理知识梳理5.应用取成纤维细胞转入相关因子细胞转化为iPS细胞诱导iPS细胞定向分化为多种组织细胞移植回病人体内3 知识梳理知识梳理6.制备iPS细胞的其他方法_7.iPS细胞的来源_借助载体将特定基因导入细胞中

37、诱导形成iPS细胞直接将特定蛋白导入受体细胞中诱导形成iPS细胞用小分子化合物来诱导形成iPS细胞诱导形成iPS细胞成纤维细胞以及已分化的T细胞、B细胞3 知识梳理知识梳理1.概念使_或_动物细胞结合形成_细胞的技术2.结果形成的_具有_3.原理_4.意义_5.诱导融合的常用方法_、_和_两个多个一个杂交细胞原来两个或多个细胞的遗传信息细胞膜具有一定的流动性电融合法灭活病毒诱导法注意：灭活病毒诱导法是动物细胞融合特有的诱导融合方法突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 一、动物细胞融合技术PEG融合法3 知识梳理知识梳理6.动物细胞融合完成的标志_7.应用细胞融合技术已经成为研究_、_、_和

38、_等的重要手段利用动物细胞融合技术发展起来的_，为_开辟了新途径细胞核的融合细胞遗传细胞免疫肿瘤培育生物新品种杂交瘤技术制造单克隆抗体1)“灭活病毒”中灭活的具体含义是什么？2) 灭活病毒诱导细胞融合的原理是什么？用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。拓展3 知识梳理知识梳理植物体细胞杂交动物细胞融合原理细胞融合前的处理方法诱导细胞融合的方法细胞融合成功的标志主要用途意义细胞膜具有一定的流动性植物细胞的全能性细胞膜具有一定的流

39、动性用果胶酶和纤维素酶去除细胞壁用胰蛋白酶或胶原蛋白酶使细胞分散成单个细胞电融合法、离心法；聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+-高pH融合法PEG融合法电融合法灭活病毒诱导法再生出细胞壁细胞核的融合获得完整的杂种植株主要用于制造单克隆抗体打破生殖隔离，实现远缘杂交育种，培育植物新品种突破了有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能3)动物细胞融合和植物体细胞杂交比较（重点）3 知识梳理知识梳理思考：a.B淋巴细胞的特点（优点和局限性）？b.哪种细胞可以无限增殖？c.癌细胞的特点（优点和局限性）？d.有什么办法能得到既能迅速大量增殖又能产生大量特定抗体的细胞？1.研究背景（1）早期获得抗体的方法_（2

40、）上述抗体的缺点_（3）大量制备单一抗体的思路和需解决的问题向动物体内反复注射某种抗原，使动物产生抗体，然后从动物血清中分离所需抗体产量低、纯度低、特异性差每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体单一B淋巴细胞细胞群选择克隆产生大量纯度高特异性强的抗体注意：在体外培养条件下一个B淋巴细胞不可能无限增殖二、单克隆抗体的制备能产生单一的特异性抗体，但不能无限增殖癌细胞能在体外大量增殖，但不能产生抗体动物细胞融合3 知识梳理知识梳理（4）单克隆抗体制备思路一种B淋巴细胞（只产生一种特定抗体）能在体外大量增殖的骨髓瘤细胞动物细胞融合杂交瘤细胞动物细胞培养大量的特定抗体米尔斯坦科勒由于发明了单克隆抗体的制备

41、技术，米尔斯坦和科勒于1984年获得了诺贝尔生理学或医学奖3 知识梳理知识梳理2.过程注射特定的抗原多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合未融合的细胞多种杂交细胞（包括B-B细胞、瘤-瘤细胞、杂交瘤细胞）动物细胞融合培养骨髓瘤细胞杂交瘤细胞：瘤-B1,瘤-B2,瘤-B3只考虑两两融合，诱导融合之后，一定会得到所需的杂交瘤细胞吗？注意（了解）：得到的杂交瘤细胞一定是所需的吗？杂交瘤细胞并不纯，因为从脾脏获得的B淋巴细胞不纯（既有未免疫的B淋巴细胞，又有产其他抗体的B淋巴细胞，以及能产所需抗体的B淋巴细胞），因此要进行第二次筛选。3 知识梳理知识梳理未融合的细胞未融合的细胞多种杂交细胞多种杂交细胞杂交瘤

42、细胞杂交瘤细胞抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（能抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（能产生特定抗体的杂交瘤细胞）产生特定抗体的杂交瘤细胞）用特定的选择培养基用特定的选择培养基第一次筛选第一次筛选克隆化培养、抗体检测克隆化培养、抗体检测第二次筛选（可进行多次）第二次筛选（可进行多次）注射到小鼠腹腔内注射到小鼠腹腔内体外培养体外培养获取单克隆抗体获取单克隆抗体从小鼠腹水中从小鼠腹水中从细胞培养液中从细胞培养液中动动物物细细胞胞培培养养杂交瘤细胞：杂交瘤细胞：瘤瘤-B-B1 1, ,瘤瘤- -B B2 2, ,瘤瘤- -B B3 32.2.过程过程3 知识梳理知识梳理补充了解克隆化培养和抗体检测有限稀释法每一个

43、孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞侧面模拟图克隆化培养一段时间取上清液进行抗体检测3 知识梳理知识梳理未融合的细胞多种杂交细胞杂交瘤细胞抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞（能产生特定抗体的杂交瘤细胞）用特定的选择培养基第一次筛选克隆化培养、抗体检测第二次筛选（可进行多次）注射到小鼠腹腔内体外培养获取单克隆抗体从小鼠腹水中从细胞培养液中注射特定的抗原多种B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合动物细胞融合动物细胞培养培养骨髓瘤细胞2.过程3 知识梳理知识梳理（1）该过程中应用到的技术_（2）原理_（3）注射特定抗原的目的_（4）诱导融合的方法_ 动物细胞特有的为_动物细胞融合、动物细胞培养细胞膜具有一定的流动性、细胞增殖

44、用特定的抗原对小鼠进行免疫，并从该小鼠的脾中得到能产生特定抗体的B淋巴细胞PEG融合法、电融合法、灭活病毒诱导法灭活病毒诱导法2.过程(重要考点总结）（5）第一次筛选的目的_（6）第一次如何筛选_（7）筛选原理_筛选获得杂交瘤细胞用特定的选择培养基进行筛选在选择培养基上，未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡，只有融合的杂交瘤细胞才能生长3 知识梳理知识梳理（8 8）杂交瘤细胞的）杂交瘤细胞的特点特点_（9 9）第二次筛选的目的第二次筛选的目的_（1010）如何筛选如何筛选_（1111）选择抗体检测呈）选择抗体检测呈_性的杂交瘤细胞，即性的杂交瘤细胞，即 _ _（1212）抗体检测原

45、理抗体检测原理_获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞用用9696孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的孔板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下，进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）情况下，进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）阳阳分泌的抗体能与特定的抗原结合分泌的抗体能与特定的抗原结合抗原和抗体能够特异性结合抗原和抗体能够特异性结合( (分子水平的鉴定）分子水平的鉴定）既能迅速大量增殖，又能产生抗体既能迅速大量增殖，又能产生抗体（1313）如何获取大量所需杂交瘤细胞如何获取大量所需杂交瘤细胞_（1414）如何获取单克隆抗

46、体如何获取单克隆抗体体外体外培养培养_小鼠腹腔内小鼠腹腔内培养培养_在体外条件下大规模培养（接种于培养液在体外条件下大规模培养（接种于培养液中）或注射到小鼠腹腔内增殖中）或注射到小鼠腹腔内增殖从细胞培养液中获取从细胞培养液中获取从小鼠腹水中获取从小鼠腹水中获取3 知识梳理知识梳理（15）单克隆抗体的优点_（16）试比较两次筛选的原因、方法和结果第一次筛选第二次筛选原因方法结果诱导融合后得到的细胞中，除杂交瘤细胞之外，还有未融合的亲本细胞，也有融合的具有同种核的细胞由于小鼠在生活中还受到其他抗原的刺激，所以经第一次筛选之后获得的杂交瘤细胞中有能产生其他抗体的细胞用特定的选择培养基进行筛选用96孔

47、板培养，在每一个孔中尽量只接种一个杂交瘤细胞的情况下，进行克隆化培养和抗体检测（进行多次筛选）筛选获得杂交瘤细胞获得足够数量的能分泌所需抗体的杂交瘤细胞能准确地识别抗原的细微差异能准确地识别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合，并且可以大量制备3 知识梳理知识梳理应用诊断试剂运载药物治疗疾病三、单克隆抗体的应用3 知识梳理知识梳理1.用作诊断试剂（1）原理_（2）具体应用及部分实例多种疾病的诊断实例：利用同位素或荧光标记的单克隆抗体在特定组织中成像的技术，可定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病。病原体的鉴定实例：乙肝病毒表面抗原定量检测试剂盒其他类型诊断实例：早早孕诊断试剂盒单克隆抗体能准确地识

48、别抗原的细微差异，与特定抗原发生特异性结合三、单克隆抗体的应用3 知识梳理知识梳理2.运载药物（1）具体应用实例与药物结合，制成_，杀伤癌细胞；ADC通常由_、_和_三部分组成；（2）原理通过将药物与_的单克隆抗体结合，实现对肿瘤细胞的_；发挥杀伤作用的为_；单克隆抗体作用为_；（3）优点 _抗体-药物偶联物（ADC）抗体接头药物能特异性识别肿瘤细胞抗原选择性杀伤放射性同位素、化学药物或细胞毒素靶向运输作用靶点清楚、毒副作用小（不会对健康细胞造成伤害）3 知识梳理知识梳理3 知识梳理知识梳理讨论2：除了细胞毒素，还有哪些物质理论上可以作为ADC偶联的药物？可以用放射性同位素标记单克隆抗体进行靶

49、向放疗。一些作用于细胞信号转导通路的药物可以通过阻断肿瘤细胞的信号通路来抑制其生长，理论上也可以将这些药物与单克隆抗体结合进行治疗讨论1：ADC的抗体和药物各具有什么作用？抗体主要发挥靶向运输作用，即通过特异性结合靶细胞表面的抗原，将连接的药物输送到靶细胞；药物发挥治疗效应，如杀伤靶细胞讨论3：单克隆抗体诊断试剂盒和ADC在临床应用上各具有什么优势？单克隆抗体诊断试剂盒中的单克隆抗体只与特定的抗原反应，因此检测的特异性和灵敏度大大提高。生产单克隆抗体的杂交瘤细胞可以传代培养、冷冻保存和复苏利用，有利于控制产品的质量和标准化生产诊断试剂盒。ADC能够协同发挥抗体特异性识别的靶向作用和细胞毒素对肿

50、瘤细胞的杀伤作用，因此它在临床上具有靶点清楚、毒副作用小等优点。3 知识梳理知识梳理3.治疗疾病单克隆抗体单独使用，也可直接用于治疗疾病；实例：利妥昔单抗（美罗华）是一种针对CD20抗原的人鼠嵌合型单克隆抗体，是第一个被FDA批准用于临床治疗的单抗。进入人体后能通过介导抗体依赖的细胞毒性作用、补体依赖的细胞毒性作用和抗体与CD20分子结合引起的直接效应，抑制细胞生长，改变细胞周期以及凋亡等方式杀死淋巴瘤细胞。3 知识梳理知识梳理1.概念 将动物一个细胞的_移入_中，使这个_发育成_，继而发育成_的技术。2.结果 形成_并发育成_，继而发育成 _3.原理：_4.生殖方式：_细胞核去核的卵母细胞重

51、新组合的细胞新胚胎动物个体注意：用核移植的方法得到的动物称为克隆动物。重新组合的细胞新胚胎动物个体动物细胞核的全能性无性生殖注意：若为体细胞核移植，则原理为“动物体细胞核的全能性”一、动物细胞核移植技术概述3 知识梳理知识梳理5.哺乳动物核移植分类胚胎细胞核移植动物胚胎细胞分化程度_，表现全能性_体细胞核移植动物体细胞分化程度_，表现全能性_6.非人灵长类动物体细胞核移植的困难原因_细胞的_在_中_其_，这导致了_。对非人灵长类动物_进行操作的技术尚不完善。供体细胞核去核卵母细胞不能完全恢复分化前的功能状态胚胎发育率低胚胎低相对容易高十分困难注意：因此动物体细胞核移植的难度明显高于胚胎细胞核移

52、植3 知识梳理知识梳理重构胚早期胚胎通过电融合法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞用物理或化学方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育过程将胚胎移入受体（代孕）母牛体内采集牛卵巢中的卵母细胞，在体外培养到M期去核的卵母细胞供体细胞培养将供体细胞注入去核的卵母细胞高产奶牛（供体）生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛通过显微操作去核从供体身体的某一部位上取体细胞二、体细胞核移植的过程（以体细胞克隆牛为例）3 知识梳理知识梳理相关信息（P54了解） 目前动物细胞核移植技术中普遍使用的去核方法是显微操作法，也有人采用梯度离心、紫外线短时间照射和化学物质处理等方法。这些方法是在没有穿透卵母细胞透明带的情况下

53、去核或使其中的DNA变性。3 知识梳理知识梳理动物细胞核移植动物细胞培养胚胎移植动物细胞融合重构胚早期胚胎通过电融合法使两细胞融合，供体核进入卵母细胞用物理或化学方法激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育过程将胚胎移入受体（代孕）母牛体内采集牛卵巢中的卵母细胞，在体外培养到M期去核的卵母细胞供体细胞培养将供体细胞注入去核的卵母细胞通过显微操作去核高产奶牛（供体）从供体身体的某一部位（如耳）上取体细胞生出与供体奶牛遗传物质基本相同的犊牛1.该过程中应用到的技术_动物细胞核移植技术动物细胞培养技术动物细胞融合技术胚胎移植技术二、体细胞核移植的过程（重要知识点总结）3 知识梳理知识梳理2.采集的卵母细胞

54、应培养至_3.选择M期卵母细胞的原因_ _4.卵母细胞去核的方法_5.“去核”去的是什么？_M期（减数分裂中期）含有促进细胞核表现全能性的物质和营养条件细胞体积大，易于操作显微操作法去除的为纺锤体-染色体复合物注意：去核时，由于M期卵母细胞核的位置靠近第一极体，用微型吸管一般一并吸出第一极体。3 知识梳理知识梳理6.去核的原因_7.供体细胞注入卵母细胞的优点 _8.诱导融合的方法_9.融合的结果_10.重构胚概念_使核移植得到的胚胎或动物核内遗传物质全部来自有重要利用价值的动物(P54)对卵母细胞损伤较小注意：实质是直接将供体细胞注入去核卵母细胞的透明带内电融合法供体核进入卵母细胞，形成重构胚

55、人工重新构建的胚胎，具有发育成完整个体的能力3 知识梳理知识梳理11.激活重构胚的方法物理方法 _化学方法_12.以上方法处理重构胚的目的 _13.实验结论_电刺激Ca2+载体、乙醇和蛋白酶合成抑制剂激活重构胚，使其完成细胞分裂和发育过程证明了动物已分化的体细胞的细胞核具有全能性3 知识梳理知识梳理用上述技术培育的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？少部分DNA来自供体细胞和受体卵母细胞的细胞质：克隆动物绝大部分DNA来自供体动物的细胞核，但线粒体中的DNA（细胞质中的DNA）同时来自供体细胞和受体卵母细胞。性状是基因与环境共同作用的结果：克隆动物所处的环境与核供体细胞

56、生活的环境不会完全相同。可能产生可遗传变异：克隆动物在个体发育过程中有可能发生基因突变、染色体变异等可遗传变异。思考3 知识梳理知识梳理应用前景畜牧生产保护濒危动物医药卫生治疗人类疾病科研 存在的问题加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育有望增加濒危物种的存活数量转基因克隆动物可以作为生物反应器，生产珍贵的医用蛋白转基因克隆动物的细胞、组织或器官可以作为异种移植的供体。以患者作为供体培育的人核移植胚胎干细胞，经过诱导分化能形成相应的细胞、组织或器官，将它们移植给患者时可以避免免疫排斥反应。研究克隆动物可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老过程。克隆一批遗传背景相同的动物，可以通过它们之间的对比来分

57、析致病基因。克隆特定疾病模型的动物，还能为研究该疾病机制和开发相应的药物提供帮助。成功率非常低各个技术环节有待进一步改进绝大多数克隆动物存在健康问题，表现出遗传和生理缺陷三、体细胞核移植技术的应用前景及存在的问题3 知识梳理知识梳理一、胚胎工程的理论基础（一）概念受精是_和_结合形成_的过程。注意：合子即_（二）场所在_下，哺乳动物的受精在_完成（三）过程包括_和_精子卵子合子受精卵输卵管内受精前的准备阶段受精阶段自然条件一、受精3 知识梳理知识梳理（1）概念 刚刚排出的精子_与卵子受精，必须在_发生_后，才能获得_，这一生理现象称为“精子获能”（2）研究精子获能机制的意义 实现了各种哺乳动物

58、在体外条件下的获能，为_的建立奠定了基础（3）使精子获能的方法直接利用_使精子获能；将精子培养在_中使其获能；不能立即雌性动物的生殖道相应的生理变化受精能力体外受精技术雌性动物生殖道人工配制的获能液注意：获能液的成分因动物种类不同而有所差异；获能液常见有效成分有肝素、Ca2+载体等；1.准备阶段1精子获能3 知识梳理知识梳理1.准备阶段1精子获能头(细胞核）颈线粒体鞘（线粒体）尾（中心体）注意：不同种动物精子的形态相似，大小略有不同，与动物的体型大小无关。（4）成熟精子结构3 知识梳理知识梳理（1）卵子一般在排出_后才能被精子穿入（2）动物排出的卵子成熟程度_有的可能是_，如马、犬等；有的可能

59、是_，如猪、羊等；（3）卵子成熟的场所排出的卵子都要在_进一步成熟（4）卵子具备与精子受精能力的时期_期2-3h不同初级卵母细胞次级卵母细胞输卵管内M2.准备阶段2卵子的准备（5）具备受精能力的卵子结构透明带卵细胞膜核第一极体3 知识梳理知识梳理3.受精阶段精子穿越卵细胞膜外的结构，如透明带精子接触卵细胞膜透明带反应卵细胞膜反应形成雄原核、雌原核，释放第二极体精子入卵雌、雄原核靠近核膜消失，形成受精卵受精结束，卵裂开始精子接触卵细胞膜精子入卵原核形成合子形成3 知识梳理知识梳理精子穿越卵细胞膜外的结构，如透明带精子接触卵细胞膜透明带反应卵细胞膜反应形成雄原核、雌原核，释放第二极体精子入卵雌、雄

60、原核靠近核膜消失，形成受精卵受精结束，卵裂开始（1）精子如何穿越卵细胞膜外结构_（2）防止多精入卵的两个屏障_（3）透明带反应具体表现_（4）卵细胞膜反应具体表现_（5）透明带反应发生时间_（6）卵细胞膜反应发生时间_释放多种酶，溶解这些结构透明带反应、卵细胞膜反应精子触及卵细胞膜的瞬间，透明带会迅速发生生理反应，阻止后来的精子进入透明带精子入卵后，卵细胞膜会立即发生生理反应，拒绝其他精子再进入卵内精子触及卵细胞膜的瞬间精子入卵后3 知识梳理知识梳理（7）雄原核的形成 精子入卵后，尾部_，原有的核膜_并_，最后形成一个_的核，叫做雄原核；（8）雌原核的形成 精子入卵后,被_的卵子完成_，_后，