天然产物的提取分离和结构鉴定

1、1生物技术及应用专业天然产物化学天然产物化学2第二章第二章 天然产物的天然产物的提取分离和结构鉴定提取分离和结构鉴定天然产物化学天然产物化学3获得天然产物化学成分的基本步骤获得天然产物化学成分的基本步骤原材料原材料单体化合物单体化合物总提取物总提取物不同部位不同部位目的化合物目的化合物结构修饰结构修饰人工合成人工合成提取提取初步分离初步分离精细分离纯化精细分离纯化天然产物化学天然产物化学4天然产物的提取方法天然产物的提取方法第一节第一节天然产物化学天然产物化学5如无特殊规定，原料须干燥并适当粉如无特殊规定，原料须干燥并适当粉碎，以利增大与溶剂的接触面积，提碎，以利增大与溶剂的接触面积，提高萃取

2、高萃取/提取效率。提取效率。 天然产物的预处理天然产物化学天然产物化学6 61、溶剂提取法、溶剂提取法u原理：利用天然产物的化学成分在特定原理：利用天然产物的化学成分在特定溶剂中能够溶解的性质。溶剂中能够溶解的性质。u溶剂选择的依据溶剂选择的依据 “相似者相溶相似者相溶”原则；原则；u天然产物多数情况下采用溶剂提取法。天然产物多数情况下采用溶剂提取法。天然产物化学天然产物化学7 7（1）常用溶剂）常用溶剂u 按按亲水性亲水性 / 极性极性 从小到大的顺序：从小到大的顺序： 环己烷环己烷 石油醚石油醚苯苯乙醚乙醚氯仿氯仿 乙酸乙酯乙酸乙酯 正丁醇正丁醇丙酮丙酮乙醇乙醇甲醇甲醇 水。水。 极性最大

3、的有机溶剂：极性最大的有机溶剂：甲醇甲醇 极性最小的有机溶剂：极性最小的有机溶剂：环己烷环己烷 溶解范围最广的有机溶剂：溶解范围最广的有机溶剂：乙醇乙醇天然产物化学天然产物化学8 8(2)溶剂选择与被提取成分对照表选择的溶剂选择的溶剂 被提取成分被提取成分 石油醚石油醚脱脂（脂类、色素、萜类等）脱脂（脂类、色素、萜类等）苯、乙醚、氯苯、乙醚、氯仿、乙酸乙酯仿、乙酸乙酯甾类、萜和挥发油、生物碱、甾类、萜和挥发油、生物碱、各种苷元各种苷元正丁醇正丁醇苷苷乙醇、甲醇乙醇、甲醇蛋白、多糖以外的各类成分蛋白、多糖以外的各类成分水水苷、生物碱盐、鞣质、氨基苷、生物碱盐、鞣质、氨基酸、蛋白、糖酸、蛋白、糖天

4、然产物化学天然产物化学9 9(3)溶剂选择的原则溶剂选择的原则目标成分易溶，杂质成分难溶；目标成分易溶，杂质成分难溶；惰性，不与目标成分反应，即使发生惰性，不与目标成分反应，即使发生反应也应该属于可逆性的；反应也应该属于可逆性的；经济、安全、后续操作容易进行。经济、安全、后续操作容易进行。天然产物化学天然产物化学1010溶剂提取法的分类溶剂提取法的分类（4）、根据提取溶剂的种类不同）、根据提取溶剂的种类不同 可以将溶剂提取法分为四种可以将溶剂提取法分为四种.水提取法水提取法醇提取法醇提取法亲脂性有机溶剂提取法亲脂性有机溶剂提取法超临界流体萃取法超临界流体萃取法天然产物化学天然产物化学1111适

5、用范围：适用于水溶性成分。适用范围：适用于水溶性成分。如：苷类、如：苷类、生物碱盐、有机酸盐、糖、蛋白质、氨基生物碱盐、有机酸盐、糖、蛋白质、氨基酸、鞣质等化学成分的提取。酸、鞣质等化学成分的提取。 优点：经济、安全、无毒。优点：经济、安全、无毒。 缺点：缺点：a.含杂质多，不易纯化；含杂质多，不易纯化； b.体积大，沸点高，不好浓缩；体积大，沸点高，不好浓缩； c.容易发霉；难过滤；容易发霉；难过滤； d.加热时易糊化等。加热时易糊化等。 水提取法水提取法天然产物化学天然产物化学1212 醇提取法醇提取法 常用的醇常用的醇: 甲醇、乙醇甲醇、乙醇以及不同浓度的甲以及不同浓度的甲醇、乙醇醇、乙

6、醇水溶液水溶液 适用范围：适用范围：除蛋白质和多糖除蛋白质和多糖以外的其他以外的其他各种水溶性和脂溶性成分。各种水溶性和脂溶性成分。 优点：较为便宜易得，醇兼有亲水性和优点：较为便宜易得，醇兼有亲水性和亲脂性，对植物细胞渗透力强，可提多亲脂性，对植物细胞渗透力强，可提多种成分。种成分。 缺点：易燃，甲醇有一定毒性。缺点：易燃，甲醇有一定毒性。天然产物化学天然产物化学1313 亲脂性有机溶剂提取法亲脂性有机溶剂提取法常用有机溶剂：常用有机溶剂：正丁醇、乙酸乙酯、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、氯仿、 乙醚、苯以及石油醚乙醚、苯以及石油醚等等 适用范围：有机溶剂种类不同，提取适用范围：有机溶剂种类不同，提

7、取成分不同。通常规律如下：成分不同。通常规律如下： 正丁醇正丁醇 苷类；苷类； 乙酸乙酯乙酸乙酯 黄酮类；黄酮类； 氯仿氯仿 生物碱类及苷元类；生物碱类及苷元类；天然产物化学天然产物化学14乙醚、苯乙醚、苯游离的黄酮、香豆素、蒽醌、游离的黄酮、香豆素、蒽醌、甾类、萜类等苷元以及挥发油等；甾类、萜类等苷元以及挥发油等；石油醚石油醚 挥发油、脂类、色素、树脂挥发油、脂类、色素、树脂 优点优点：选择性强，可除去水溶性杂质。：选择性强，可除去水溶性杂质。 缺点缺点： 价格昂贵；多数易燃，特别是乙价格昂贵；多数易燃，特别是乙醚；醚； 有些毒性大，如苯和氯仿有些毒性大，如苯和氯仿(现多为甲现多为甲苯苯 等

8、代替等代替)；不适于大规模生产。不适于大规模生产。天然产物化学天然产物化学1515 超临界流体萃取技术超临界流体萃取技术超临界流体（超临界流体（SCF）：当一种物质处于其）：当一种物质处于其临界温度与临界压力以上的状态时，将形临界温度与临界压力以上的状态时，将形成既非液体又非气体的单一相态。成既非液体又非气体的单一相态。超临界流体特点超临界流体特点: 兼有气、液两重性，即兼有气、液两重性，即密密度接近于液体度接近于液体，而，而粘度和扩散系数又与气粘度和扩散系数又与气体相似体相似，因而它不仅，因而它不仅具有与液体溶剂相当具有与液体溶剂相当的萃取能力的萃取能力，而且，而且具有优良的传质效果。具有优

9、良的传质效果。天然产物化学天然产物化学16实际操作过程实际操作过程: 控制体系的压力和温度萃取出所需要的物控制体系的压力和温度萃取出所需要的物质，然后通过降压或升温的方法，降低超质，然后通过降压或升温的方法，降低超临界流体的密度，使萃取物得到分离。临界流体的密度，使萃取物得到分离。 常用作超临界流体的物质：二氧化碳等常用作超临界流体的物质：二氧化碳等 适用范围：挥发油及脂溶性成分适用范围：挥发油及脂溶性成分 缺点：所需仪器设备价格昂贵缺点：所需仪器设备价格昂贵天然产物化学天然产物化学17CO2作为超临界流体具有下列优点：作为超临界流体具有下列优点：临界温度为临界温度为31.2（近于室温）；（近

10、于室温）；临界压力在临界压力在73个大气压，易于操作；个大气压，易于操作；安全、不燃烧、化学上安定；安全、不燃烧、化学上安定；可防止被萃取物的氧化；可防止被萃取物的氧化；无毒；无毒； 价廉易得。价廉易得。 天然产物化学天然产物化学1818（5）根据操作方法不同，溶剂法分为：）根据操作方法不同，溶剂法分为： 煎煮法煎煮法 浸渍法浸渍法 渗漉法渗漉法 连续回流提取法连续回流提取法 超声法超声法 微波法微波法天然产物化学天然产物化学19煎煮法：煎煮法： 适用范围：以水为溶剂的体系适用范围：以水为溶剂的体系浸渍法浸渍法(浸泡法浸泡法) 适用范围适用范围: 以水、醇或稀醇为溶剂的体系以水、醇或稀醇为溶剂

11、的体系渗漉法渗漉法 适用范围：一般是以水、醇或稀醇为溶适用范围：一般是以水、醇或稀醇为溶剂时采用此法，使用其他有机溶剂时也剂时采用此法，使用其他有机溶剂时也可采用（但此时应注意安全）。可采用（但此时应注意安全）。天然产物化学天然产物化学20渗漉装置渗漉装置索氏提取装置索氏提取装置天然产物化学天然产物化学21连续回流提取法（索氏提取）连续回流提取法（索氏提取） 适用范围：以醇或其他有机溶剂为溶剂适用范围：以醇或其他有机溶剂为溶剂的体系的体系.超声法超声法 适用范围：适用于任何溶剂提取体系。适用范围：适用于任何溶剂提取体系。微波辅助法微波辅助法 适用范围：适用于极性较大的溶剂体系。适用范围：适用于

12、极性较大的溶剂体系。天然产物化学天然产物化学2222影响提取效率的因素影响提取效率的因素 1、药材的粉碎度、药材的粉碎度 过大不利于溶剂接触过大不利于溶剂接触 过碎，比表面积过大，吸附作用增强影过碎，比表面积过大，吸附作用增强影响扩散速率响扩散速率2、提取温度、提取温度3、提取时间、提取时间天然产物化学天然产物化学23232、水蒸气蒸馏法、水蒸气蒸馏法原理：利用某些挥发性成分能随水蒸气蒸原理：利用某些挥发性成分能随水蒸气蒸发的性质。发的性质。 挥发油专属提取方法挥发油专属提取方法适用范围：能随水蒸气蒸发而且化学结构适用范围：能随水蒸气蒸发而且化学结构遇热稳定、不易被破坏的的挥发油、小分遇热稳定

13、、不易被破坏的的挥发油、小分子生物碱或酚类化合物。子生物碱或酚类化合物。优点：对于具有挥发性，而且化学结构遇优点：对于具有挥发性，而且化学结构遇热稳定、不易被破坏的化合物，该方法特热稳定、不易被破坏的化合物，该方法特异性高，所得化学成分较纯。异性高，所得化学成分较纯。天然产物化学天然产物化学24天然产物化学天然产物化学25天然产物化学天然产物化学26冷凝冷凝收集区收集区原料料液原料料液实验室蒸馏法萃取精油装置实验室蒸馏法萃取精油装置 天然产物化学天然产物化学27273、升华法、升华法原理：利用某些具有升华性质的化合物遇原理：利用某些具有升华性质的化合物遇热汽化上升，遇冷后又凝固的性质从原料热汽

14、化上升，遇冷后又凝固的性质从原料中提取该类成分。中提取该类成分。适用范围：具有升华性质，而且化学结构适用范围：具有升华性质，而且化学结构遇热稳定、不易被破坏的化合物。遇热稳定、不易被破坏的化合物。由于特异性高，所得化学成分较纯由于特异性高，所得化学成分较纯.操作方法：常压升华；减压升华操作方法：常压升华；减压升华天然产物化学天然产物化学2828示意图示意图 常压升华常压升华 减压升华减压升华天然产物化学天然产物化学29294、提取液的浓缩方法、提取液的浓缩方法 （1）常压蒸馏）常压蒸馏 一般是浓缩低沸点有机溶剂时使用一般是浓缩低沸点有机溶剂时使用（2）减压蒸馏）减压蒸馏 浓缩较高沸点溶剂时可以

15、使用浓缩较高沸点溶剂时可以使用（3）旋转蒸发）旋转蒸发 浓缩较高沸点溶剂如甲醇、乙醇、正丁浓缩较高沸点溶剂如甲醇、乙醇、正丁醇、醇、 水等时使用。水等时使用。天然产物化学天然产物化学30（4）薄膜蒸发）薄膜蒸发 一般是浓缩较大量溶剂时使用此法，并一般是浓缩较大量溶剂时使用此法，并可可 用于大生产。用于大生产。 （5）喷雾干燥）喷雾干燥 工业化生产经常采用喷雾干燥浓缩水溶工业化生产经常采用喷雾干燥浓缩水溶液。液。 （6）冷冻干燥）冷冻干燥 一般是浓缩水溶液时使用此法，由于是一般是浓缩水溶液时使用此法，由于是低温干燥，尤其适用对热敏感化学成分低温干燥，尤其适用对热敏感化学成分的浓缩的浓缩. 天然产

16、物化学天然产物化学31天然产物的分离与精制天然产物的分离与精制第二节第二节天然产物化学天然产物化学3232（一）两相溶剂萃取法（一）两相溶剂萃取法原理：原理：利用混合物中各组分在两相溶利用混合物中各组分在两相溶剂中的分配系数不同进行纯化分离剂中的分配系数不同进行纯化分离.如如果各成分分配系数相关越大，则分离果各成分分配系数相关越大，则分离效率越高。效率越高。适用范围：适用范围：在两相溶剂中分配系数不在两相溶剂中分配系数不同的混合物中各组分的纯化分离。同的混合物中各组分的纯化分离。天然产物化学天然产物化学33操作过程操作过程取粗提物，选用取粗提物，选用3-4种不同极性的溶剂，由种不同极性的溶剂，

17、由低至高分步进行提取；使总提取物中各组低至高分步进行提取；使总提取物中各组分，依其在不同极性溶剂中溶解度的差异分，依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。而得到分离。 若所需成分是若所需成分是脂溶性脂溶性,可用有机溶剂如苯、可用有机溶剂如苯、氯仿、或乙醚与水进行萃取，可氯仿、或乙醚与水进行萃取，可除去水溶除去水溶性物质性物质糖类、无机盐；糖类、无机盐；若所需要的成分是若所需要的成分是亲水性物质亲水性物质，其水溶液，其水溶液用弱亲脂性溶剂如乙酸乙酯、丁醇等萃取。用弱亲脂性溶剂如乙酸乙酯、丁醇等萃取。有时可在氯仿或二氯甲烷中加入少量甲醇有时可在氯仿或二氯甲烷中加入少量甲醇或乙醇进行萃取。或乙醇

18、进行萃取。天然产物化学天然产物化学3434其他萃取方法简介其他萃取方法简介A A、B B两种溶质在同一溶剂系统中分配系两种溶质在同一溶剂系统中分配系数（数（K K）的比值称为分离因子）的比值称为分离因子。 =K =KA A/K/KB B（K KA AK KB B） 当当100100，一次萃取可分离；，一次萃取可分离； 1010100,10100,101212次；次；22，100100次；次； 当当11时，则时，则KAKBKAKB，意味着两种溶质，意味着两种溶质性质极其相近，无法实现分离。性质极其相近，无法实现分离。天然产物化学天然产物化学35一般：一般： 50时，简单萃取；时，简单萃取； 束缚

19、型束缚型 游离型游离型 2 2）吸水）吸水失活失活105105110110烘干烘干3030分钟分钟( (可逆失水可逆失水)吸附力最大吸附力最大500 500 烘干烘干( (不不可逆失水可逆失水)活性丧失，无吸附力。活性丧失，无吸附力。适用：适用：用于极性化合物和非极性化合用于极性化合物和非极性化合物的分离，如有机酸、挥发油、蒽醌、物的分离，如有机酸、挥发油、蒽醌、黄酮、氨基酸、皂甙。黄酮、氨基酸、皂甙。天然产物化学天然产物化学582. 2. 氧化铝氧化铝碱性氧化铝碱性氧化铝 pH 9 pH 910 10 适于分析碱适于分析碱性、中性物质；性、中性物质；中性氧化铝中性氧化铝 pH pH7.5 7

20、.5 适于分析酸适于分析酸性碱性和中性物质；性碱性和中性物质；酸性氧化铝酸性氧化铝 pH 4 pH 45 5 适于分析酸适于分析酸性、中性物质。性、中性物质。天然产物化学天然产物化学59适用于分离植物中适用于分离植物中碱性成分碱性成分如生物碱，如生物碱，不宜用醛、酮、酯和内酯等类型的化不宜用醛、酮、酯和内酯等类型的化合物分离合物分离，因为氧化铝容易与其发生，因为氧化铝容易与其发生异构化，氧化，和消除反应。异构化，氧化，和消除反应。 氧化铝有较强的吸附性，氧化铝有较强的吸附性，其吸附性与其吸附性与含水量有关含水量有关，含水量越多，活性越小，含水量越多，活性越小，可以在一定的温度下可逆失水。可以在

21、一定的温度下可逆失水。天然产物化学天然产物化学603 聚酰胺聚酰胺 由酰胺聚合而成的高分子的化合物。对由酰胺聚合而成的高分子的化合物。对黄酮类、酚类、醌类、有机酸及鞣质的黄酮类、酚类、醌类、有机酸及鞣质的分离效果好分离效果好。也能对生物碱、萜类、甾。也能对生物碱、萜类、甾体、糖类及氨基酸进行分离。体、糖类及氨基酸进行分离。 吸附原理吸附原理氢键作用氢键作用 氢键能力氢键能力强，组分越后出柱强，组分越后出柱 ，则洗脱能，则洗脱能力越弱。力越弱。天然产物化学天然产物化学61天然产物化学天然产物化学624 活性炭活性炭非极性吸附剂非极性吸附剂,适合于水溶性物质的分离。适合于水溶性物质的分离。来源充足

22、，价格便宜，适合于大量分离。来源充足，价格便宜，适合于大量分离。用于色谱分离的活性炭分为三类：用于色谱分离的活性炭分为三类： 粉末状活性炭粉末状活性炭 颗粒极细比表面积大，吸颗粒极细比表面积大，吸附力大。但柱内流动速度慢附力大。但柱内流动速度慢,需加压或减压需加压或减压操作操作. 颗粒状活性炭颗粒状活性炭 颗粒较大，比表面积减小，颗粒较大，比表面积减小，流速快，易于控制。流速快，易于控制。 锦纶活性炭锦纶活性炭 以锦纶作为粘合剂，比表面以锦纶作为粘合剂，比表面积介于上两者之间，吸附能力最弱。积介于上两者之间，吸附能力最弱。目前活性炭柱色谱是分离目前活性炭柱色谱是分离氨基酸、糖类及某些氨基酸、糖

23、类及某些甙类等水溶性天然产物成分甙类等水溶性天然产物成分的主要方法之一。的主要方法之一。天然产物化学天然产物化学63注意：注意：活性炭吸附作用在水溶液中最强，在有机溶剂中活性炭吸附作用在水溶液中最强，在有机溶剂中较弱，用有机溶剂脱吸附。较弱，用有机溶剂脱吸附。活性炭的对活性炭的对芳香化合物芳香化合物的吸附力大于对脂肪族化的吸附力大于对脂肪族化合物，对合物，对大分子化合物大分子化合物的吸附力大于对小分子化的吸附力大于对小分子化合物，对合物，对极性基团多的化合物极性基团多的化合物的吸附力大于对极的吸附力大于对极性基团小的化合物，可将水溶性芳香族化合物与性基团小的化合物，可将水溶性芳香族化合物与脂肪

24、族化合物，氨基酸与肽，单糖与多糖分开。脂肪族化合物，氨基酸与肽，单糖与多糖分开。使用先将活性炭于使用先将活性炭于120度加热度加热4-5h,使所吸附的气使所吸附的气体除去。体除去。 使用过的活性炭可用稀酸，稀碱交替处理，然后使用过的活性炭可用稀酸，稀碱交替处理，然后水洗，加热活化。水洗，加热活化。天然产物化学天然产物化学6464固固-液吸附可分为液吸附可分为物理吸附物理吸附 化学吸附化学吸附 半化学吸附。半化学吸附。物理吸附的特点：物理吸附的特点： 无选择性无选择性; 吸附与解吸是可逆的吸附与解吸是可逆的; 速度快速度快; 实际应用最多。实际应用最多。化学吸附的特点：化学吸附的特点： 具有选择

25、性；具有选择性； 吸附十分牢固吸附十分牢固,有时甚至是不可逆有时甚至是不可逆的。的。 化学吸附用得少化学吸附用得少. 半化学吸附的特点：半化学吸附的特点： 介于物理吸附与化学吸附之间的吸附过程介于物理吸附与化学吸附之间的吸附过程,其吸附其吸附力较弱。力较弱。 半化学吸附有一定应用价值。半化学吸附有一定应用价值。天然产物化学天然产物化学6565物理吸附的基本规律物理吸附的基本规律 常用的物理吸附剂：常用的物理吸附剂： 硅胶、氧化铝（极性吸附剂）硅胶、氧化铝（极性吸附剂） 活性炭（非极性吸附剂）活性炭（非极性吸附剂） 极性吸附剂对极性物质具有较强的极性吸附剂对极性物质具有较强的亲和能力亲和能力(极

26、性强的溶质将被优先吸极性强的溶质将被优先吸附附),Rf值小值小 Rf值值 = 起始线至斑点中心的距离起始线至斑点中心的距离 起始线至溶剂前沿的距离起始线至溶剂前沿的距离天然产物化学天然产物化学66 溶剂极性越弱，则极性吸附剂对溶溶剂极性越弱，则极性吸附剂对溶质表现出的吸附能力就越强。质表现出的吸附能力就越强。 洗脱溶剂的极性增强，则极性吸附剂对洗脱溶剂的极性增强，则极性吸附剂对溶质的吸附能力随之减弱。溶质的吸附能力随之减弱。 溶质即使被极性吸附剂吸附，但一溶质即使被极性吸附剂吸附，但一旦加入极性较强的溶剂时，溶质即被旦加入极性较强的溶剂时，溶质即被溶剂置换下来。溶剂置换下来。 非极性吸附剂活性

27、炭非极性吸附剂活性炭的吸附能力与的吸附能力与极性吸附剂硅胶、氧化铝恰好相反。极性吸附剂硅胶、氧化铝恰好相反。天然产物化学天然产物化学6767极性及其强弱判断极性及其强弱判断化合物的极性：按下列官能团的顺序增强化合物的极性：按下列官能团的顺序增强 -CH2-CH2- -CH2-CH2-，-CH=CH-CH=CH-，R-ORR-OR，-COOR-COOR，C=OC=O，-CHO-CHO，-NHR-NHR, -NH, -NH2 2，R-OHR-OH，Ar-OH, -Ar-OH, -COOHCOOH化合物的极性：由分子中所含官能团的种类、化合物的极性：由分子中所含官能团的种类、数量及排列方式等综合因素

28、决定。数量及排列方式等综合因素决定。极性增强方向极性增强方向天然产物化学天然产物化学68OOOOCH3OMeORROROH例如：黄花夹竹桃七种强心苷成分结构通式例如：黄花夹竹桃七种强心苷成分结构通式天然产物化学天然产物化学69黄花夹竹桃果实中的强心苷成分黄花夹竹桃果实中的强心苷成分名名 称称 R R R黄夹苷黄夹苷A CHO (D-Glc)2 H黄夹苷黄夹苷B CH3 (D-Glc)2 H黄夹次苷黄夹次苷A CHO H H黄夹次苷黄夹次苷B CH3 H H黄夹次苷黄夹次苷C CH2OH H H黄夹次苷黄夹次苷D COOH H H单乙酰黄夹次苷单乙酰黄夹次苷B CH3 H COCH3极极性性大大

29、小小顺顺序序如如何？何？天然产物化学天然产物化学70（2 2）溶剂的极性）溶剂的极性: :与介电常数大小一致与介电常数大小一致 环己烷环己烷 1.881.88 苯苯 2.29 2.29 无水乙醚无水乙醚 4.47 4.47 氯仿氯仿 5.20 5.20 乙酸乙酯乙酸乙酯 6.11 6.11 乙醇乙醇 26.0 26.0 甲醇甲醇 31.2 31.2 水水 81.081.0极性递增极性递增天然产物化学天然产物化学71712、分配色谱法、分配色谱法纸色谱法纸色谱法基本原理是以纸为载体，以纸上所含水分基本原理是以纸为载体，以纸上所含水分或其他物质为固定相，用展开剂进行展开或其他物质为固定相，用展开剂

30、进行展开的分配色谱。供试品经展开后，可用比移的分配色谱。供试品经展开后，可用比移值值(Rf)表示其各组成成分的位置；表示其各组成成分的位置；分析时，样品在色谱中所显主斑点的颜色分析时，样品在色谱中所显主斑点的颜色（或荧光）与位置，应与对照品在色谱中（或荧光）与位置，应与对照品在色谱中所显的主斑点相同。所显的主斑点相同。f f原原中中心心至至斑斑中中心心的的距距离离R R= =原原中中心心至至展展前前沿沿的的距距离离天然产物化学天然产物化学72Rf = h/chc天然产物化学天然产物化学7373薄层色谱法（ TLCTLC ）定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平定义：将固定相均匀涂布在表面光滑的平

31、板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的板上，形成薄层而进行色谱分离和分析的方法方法操作过程：操作过程：铺板铺板活化活化 点样点样 展开展开 定位定位(定性定性)/洗脱洗脱(定量）定量）分离机制：吸附分离机制：吸附(分配分配,离子交换离子交换,空间排阻空间排阻)特点：分析快速、灵敏、显色方便特点：分析快速、灵敏、显色方便应用：产物杂质检查、纯度测定应用：产物杂质检查、纯度测定天然产物化学天然产物化学74天然产物化学天然产物化学75R Rf f与与K K有关，即与组分性质（溶解度）以及有关，即与组分性质（溶解度）以及薄层板和展开剂的性质有关。薄层板和展开剂的性质有关。色谱条件一定，色谱条件一定，R

32、Rf f只与组分性质有关，是只与组分性质有关，是薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱薄层色谱基本定性参数，说明组分的色谱保留行为。保留行为。薄层板一定，对于极性组分薄层板一定，对于极性组分展开剂极性展开剂极性大，大，R Rf f大（容易洗脱）大（容易洗脱）展开剂极性展开剂极性小，小，R Rf f小小 （不容易洗脱）（不容易洗脱）R Rf f范围：范围：0 R0 Rf f 11（组分迁移速度和距离（组分迁移速度和距离展开剂迁移速度和距离）展开剂迁移速度和距离） 天然产物化学天然产物化学7676柱色谱法柱色谱法 1、吸附柱色谱（吸附剂为固定相，以液、吸附柱色谱（吸附剂为固定相，以液体为流动相）体为

33、流动相）柱色谱法分为柱色谱法分为 装柱装柱(干法、湿法干法、湿法)、上样、洗脱、上样、洗脱 3步骤步骤2、分配柱色谱法分配柱色谱法利用物质在互不相溶的两相溶剂中分配利用物质在互不相溶的两相溶剂中分配系数不同，而达到分离的一种色谱方法。系数不同，而达到分离的一种色谱方法。天然产物化学天然产物化学77773、离子交换色谱法、离子交换色谱法固定相是一些带电荷的基团，固定相是一些带电荷的基团， 这些带电基这些带电基团通过静电相互作用与带相反电荷的离子团通过静电相互作用与带相反电荷的离子结合。结合。如果流动相中存在其他带相反电荷的离子，如果流动相中存在其他带相反电荷的离子，这些离子将与结合在固定相上的反

34、离子进这些离子将与结合在固定相上的反离子进行交换。行交换。33RSO HNa ClRSO NaH Cl阳离子交换树脂RN OHNa ClRN ClNa OH阴离子交换树脂天然产物化学天然产物化学7878交换树脂表面交换树脂表面天然产物化学天然产物化学79794、大孔吸附树脂、大孔吸附树脂不含交换基团，具有大孔结构的高分子吸不含交换基团，具有大孔结构的高分子吸附剂。一般为白色颗粒，附剂。一般为白色颗粒，20-60目。理化性目。理化性质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，不受质稳定，不溶于酸、碱及有机溶剂，不受无机盐类存在的影响。无机盐类存在的影响。分离原理：范德华引力或产生氢键吸附，分离原理：范德华引

35、力或产生氢键吸附，欲分离的天然产物成分依其分子体积的大欲分离的天然产物成分依其分子体积的大小及吸附力的强弱，在一定规格的大孔吸小及吸附力的强弱，在一定规格的大孔吸附树脂上，以适当的溶剂洗脱而分开附树脂上，以适当的溶剂洗脱而分开 。天然产物化学天然产物化学80805、凝胶色谱法原理：分子筛效应。具有多孔的凝胶原理：分子筛效应。具有多孔的凝胶就是分子筛。就是分子筛。大分子最先流出色谱柱，小分子最后大分子最先流出色谱柱，小分子最后流出。流出。常用的凝胶有常用的凝胶有葡聚糖凝胶、聚丙烯酰葡聚糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶，琼脂糖凝胶胺凝胶，琼脂糖凝胶。天然产物化学天然产物化学8181天然产物化学天然产物化学8

36、282凝胶过滤层析过程示意凝胶过滤层析过程示意图图小分子小分子大分子大分子凝胶基质凝胶基质凝胶凝胶珠珠天然产物化学天然产物化学836、高效液相色谱法、高效液相色谱法 待测样品由流动相带入柱内，在柱内各待测样品由流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行检成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。测，从而实现对试样的分析。 载体：液体载体：液体 如：甲醇（分析纯）如：甲醇（分析纯）7、气相色谱法、气相色谱法 待测样品进入进样口后热汽化，在柱内待测样品进入进样口后热汽化，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行各成分被分离后，依次进入检测器进行检测。检测。 载体：气体载体：气体 如：氮气、氢气等如：氮气、氢气等天然产物化学天然产物化学8484天然产物化学成分的预实验天然产物化学成分的预实验1、原理：根据各成分极性不同，先系统的分成几个不同部分，然后利用显色反应或沉淀反应，或结合纸色谱、薄板色谱，定性判断各个部分中可能含有的化合物类型。相似相溶天然产物化学天然产物化学852 2、天然产物化学成分的预试验流程、天然产物化学成分的预试验流程 P11 P11 图图2-12-13 3、天然产物化学成分的、天然产物化学成分的定性试验定性试验 P11 P114 4、天然产物化学成分的系统分离、天然产物化学成分的系统分离 P12 P12天