电针治疗对大鼠脊髓损伤后Nogo_A蛋白表达的影响

1、电针治疗对大鼠脊髓损伤后Nogo_A蛋白表达的影响         08-11-29 15:32:00     编辑：studa20             作者：李振鹏，孔抗美，陈育春，郭天明，陈泽锋，刘加贝   【摘要】  目的：探讨电针治疗对大鼠脊髓损伤(SCI后Nogo_A蛋白表达的影响。方法：以96只2月龄Wistar

2、大鼠为受试对象，SCI组于T9处行脊髓全横断，治疗组予电针治疗，采用Western blot测定各时间点及各组脊髓Nogo_A表达及变化,并以苏木精_伊红和免疫组化染色对受损脊髓进行形态学观察。结果：SCI后Nogo_A蛋白表达呈递增趋势，于14d后最强；经电针治疗，Nogo_A表达减少。结论：Nogo_A是SCI后脊髓神经纤维再生的主要抑制因子，电针治疗对Nogo_A表达具有明显的抑制作用。 【关键词】  电针；脊髓损伤；Nogo_A蛋白    AbstractObjective:  To study the effect of electr

3、oacupuncture on the expression of Nogo_A protein in rats with spinal cord injury(SCI. Methods: Ninety_six adult Wistar rats were randomly assigned into control group(A, SCI group(B, sham_treatment group(Cand electroacupuncture treatment group(D. Group B, C and D were received transect SCI at the T9

4、vertebrae level while group A was just opened the vertebra and their spinal cords were not wounded. Group D was treated with electroacupuncture. All the spinal cords of the trauma section were taken out at different time points after o_peration. Western blot and immunohistochemical methods were used

5、 to examine the change of the expression of Nogo_A in these tissue. Results： Just minim Nogo_A was found in the control group, while the manifold expression of Nogo_A was found after operation，especially at the end of the second week, the expression was inhibited by electroacupuncture. Conclusion: N

6、ogo_A is a major suppressor factor of spinal cord nerve fiber regeneration after SCI, and the electroacupuncture can obviously inhibit the expression of Nogo_A protein.    Key Wordselectroacupuncture，spinal cord injury，Nogo_A protein    脊髓损伤(SCI临床常见，致瘫率较高。电针是治疗SCI的重要方法,

7、其疗效已获得临床实践和动物实验1_2的证实，但其作用机制尚未完全明确。本实验通过电针治疗SCI大鼠，于不同时间点采集大鼠受伤脊髓段，以Western blot测定其Nogo_A蛋白表达，探讨电针治疗SCI的机制。    1  材料与方法    1.1  动物模型制作    Wistar大鼠(广东省实验动物中心提供96只(2月龄，体质量220270，雌雄各半，随机分为对照组(A组。24只和SCI组(72只。SCI组于T9处行脊髓全横断，然后再随机分为损伤组(B组，硬膜外腔不留置电极、治疗

8、对照组(C组，留置电极但不通电和电流刺激治疗组(D组，损伤部位上下端的椎间隙硬膜外腔留置电极，予G6805_2型多用治疗仪治疗，强度以大鼠有轻微肌肉抽动和无明显不安嘶叫为适，每天治疗30min，疗程至处死动物取标本前为止，各组24只。各组分别于术后1、7、14和28d取各损伤部位的脊髓组织(每组3只置_70冰箱保存备用。    1.2  Western blot测定Nogo_A蛋白    取各组脊髓样本40mg，加入细胞裂解液30L，冰浴下研磨匀浆，煮沸后7500r/min离心取上清液，再加入等体积的2×SDS上样

9、缓冲液，提取总蛋白，电泳，结束后按常规转膜。在膜封闭液内封闭，4保存6h，加一抗，与封闭液混匀后4冰箱过夜。TBS液清洗3次，加入封闭液后滴加二抗(1400稀释，室温振荡混匀1h，TBS清洗膜3次，加化学发光剂，在暗室条件下显影和定影制成X光片。将各组X光片扫描后采用C_IMAGING SYSTEMS软件进行灰度分析，以Nogo_A蛋白和内标蛋白(actin灰度的比值作为Nogo_A蛋白的相对表达量。    1.3  病理标本制备    术后1、7、14和28d时,随机取大鼠每组3只，质量浓度20g/L戊巴比妥钠(40mg/

10、kg腹腔注射麻醉后开胸，自左心室插管至主动脉，剪开右心耳，先灌注PBS 150mL，再灌注质量浓度40g/L多聚甲醛250mL，固定。2后取出以伤段为中心的长约20mm(810脊髓组织，放入相同固定液继续固定，24后常规石蜡包埋，连续切片(厚约4m，分别进行苏木精_伊红及Nogo_A抗体免疫组化染色，观察受损节段组织学改变。    1.4  免疫组化染色    免疫组化染色采用ABC法，切片脱蜡至水，微波修复抗原，滴加封闭液，及抗Nogo_A工作液，室温37 1d，PBS冲洗，DAB显色，苏木精轻度对比染色，脱水、封固。实验中设立严格的正常血清对照和阴性对照。    1.5  统计学处理    结果以±s表示，分别比较A、B、C组各时间点Nogo_A表达，采用t检验，0.05，SPSS10.0统计软件分析。    第3期  李振鹏等.电针治疗对大鼠脊髓损伤后Nogo_A蛋白表达的影响    2  结果&#