果蝇大实验—反交组(生科3班)

1、果蝇综合大实验果蝇综合大实验反交组反交组成员：成员：吴斐吴斐 谢萌谢萌蒋伟芳蒋伟芳 霍倩楠霍倩楠申申童童 薛婷薛婷阮月阮月 杨杨利利均均一、实验目的一、实验目的1、通过实验掌握果蝇的杂交试验方法；2、验证和加深理解遗传定律的原理：分离定律；自由组合定律；伴性遗传定律；3、了解并掌握三点测验实验的原理及分析过程；4、掌握统计处理的方法及重组值的方法、绘制遗传图 的方法。果蝇作为遗传学研究材料的突出优点：n生长迅速，生活史较短，短时间内可获得大量子代；n容易饲养，在常温下以玉米粉做饲料就可使之生长繁殖；n突变性状多，且多数是形态突变，便于观察。n染色体数目少，加之唾腺染色体巨大，是细胞学观察的好材

2、料；二二、实验、实验原理原理25下培养：卵幼虫：5天幼虫成虫：4.2天果蝇的生活周期大约是9天果蝇的生活史受精卵一龄幼虫二龄幼虫三龄幼虫蛹成虫图一、果蝇生活史图解反交：反交： 26(26() ) 6 6( () )黑黑檀体红眼长翅直刚毛檀体红眼长翅直刚毛( () ) 灰体白眼短翅卷刚毛灰体白眼短翅卷刚毛( () )品系品系体色体色眼色眼色翅型翅型刚毛刚毛6灰白w(1)短m(1)卷sn(1)26黑檀e(3)红长直分离定律分离定律：一对等位基因在杂合子中，各自保持其独立性，在配子形成时，彼此分开，随机地进入不同的配子，在一般（正常）的情况下：F1杂合子的配子分离比未1:1，F2表型分离比是3:1，

3、基因型分离比为1:2:1。本实验采用果蝇的一对性状：灰体/黑檀体e(3)自由组合定律自由组合定律：位于非同源染色体上的两对等位基因决定的性状在杂种第二代形成配子时是自由组合的。即位于不同染色体上的2个等位基因是独立传给子代的。由分离定律可知一对等位基因决定性状在杂种第二代表型比是3:1，两对互不连锁的基因决定的性状是在杂种第二代表型比是9:3:3:1本实验采用果蝇的两对相对形状：灰体/黑檀体e(3)、红眼/白眼w(1)伴性遗传伴性遗传：果蝇的性染色体有X和Y两种，雌蝇性染色体为XX，是同配性别；雄蝇性染色体组成为XY，是异配性别。伴性基因主要位于X染色体上，而Y染色体上没有相应的等位基因，所以

4、这类遗传也叫X连锁遗传。同时，伴性遗传的基因传递特点也表现为正反交结果不同。本实验采用果蝇的一对相对性状：红眼/白眼w(1)（基因位于X染色体上）连锁定律：连锁定律：位于同染色体上的基因联合在一起伴同遗传的频率大于重新组合的频率，重组体或重组子的产生是由于在配子形成过程中同源染色体的非姊妹染色单体间发生了局部交换。%100重组型数目亲组型数目重组型数目)(重组值RF三点测交三点测交：将3个基因包括在同一次交配中，取其三杂合体与三隐形体进行测交，确定三对基因在染色体上的相对位置。三三、实验材料、实验材料果蝇： 26() 6()实验器具：培养管 、解剖镜、麻醉瓶、死蝇瓶、白瓷板、毛笔、镊子、烘干箱

5、、培养箱。药品：玉米粉,琼脂,蔗糖,酵母粉,丙酸(用于配制培养基),乙醚(用于麻醉).四、制作培养基四、制作培养基培养基的制备A：蔗糖13克，琼脂1.3克，加水100毫升，煮沸溶解。B：玉米粉17克，加水80毫升，混合均匀。将B 慢慢倒入A中，并不停搅动混合，加热成糊状后，再加1.4克酵母粉，混合均匀，稍冷却后加入1毫升丙酸，调匀后即可分装到培养瓶中。 亲本培养910天 倒出成虫8h内进行，选取处女蝇亲本培养、亲本培养、挑选挑选处女处女蝇蝇 将挑选的两种亲本类型放入同一培养瓶，培养7d后，将亲本P弃除亲本杂交产生亲本杂交产生F1F1去除亲本去除亲本 培养7d左右，选取5对转移到新的培养瓶中培养

6、，培养7d后将F1亲本弃除挑选并培养挑选并培养F1F1 2d左右，F2代出现，连续每天早中晚收集三次，统计F2数量及性状处死处死F1F1F2F2计数计数五五、实验步骤（技术路线）、实验步骤（技术路线）n一、将6号和26号品系果蝇分别培养，使其产卵。910天后，开始收集羽化的雌果蝇。此时新羽化的雌果蝇自羽化开始的10小时内尚未成熟而无交配能力，即为处女蝇。选取处女蝇时，先将培养瓶中的老果蝇全部除去，收集10小时内羽化出来的新果蝇。轻微麻醉后用解剖镜将果蝇雌雄分开，（注意：如果中途有果蝇开始苏醒，应将它们放回麻醉品中再次实施麻醉），分别放在培养瓶中，25培养待用。具体步骤具体步骤n 二、亲本杂交产

7、生F1：使用消毒过的毛笔将6只26品系的处女蝇轻扫入培养瓶中，然后保持培养瓶水平放置，以免使麻醉状态下的果蝇沾到培养基或水珠窒息而死。使用同样的方法轻扫入6只6品系雄蝇，重复23瓶，紧塞棉塞，保持水平放置直至果蝇苏醒。n 三、贴标签：贴好各培养瓶标签，标明日期、品系、交配类型、组别，将其放入25恒温培养箱中培养n四、去除亲本：培养7天（注意：第二天须去看有无果蝇死亡，如有则需补充，性别性状对号）后将杂交瓶里的所有亲本果蝇麻醉后弃除。25条件下，约7天后开始有F1成蝇出现。n五、F1观察与计数：约7天后，F1成蝇出现，麻醉F1成蝇，观察F1性状，并记录。移出56对果蝇，放到另一新培养瓶，置于25

8、恒温培养箱中培养。（注意，如有死亡及时补充）7天后，将F1杂交瓶里所有果蝇弃除，已有卵和幼虫的培养瓶放回培养箱中继续培养。n六、F2观察与计数：约2天左右，F2成蝇出现，将陆续羽化出来的F2成蝇，每天早中晚收集三次，麻醉致死后仔细观察并记录。被统计过的果蝇放到死蝇盛留器中。六、实验数据统计表六、实验数据统计表实验主要统计：F2代的各种表型和雌雄的数量性状日期灰体、红眼、长翅、直刚毛灰体、白眼、短翅、卷刚毛黑檀体、红眼、长翅、直刚毛黑檀体、白眼、短翅、卷刚毛其它雌性雄性雌性雄性雌性雄性雌性雄性总计F1F1、F2F2果蝇性状数量原始数据统计表格果蝇性状数量原始数据统计表格七、实验数据分析七、实验数

9、据分析所有的实验数据都有误差相伴，实验结果通常总是多多少少表现为偏离。统计学办法2检验，客观判断这种偏差是否是显著性的。 d (自由度)n1 2 = 查表:若P0.05，两者之间无显著差异，说明观察值与理论值之间的偏差是没有意义的，也就是说观察值符合假设。若P0.05，则两者之间差异显著，说明实验观察值不符合假设。E)(2EO分离定律分离定律形状个数灰体黑檀体其它F1总数（实际值）/O理论值/E理论比例卡方值P形状数量灰色红眼黑檀体红眼灰体白眼黑檀体白眼其它F2总数（实际值）/O理论值/E理论比例卡方值P自由组合定律自由组合定律伴性遗传伴性遗传形状数量雌性雄性红眼其它红眼白眼其它F2总计（实际

10、值）/O理论值/E理论比值卡方值P八、实验结果八、实验结果根据实验数据及分析是否能证实三个遗传定律，最终得出一份实验报告九九、实验中可能存在的困难、实验中可能存在的困难、问题及解决方法问题及解决方法1 1. .亲本雌蝇为何一定要选用处女蝇？怎样才能保证所选雌亲本雌蝇为何一定要选用处女蝇？怎样才能保证所选雌蝇为处女蝇？蝇为处女蝇？ 答：由于雌蝇生殖器官中有贮精囊，一次交配可保留大量精子，供多次排卵受精用，如果不选取处女蝇而直接进行交配，则该果蝇可能已有其他果蝇的精子而使产生后代，不是与所用雄果蝇交配而得到的后代！因此做杂交实验前必须收集未交配过的处女蝇。 雌果蝇自羽化开始10小时之内尚未成熟而无

11、交配能力。选择处女蝇时，先把培养瓶中的老果蝇全部除去，收集8小时之内羽化出来的新果蝇，麻醉后在解剖镜下将雌雄果蝇分开，这时得到的雌果蝇应该全部都是处女蝇。 如果要验证选取的处女蝇是否准确，先不要放入雄蝇，2天后看雌蝇是否产卵，如果产卵就不是处女蝇了。当证明确实是处女蝇的情况下再放入。2.在进行亲本杂交或在进行亲本杂交或F1自交一定时间后为什么要释放杂交自交一定时间后为什么要释放杂交亲亲本或本或F1？ 答：因为当F1或F2代的成虫出现并有生育能力后，如果不及时将亲代释放，就会造成回交，对实验结果有很大影响。3.3.反交组为何不能直接进行三点测验？如果需要进行反交反交组为何不能直接进行三点测验？如

12、果需要进行反交组的三点测验，应如何对实验过程加以调整组的三点测验，应如何对实验过程加以调整？ 答：三点测验原理由实验原理可知，是用三显性基因与三隐性基因杂交，制成三因子杂种，再把雌性杂种和三隐性个体测交。由于基因间的交换，从而在下代中得到种不同表型的个体。而由于是与三隐性雄性杂交，所以子代表现型即为亲本的雌性杂种的配子类型。而我们组所进行的实验是以号为雄性亲本（雄果蝇和雌家蚕的特殊性），26号为雌性亲本，而且号亲本所显示的白眼短翅，卷毛均为染色体上隐性基因的表型。这样在进行杂交后，我们所得到的代中雄性个体均为红眼，长翅，直毛的个体，是一个显性个体。这与三点测验所要求的三隐性雄性个体性状不符。实

13、验改进: 反交组做三点测验,可选用F1代雌蝇和亲本型雄蝇做回交,统计F2性状，由其后代的统计结果可用三点测验法来进行基因定位4.4.伴性遗传的性状在正交和反交的后代中为什么会出伴性遗传的性状在正交和反交的后代中为什么会出现差异？与性别的关系如何现差异？与性别的关系如何？ 正交正交 P P 红眼红眼 X X+ +X X+ + 白眼白眼X Xw wY Y F F1 1 红眼红眼 X X+ +X Xw w 、 X X+ +Y Y （、 ） F F2 2 X X+ +X X+ + : :X X+ +X Xw w : :X X+ +Y : Y : X Xw wY Y 红眼：白眼红眼：白眼 = 3 = 3

14、 ：1 1 雌性：雄性雌性：雄性 = 1 = 1 ：1 1 反交：反交： P P 白眼白眼X Xw wX Xw w 红眼红眼 X X+ +Y Y F F1 1 红眼红眼 X X+ +X Xw w 、 白眼白眼X Xw w Y Y F F2 2 X X+ + X Xw w : :X Xw w X Xw w : :X X+ +Y : Y : X Xw wY Y 红眼：白眼红眼：白眼 = 1 = 1 ：1 1 雌性：雄性雌性：雄性 = 1 = 1 ：1 1红眼 红眼 红眼 白眼红眼 白眼 红眼 白眼 决定性状的基因为于位于性染色体上，所以其遗传与性别有关。同配性别传递纯合显性遗传基因时，F2性状分离

15、呈显性：隐形=3：1；同配性别传递纯合隐性基因时F2性状与性别=1:1正交组的自由组合定律分离比所以F2代自由组合的预期分离比是3:3:1:1 雄配子雌配子 e+XweXwe+YeYe+XW+灰体红眼灰体红眼灰体红眼灰体红眼e+Xw灰体白眼灰体白眼灰体白眼灰体白眼eXW+灰体红眼檀体红眼灰体红眼檀体红眼eXw灰体白眼檀体白眼灰体白眼檀体白眼5 5. .本实验中为何正交组与反交组自由组合定律的本实验中为何正交组与反交组自由组合定律的预期分离比不同？预期分离比不同？在选择自由组合定律验证时，选择的表型是体色和眼色，体色基因位于常染色体上，而眼色基因位于性染色体上，体色的分离比为1:2:1，眼色的分

16、离比为1:1反交组的自由组合定律分离比,是以体色和眼色为考虑性状 雄配子雌配子 e+XW+eXW+e+YeYe+XW+灰体红眼灰体红眼灰体红眼灰体红眼e+Xw灰体白眼灰体白眼灰体白眼灰体白眼eXW+灰体红眼檀体红眼灰体红眼檀体红眼eXw灰体白眼檀体白眼灰体白眼檀体白眼所以F2代自由组合的预期分离比是9:3:3:1十十、注意、注意事项事项1. 果蝇适度麻醉，挑蝇用毛笔，忌用镊子和其他工具，以免影响果蝇生长繁育。 2. 掌握处女蝇的选取时间且所选材料要合格，便于实验。3. 选取处女蝇时麻醉剂量适当，避免过量伤害果蝇甚至将其杀死。4. 纯计数时应将果蝇处死，便于辨认性状和区分。5. 挑处女蝇时，每次只挑10小时内羽化成虫，超过10小时的成虫已逐渐有交配能力，必须一只不留地倒出，才能进行第二次挑选。6. 操作过程中注意不要将棉塞等放到桌面，避免染菌。7. 尽量避免由于操作不当造成的果蝇的逃逸，这样会对最后的结果产生影响。8.培养箱温度保持25，不要随意更改或调整其他旋钮，以免影响整个实验。9.培养瓶灭菌应彻底，严格控制温度