药物化学第10章-巴比妥及苯并二氮杂卓类镇静催眠药物的分析

1、主讲：张舒婷第十章 药物分析教研室药物分析教研室环状丙二酰脲类化合物环状丙二酰脲类化合物一般为5,5-二取代，少数为1,5,5-三取代( (一一) )基本结构基本结构CCCONONC OR1R2R3561234HH典型药物CCCONONC OH5C2H5C2HH巴比妥CCCONONC OH5C2HH苯巴比妥(Phenylbarbital)(barbital)CCCONONC ONaCH2CHCH2CHCH3C3H7H司可巴比妥钠(Secobarbital)CNHCNHCOOOH5C2CH3(CH2)2CHCH3戊巴比妥(Pentobarbital)硫喷妥钠HCCCONONCSNaC2H5CH3

2、CH2CH2CHCH3 巴比妥类药物是环状酰脲类的镇静催眠药，巴比妥类药物是环状酰脲类的镇静催眠药，巴比妥类药物剂量由小到大，中枢抑制作用巴比妥类药物剂量由小到大，中枢抑制作用相继表现为镇静、催眠、抗惊厥和麻醉作用，相继表现为镇静、催眠、抗惊厥和麻醉作用，其中苯巴比妥还具有抗癫痫的作用其中苯巴比妥还具有抗癫痫的作用。5,55,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物5,55,5取代的硫代巴比妥类药物取代的硫代巴比妥类药物1,5,51,5,5取代的巴比妥类药物取代的巴比妥类药物本类药物的结构可大致分为两个部分：本类药物的结构可大致分为两个部分：1. 1. 环状丙二酰脲、环状丙二酰脲、1,31,3二

3、酰亚胺基团二酰亚胺基团决定巴比妥类药物的特性决定巴比妥类药物的特性2. 2. 取代基部分取代基部分区别各种巴比妥类药物区别各种巴比妥类药物( (二二) )主要性质主要性质u性状性状白色结晶或结晶性粉末白色结晶或结晶性粉末u溶解度溶解度微溶或极微溶于水，易溶于乙醇微溶或极微溶于水，易溶于乙醇 等有机溶剂等有机溶剂 钠盐易溶于水，难溶于有机溶剂钠盐易溶于水，难溶于有机溶剂8一母核反应类别区分1. 弱酸性性质与鉴别巴比妥类分析CCNHCNHCR1R2OOO123456N C OHN C OHCCOONHCCOCCO NHOR1R2COCCO NHR1R2NCO-COCR1R2NCCNO-O-_H+H

4、+pK1=8_H+H+pK2=121. 弱酸性 性质与鉴别COCCO NHR1R2NC ONaNaOHNHCCOCCO NHOR1R2( (pKa:7.38.4) )2.2.水解反应水解反应NHNOOOHR2R1+5NaOHCHCOONaR1R2+2Na2CO3+NH3NHNOOOHR1CHCOONaR1R2+2NH3CR1R2COONaCONHCONH2H2OH2O N H C C O C C O N H O R 1 R 2 + 5 N a O H C H C O O N a R 1 R 2 + 2 N H 3 + 2 N a 2 C O 3 水解脱羧NHNOOOHR1CHCOONaR1R2

5、+2NH3CR1R2COONaCONHCONH2H2OH2ONa 盐NHNONaOO+2H2OONHNH2O+NaHCO3pH6789分解率(%)261741pH对苯巴比妥分解率的影响20C放置一年巴比妥钠注射液不能预先配制进行加热灭菌，须巴比妥钠注射液不能预先配制进行加热灭菌，须制成粉针剂，临用时溶解。制成粉针剂，临用时溶解。Company L3.与金属离子反应a.与银盐的反应5,5取代的巴比妥类药物AgNO3Na2CO3可溶性的一银盐AgNO3二银盐白色沉淀NNR1R2OONaONNR1R2OOAgONNR1R2OOAgONNR1R2OOAgAgOH+AgNO3Na2CO3NaHCO3Na

6、NO3H+AgNO3Na2CO3+NaHCO3NaNO3H14应用： 鉴别（一般鉴别试验） 丙二酰脲类（ChP）b. 含量测定 化学计量关系 1 1(出现混浊)3. 与重金属离子反应 3）银盐反应第二节 性质与鉴别Company L3.与金属离子反应b.与铜盐的反应巴比妥类铜吡啶显色巴比妥类紫色或紫色沉淀硫巴比妥类绿色NNOOOR1R2HH水-吡啶NNOOR1R2OH部分离子化NNOOR1R2O-NNOOR1R2O-NCuN2+NNNHOOR1R2OCuHNNOOR1R2ON16注意事项：a. 巴比妥类药物显紫色溶液或沉淀 一般鉴别试验（ChP）b. 含S巴比妥 显绿色(硫喷妥特征反应)c.

7、吡啶作用： 1) 吸收H+使巴比妥类易解离 2) 孤对电子生成配位体3. 与重金属离子反应 2）铜盐反应第二节 性质与鉴别Company Lc.与钴盐的反应紫堇色钴盐巴比妥类药物碱性CO NHCONHCOR1R22+Co2+4(CH3)2CHNH2+CoR2R1CONHCONCOR2R1NCONHCOCONHCH(CH3)2NHCH(CH3)2(CH3)2CHN+H32Co(NO3)2、CoO、Co(Ac)2异丙胺无水甲醇或乙醇18注意事项：a. 溶剂：无水乙(甲)醇无水条件b. 碱：以有机碱为好异丙胺c. 钴盐：醋酸钴、硝酸钴或氧化钴 样 提取液 显色(钠盐、片等) H+,CHCl3在氨水瓶

8、口熏滴在滤纸上滴加Co2 +3. 与重金属离子反应 c）钴盐反应第二节 性质与鉴别d.与汞盐的反应巴比妥类药物+汞盐白色（可溶于氨试液）4.4.香草醛反应香草醛反应( (Vanillin) )棕红色香草醛巴比妥类药物浓硫酸戊巴比妥鉴别： 取戊巴比妥取戊巴比妥10mg，加香草醛约，加香草醛约10mg和硫酸和硫酸2ml，混，混合后在水浴上加热合后在水浴上加热2min，显棕红色。放冷，小心加，显棕红色。放冷，小心加入乙醇入乙醇5ml，即显紫色并变成蓝色。，即显紫色并变成蓝色。5.5.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征A.H2SO4液(0.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH

9、13NaOH液(1mol/L,二级电离)1,5,5-1,5,5-三取代巴比妥类三取代巴比妥类药物不存在二级电离，药物不存在二级电离，最大吸收波长不变。最大吸收波长不变。(nm)2902702502300.51.01.5A巴比妥类药物的紫外吸收光谱ABC240nm255nm260nm3202802402000.80.50.2(nm)A238287304硫代巴比妥的紫外吸收光谱A.HCl液(0.1mol/L)B.NaOH液(0.1mol/L)22注：a. 1,5,5-三取代无二级电离 b. 硫(S)代巴比妥 1)在酸性溶液(pH=1)中有UV吸收 1=287nm,2=238nm 2)在碱性溶液(

10、pH=10) 1=304nm,2=255nm 3)在强碱溶液(pH=13) 1=304nm显微结晶显微结晶 药物本身晶形药物本身晶形反应产物晶形反应产物晶形( (一一) )丙二酰脲类的鉴别试验丙二酰脲类的鉴别试验u取供试品约0.1g，加碳酸钠试液1ml与水10ml，振摇2min，滤过，滤液中逐滴加入硝酸银试液，即生成白色沉淀，振摇，沉淀即溶解；继续滴加过量的硝酸银试液，沉淀不再溶解。u取供试品约50mg，加吡啶溶液(110)5 ml，溶解后，加铜吡啶试液1ml，即显紫色或生成紫色沉淀。( (二二) )测定熔点测定熔点 巴比妥类的钠盐酸 游离巴比妥类药物 过滤 洗涤 干燥 测熔点 ( (三三)

11、)利用特殊取代基或元素的鉴别试验利用特殊取代基或元素的鉴别试验 利用不饱和取代基的鉴别试验(司可巴比妥钠) 利用芳环取代基的鉴别试验(苯巴比妥钠) 硫色素反应(硫代巴比妥类)1.1.司可巴比妥钠的鉴别司可巴比妥钠的鉴别NHNNaOOOCH3CH3CH2I2NHNNaOOOCH3CH3CH2II褪色NHNNaOOOCH3CH3CH2Br BrBr2NHNNaOOOCH3CH3CH2OH OHKMnO42.2.苯巴比妥的鉴别苯巴比妥的鉴别黄色苯巴比妥423SOHKNOa.硝化反应 b.硫酸-亚硝酸钠反应 苯巴比妥与苯巴比妥与NaNONaNO2 2-H-H2 2SOSO4 4反应生成反应生成橙黄色橙

12、黄色橙红色橙红色c.甲醛-硫酸反应 苯巴比妥与甲醛苯巴比妥与甲醛-H-H2 2SOSO4 4反应生成反应生成玫瑰红色环玫瑰红色环 区分苯巴比妥与不含芳环取代的巴比妥类药物。3.3.硫代巴比妥类的鉴别硫代巴比妥类的鉴别硫色素反应硫色素反应NHNOOSNaH3CCH3H3C+Pb2+NaOHNHNOOSH3CCH3H3C2PbPbS硫代巴比妥类与巴比妥类的区别( (一一) )苯巴比妥苯巴比妥C2H5OH,H2SO4水解酯化CH2CONH2，CH2COOC2H5C2H5ONa OCOC2H5OC2H5CCONaCOOC2H5COOC2H5HCl酸化 ，消除CHCOOC2H5COOC2H5CCOOC2

13、H5COOC2H5C2H5C2H5Br乙基化CCOOC2H5COOC2H5C2H5CH3ONa环合CH2NH2NOCCONaC2H5CONHCONCCOC2H5CONHCONH酸析HCl1.酸度酸度中间体中间体乙酰化不完全时，乙酰化不完全时，与尿素缩合产生的杂质与尿素缩合产生的杂质COHHNHHNCHCOHNCOHNOCHCOOC2H5COOC2H5苯基丙二酰脲酸性较强检查方法取本品0.20g，加水10ml，煮沸搅拌1min，放冷，滤过后，取滤液5ml，加甲基橙指示液1滴，不得显红色2.乙醇溶液澄清度乙醇溶液澄清度检查中间体等乙醇中不溶物。取本品1.0g，加乙醇5ml，加热回流3min，溶液应

14、澄清 3.中性或碱性物质中性或碱性物质( (提取重量法提取重量法) ) 副产物：2-苯基丁酰(胺)脲或分解产物 不溶于NaOH T.S.而溶于醚分液漏斗NaOH T.S.乙醚H2O过滤干燥滤纸蒸发皿1051hr3mg取本品取本品1.0g 1.0g 乙醚，乙醚，H H2 2O O洗洗3 3 次次 滤液滤液 蒸干蒸干 残渣残渣 司可巴比妥钠的特殊杂质检查司可巴比妥钠的特殊杂质检查+HBrNaOCH2 NaOH,C2H5ONa, CH3COCH3CH3CHBrCH2Br,NaOH CH3CH3NNOHOCH3CH3NNOHOHOHOHH +HH2NCONH2,C2H5ONaCOOC2H5COOC2H

15、5H CCH3CH3CH2CH2CH CH3CH2CH2CHCH3,C2H5ONaCOOC2H5COOC2H5CH2 OHONNCH3CH3CH3CH3CH2NaONNOHO缩合环合丙烯化成盐 （1 1）溶液的澄清度）溶液的澄清度 此项检查主要是控制水不溶性杂质，此项检查主要是控制水不溶性杂质，巴比妥类药物的钠盐极易溶于水，因此本巴比妥类药物的钠盐极易溶于水，因此本品的水溶液应澄清，否则表明含有水不溶品的水溶液应澄清，否则表明含有水不溶性杂质。性杂质。 需注意的是需注意的是，因本品的水溶液易与空，因本品的水溶液易与空气中的气中的二氧化碳二氧化碳作用，而析出司可巴比妥，作用，而析出司可巴比妥，故

16、进行该项目检查时，溶解样品的故进行该项目检查时，溶解样品的水应新水应新沸放冷以消除水中二氧化碳的干扰沸放冷以消除水中二氧化碳的干扰。 （2 2）中性或碱性物质）中性或碱性物质 检查的杂质是合成过程中产生的中性或碱检查的杂质是合成过程中产生的中性或碱性副产物以及司可巴比妥钠的分解产物，如酰性副产物以及司可巴比妥钠的分解产物，如酰脲（脲（）、酰胺（）、酰胺（）类化合物。）类化合物。NaOCH2CH3CH3NNOHOCH2=CHCH2CH3CH2CH2CH CONHCONH2COONaH2OCCH3CH2=CHCH2CHCONHCONH2CH3CH2CH2CHCH3CH3CH3CH2CH2CHCH2

17、=CHCH2CHCONH2()() 银量法银量法 溴量法溴量法 巴比妥类药物的含巴比妥类药物的含 酸碱滴定法酸碱滴定法 量测定方法量测定方法 紫外分光光度紫外分光光度 提取重量法提取重量法 HPLCHPLC法、法、GCGC法法 371. 原理 （一）银量法COCCONHR1R2NCONaNHCCOCCONHOR1R2Na2CO3 A g N O 3 A g N O 3 C OCC O R 1 R 2NNC O A gC O CC O R 1R 2NNC g A g O A382. 测定方法测定方法 供试品溶于供试品溶于Na2CO3溶液中溶液中, 温度温度1520, 用用AgNO3直接滴定直接滴

18、定 (反应摩尔比：1:1)3. 终点指示终点指示 稍过量的稍过量的Ag+与巴比妥类药物生成与巴比妥类药物生成白色浑浊白色浑浊 (难溶难溶性的二银盐性的二银盐) （一）银量法苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，苯巴比妥及其钠盐、异戊巴比妥及其钠盐以及它们的制剂，中国药典均采用银量法测定其含量。中国药典均采用银量法测定其含量。4. 讨论1) 化学计量关系：1:12) 优点: 操作简便、专属性强3) 缺点: a. 近终点时, 生成二银盐速度慢 b. 温度影响大,滴定终点以溶液出现浑浊为终点指示难以观察。 c. 克服方法: 以甲醇为溶剂(甲醇3无水碳酸钠,电位法（Ag玻璃电极系统）指示

19、终点4) Na2CO3的作用 （一）银量法(一) 银量法 (Argentometry)0.2g甲醇甲醇 40ml异戊巴比妥测定3%无水碳酸钠无水碳酸钠电位滴定法(AgNO3)指示电极(Ag)参比电极(玻璃/甘汞) 测定方法与计算测定方法与计算 例如例如: :异戊巴比妥及其钠盐的测定：异戊巴比妥及其钠盐的测定： 取本品约取本品约0.2g 0.2g 加甲醇加甲醇40ml40ml使溶解使溶解 新鲜配制的新鲜配制的3%3%无无水碳酸钠溶液水碳酸钠溶液15ml15ml，照电位法，用硝酸银滴定液，照电位法，用硝酸银滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）滴定，即得。每）滴定，即得。每1ml1ml硝酸银滴

20、定液硝酸银滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于22.63mg22.63mg的的C C1111H H1818N N2 2O O3 3（或（或24.83mg24.83mg的的C C1111H H1717N N2 2NaONaO3 3）。）。 原料药：直接滴定法（容量分析法）原料药：直接滴定法（容量分析法） %100%WTfVD 注意事项注意事项 （1 1）无水碳酸钠应新鲜配制）无水碳酸钠应新鲜配制 （2 2）硝酸银滴定液应新鲜配制）硝酸银滴定液应新鲜配制1. 原理Br2 (剩余) + 2KI 2KBr + I2I2 (生成) + 2Na2S2O3 2NaI + Na2S4O6

21、Br2定过量C NHCNHCCOOOCH2CHCH3(CH2)2CH3CH2=CHBrH2CHBrCCH2(二) 溴量法 司可巴比妥钠测定NHNOONaOCH2CH3CH32Na2S2O3取本品约取本品约0.1g，精密称定，置，精密称定，置250ml碘瓶碘瓶中，加水中，加水10ml，振摇，振摇使溶解，精密加使溶解，精密加溴滴定液溴滴定液（0.05mol/L）25ml，再加，再加盐酸盐酸5ml，立即立即密塞密塞并振摇并振摇1min，在，在暗处静置暗处静置15min后，注意后，注意微开瓶塞微开瓶塞，加加碘化钾碘化钾试液试液10ml，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸钠滴定液，立即密塞，摇匀后，用硫代硫酸

22、钠滴定液（0.1mol/L）滴定，至）滴定，至近终点时，加淀粉指示液近终点时，加淀粉指示液，继续滴定至，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正空白试验校正。每。每1ml溴滴定液溴滴定液（0.05mo1/L）相当于）相当于13.01mg的的C12H17N2NaO3。 原料药原料药 剩余滴定法剩余滴定法%100%WTfVVD样空464. 讨论1) 化学计量关系： 1:1:22) 密塞目的3) 近终点时加指示剂的原因4) 空白试验校正KBrO35KBr6HCl3Br26KCl3H2O 溴滴定液（0.1 mol/L）的配制 取溴酸钾3.0 g与溴化钾15 g，加水适量使

23、溶解成1000 ml，摇匀。(三) 酸碱滴定法 (Acid-base titration method) 水-乙醇混合溶剂中滴定 胶束水溶液中滴定 非水滴定法异戊巴异戊巴比妥比妥水水醇醇溶解溶解麝香草酚酞NaOH淡蓝色1.1.水水- -乙醇混合溶液乙醇混合溶液HNHNOOOCH3CH3CH3+NaOHHNHNNaOOOCH3CH3CH3+H2O终点指示：电位法终点指示：电位法原因：操作过程中易于吸收二氧化碳，而使得终点的原因：操作过程中易于吸收二氧化碳，而使得终点的淡蓝色褪去，采用空白对照也难以得到满意的效果。淡蓝色褪去，采用空白对照也难以得到满意的效果。494. 讨论1) 化学计量关系： 1

24、:12) 水乙醇混合溶剂作用3) 终点指示4) 空白试验校正原料药原料药 直接滴定法（有空白校正）直接滴定法（有空白校正）%100)(%0WfVVTDT T滴定度，每滴定度，每1ml1ml滴定液相当于被测组分的滴定液相当于被测组分的mgmg数数 V V滴定时，供试品消耗滴定液的体积（滴定时，供试品消耗滴定液的体积（mlml）V VO O滴定时，空白消耗滴定液的体积（滴定时，空白消耗滴定液的体积（mlml）f f浓度校正因子浓度校正因子 2. 2. 在胶束水溶液中滴定在胶束水溶液中滴定 胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使胶束具有增溶作用，水溶液中胶束的存在能使不溶或微溶于不溶或微溶于水的有

25、机化合物的溶解度增加水的有机化合物的溶解度增加，并显著改变弱酸、弱碱性物质，并显著改变弱酸、弱碱性物质的解离，使其的解离，使其酸碱性增强酸碱性增强。正胶束反胶束H2O溴化十六烷基三甲基苄铵Cetyltrimethylbenzylammonium bromide，CTMA氯化四癸基二甲基苄铵Tetradecyldimethylbenzylammonium chloride，TDBA巴比妥类表面活性剂溶解麝香草酚酞指示剂NaOH滴定采用本法测定巴比妥和苯巴比妥的结果的相对标准差（RSD）均小于0.3%，并优于在水-乙醇混合溶液中的滴定方法。 巴比妥类药物在非水溶液中的酸性增强，用碱性标准溶液滴巴比

26、妥类药物在非水溶液中的酸性增强，用碱性标准溶液滴定时，终点较为明显，可获得比较满意的结果。定时，终点较为明显，可获得比较满意的结果。 常用的有机溶剂常用的有机溶剂: : 二甲基甲酰胺二甲基甲酰胺、甲醇、氯仿、丙酮、无水、甲醇、氯仿、丙酮、无水 乙醇、苯、吡啶、甲醇乙醇、苯、吡啶、甲醇- -苯（苯（15:15:8585）、乙）、乙 醇醇- -氯仿（氯仿（1 1?1010）等；）等； 常用的滴定剂：常用的滴定剂：甲醇钾甲醇钾（钠）的甲醇（或乙醇）溶液、氢氧（钠）的甲醇（或乙醇）溶液、氢氧 化四丁基铵的氯苯溶液等；化四丁基铵的氯苯溶液等； 常用的指示剂为常用的指示剂为麝香草酚蓝麝香草酚蓝等，也可用玻

27、璃等，也可用玻璃- -甘汞电极系统，甘汞电极系统，以电位法指示终点。以电位法指示终点。 3. 3. 非水滴定法非水滴定法 巴比妥类药物在巴比妥类药物在酸性酸性介质中几乎不电离，介质中几乎不电离，无明显的紫无明显的紫外吸收外吸收。 但在但在碱性介质碱性介质中电离为具有紫外吸收特征的结构，因中电离为具有紫外吸收特征的结构，因而可采用紫外分光光度法测定其含量。而可采用紫外分光光度法测定其含量。 本法灵敏度高，专属性强，广泛应用于巴比妥类药物本法灵敏度高，专属性强，广泛应用于巴比妥类药物的的原料及其制剂的含量测定原料及其制剂的含量测定，以及固体制剂的溶出度和含，以及固体制剂的溶出度和含量均匀度检查，也

28、常用于体内巴比妥类药物的检测。量均匀度检查，也常用于体内巴比妥类药物的检测。（四）紫外分光光度法（四）紫外分光光度法(4) 紫外分光光度法 药名max(nm)E巴比妥240538苯巴比妥253320戊巴比妥240310异戊巴比妥238440司可巴比妥240330硫喷妥305930NaOH溶液(0.1mol/L)溶剂pH9.4硼酸盐缓冲液pH9.4硼酸盐缓冲液u直接测定的直接测定的UVUV法法u提取分离后的提取分离后的UVUV法法 1. 1. 直接测定的紫外分光光度法直接测定的紫外分光光度法 本法是将供试品溶解后，根据溶液的本法是将供试品溶解后，根据溶液的pHpH，在最大吸收波长（在最大吸收波长

29、（maxmax）处，直接测定对照）处，直接测定对照品溶液和供试品溶液的吸收度，再计算药物品溶液和供试品溶液的吸收度，再计算药物的含量。中国药典对注射用硫喷妥钠的含量的含量。中国药典对注射用硫喷妥钠的含量测定采用本法。测定采用本法。 Beer-LambertBeer-Lambert定律定律 A = -A = -T =ElC ACT =ElC AC 单组分定量的方法单组分定量的方法： 1. 1. 吸收系数法（绝对法）吸收系数法（绝对法）clEA%1cm1lEAc1%1cm)g/100ml(100)g/ml(1%1cmlEAc 2. 2. 标准曲线法标准曲线法 3. 3. 对照法对照法lcElcEA

30、A对供对供%1cm1%1cm1供对供对CCAA对对供供CAAC 2. 2. 提取分离后的紫外分光光度法提取分离后的紫外分光光度法 提取分离的提取分离的主要目的主要目的是消除干扰物质对测定的影响。根据是消除干扰物质对测定的影响。根据巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其巴比妥类药物具有弱酸性，在氯仿等有机溶剂中易溶，而其钠盐在水中易溶的特点。钠盐在水中易溶的特点。USP法测定苯巴比妥含量巴比妥类药物适量，加巴比妥类药物适量，加水使其溶解水使其溶解后，加后，加酸酸化酸酸化，用，用三氯甲烷三氯甲烷提取提取巴比妥类药物，三氯甲烷提取液加入巴比妥类药物，三氯甲烷提取液加入pH7.2pH7.

31、27.57.5的缓冲液的缓冲液，振摇，分离弃去水相缓冲液层，再用振摇，分离弃去水相缓冲液层，再用氢氧化钠氢氧化钠自三氯甲烷中提自三氯甲烷中提取巴比妥类药物，调节碱提取液的取巴比妥类药物，调节碱提取液的pHpH值值，然后选用相应的吸收，然后选用相应的吸收波长进行测定。波长进行测定。2. 2. 提取分离后的紫外分光光度法提取分离后的紫外分光光度法 本法是利用巴比妥药物在不同本法是利用巴比妥药物在不同pHpH值溶液中的电离级数不同，值溶液中的电离级数不同，因而产生紫外吸收光谱的情况不同，以此为依据设计测定方因而产生紫外吸收光谱的情况不同，以此为依据设计测定方法。该法常用于巴比妥类药物的制剂分析，也可

32、用于体内巴法。该法常用于巴比妥类药物的制剂分析，也可用于体内巴比妥类药物的监测。比妥类药物的监测。3. 3. 差示紫外分光光度法（差示紫外分光光度法（A A法）法） （1 1）测定方法测定方法 取两份相等的供试溶液，分别制成两种不同的化学环取两份相等的供试溶液，分别制成两种不同的化学环境（如在其一中加酸、碱或缓冲液改变溶液的境（如在其一中加酸、碱或缓冲液改变溶液的pHpH，或在，或在其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后其一中加能与供试品发生某种化学反应的试剂），然后将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一份将两者分别稀释至同样浓度，一份置样品池中，另一份置参比池中，于适当波长

33、处，测其吸收度的差值（置参比池中，于适当波长处，测其吸收度的差值（ A A值）。值）。 a. a.供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在，它供试品在不同的化学环境中以不同的分子形式存在，它们的吸收光谱有显著的差异。们的吸收光谱有显著的差异。 b.b.干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不干扰物的吸收不受测定时化学环境的影响，光谱行为不变。变。 (nm)2902702502300.51.01.5A巴比妥类药物的紫外吸收光谱ABC（2 2）必要条件）必要条件A.H2SO4液(0.05mol/L,未电离)B.pH9.9缓冲液(一级电离)C.pH13NaOH液(1mol/L,二级电离)

34、 （3 3）定量依据）定量依据 供试品在两种不同的化学环境中分别以供试品在两种不同的化学环境中分别以x x、y y表示，表示，干扰物用干扰物用z z表示。表示。clAAAAAAAAAyxyxzyzx)( )()(参比样品cA 也就是说，吸收度差值（也就是说，吸收度差值（ A A）仅与待测组分的浓）仅与待测组分的浓度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰度有关，而与干扰组分无关，即干扰组分的干扰被消除。被消除。 可用对照法或标准曲线法定量可用对照法或标准曲线法定量 （4 4）特点特点 保留了通常的分光光度法简易保留了通常的分光光度法简易快速、直接读数的优点，又无需事快速、直接读数的优点，又无需

35、事先分离，并能消除干扰。先分离，并能消除干扰。 以复方巴比妥散中苯巴比妥的测定为例：以复方巴比妥散中苯巴比妥的测定为例： 利用复方苯巴比妥散中的阿司匹林和利用复方苯巴比妥散中的阿司匹林和水杨酸等成分在水杨酸等成分在pH5.91pH5.91和和8.048.04条件下的紫条件下的紫外吸收光谱重合，外吸收光谱重合，A A=0=0，而苯巴比妥在，而苯巴比妥在240nm240nm波长处，在波长处，在pH5.91pH5.91和和8.048.04条件下条件下A A的值最大。因此的值最大。因此A A大小只与苯巴比妥浓度大小只与苯巴比妥浓度成正比，是该法用于苯巴比妥的定量依据。成正比，是该法用于苯巴比妥的定量依据。NNClH3CO1234567892地西泮 (diazepam) 七元亚胺内酰胺环HNNOClOH奥沙西泮(Oxazepam)氯氮卓(Chlordiazepoxide)NNNCH3OClH一、鉴别试验 (一一) 化学鉴别试验化学鉴别试验 1 1. .沉淀反应沉淀反应 氯氮卓氯氮卓 橙红色橙红色沉淀沉淀 阿普唑仑阿普唑仑 KBiI4 盐酸氟西泮盐酸氟西泮 也生成也生成橙红色橙红色沉淀沉淀 氯硝西泮氯硝西泮 放置后，沉淀颜色变深，