医学检验--微生物的种类

1、一.微生物的种类1 .非细胞型微生物：无典型细胞结构,无产生能量的酶系统,只能在细胞内生长,NC为DNA/RNAEX:virus2 .原核细胞型微生物：原始核呈环状裸露DNA无核膜核仁,细胞器只有核糖体.DNARNA同时存在分古生菌EX:产甲烷菌,嗜热嗜酸菌细菌EX:细,螺旋,线,立克,支,毛衣3 .真核细胞型微生物：细胞核分化程度高,有核膜核仁.细胞器完整EX:真菌二,格兰染色的细菌细胞壁比拟细胞壁G+紫色G-红色强度较坚韧较吮松厚度厚20-80nm薄,10-15nm肽聚糖层数多,可达50层少,1-2层肽聚糖含量多,占细胞壁干重50%-80%少,占细胞壁干重5%-20%糖类含量多,约45%少

2、,15%-20%脂类含量少,1%-4%多,11%-22%磷壁酸+-外膜一+对PENICILLIN的敏感性敏感不敏感三.格兰染色法1 .标本固定2 .先用碱性染料结晶紫初染3 .再加碘液媒染,使之生成结晶紫-碘复合物此时细菌均染成深紫色4 .用95%乙醇脱色,有些细菌被脱色,有些不能.5 .最后用稀释复红或沙皇复染.不被乙醇脱色仍保存为紫色的为G+菌,被乙醇脱色,复染成红色的为G-菌,革兰染色法在鉴别细菌,选择抗菌药物,研究细菌致病性等方面有重要意义.四.细菌生长繁殖条件一,营养物质1 .水,需营养物质必须先溶于水2 .碳源,合成菌体组分以及获得能量的主要来源,病菌主要从糖获得碳源.3 .氮源,

3、作为菌体成分的原料.4 .无机盐,1.构成有机化合物,成为菌体的成分2.作为酶的组成局部,维持酶的活性3.参与能量的储存和转运4.调节菌体内外渗透压5.某些元素与细菌的生长繁殖和治病作用密切相关.5 .生长因子,许多细菌需要自身不能合成的生长因子.二,氢离子浓度PH三,温度37四,气体五,渗透压五.细菌合成代谢产物1.热源质2.毒素与侵袭性酶3.色素4.抗生素5.细菌素6.维生素6 .常用湿热灭菌法1 .巴氏消毒法2.煮沸法3.流动蒸汽消毒法4.间歇蒸汽灭菌法5.压力蒸汽灭菌法7 .正常菌群与时机致病菌1 .正常菌群：正常寄居在宿主体内,对宿主无害而有利的微生物群的总称.2 .正常菌群的生理作

4、用：1.生物拮抗2.营养作用3.免疫作用4.抗衰老作用.3 .时机致病菌：当正常菌群与宿主间生态平衡失调时,一些正常菌群会成为机会致病菌而引起宿主发病.4 .时机致病条件：1.正常菌群寄居部位改变2.宿主免疫功能低下3.菌群失调八.内外毒素区别区别要点外毒素内毒素来源G+与局部G-G-编他基因质粒,前噬菌体,染色体基因染色体基因存在部位活菌分泌,少数崩解后释出细胞壁成分,菌裂解后释出化学成分蛋白质脂多糖稳定性60-80,30min破坏160,2-4h破坏毒性作用强,对组织器官有选择性毒害效应,引起特殊临床表现较弱,毒效应大致相同,发热,白细胞增多,微循环障碍,休克,DIC抗原性强,刺激机体产生

5、抗毒素,甲醛液脱毒形成类毒素弱,刺激机体产生的中和抗体作用弱,甲醛脱毒不产生类毒素九.致病性葡萄球菌的鉴定1.能产生金黄色色素2.有溶血性3.凝固酶试验阳性4.耐热核酸酶试验阳性5.能分解甘露醇产酸十.致病性葡萄球菌致病物质及所致疾病毒力因子生物学活性一.细胞外表结构荚膜/粘液层抑制吞噬和单核细胞增殖,促进粘附肽聚糖抑制炎性应答,抑制吞噬,启毒素样性磷壁酸与纤连蛋白结合,介导粘附蛋白A与IgG的Fc区反响,抑制吞噬,抗补体.系溶素溶解细胞膜,有细胞毒作用表皮溶解素引起皮肤剥脱性皮炎杀白细胞素PV破坏吞噬细胞,增强侵袭力肠毒素引起呕吐,腹泻,超抗原作用毒素休克综合征毒素引起多器官,多系统的功能紊

6、乱,超抗原作用三.酶类凝固酶使血浆纤维蛋白原转为纤维蛋白,使血浆凝固透明质酸降解结缔组织的透明质酸葡激酶水解纤维素脂酶水解脂肪DNA酶水解DNA触酶分解过氧化氢所致疾病：1 .侵袭性疾病化脓性感染：1.皮肤化脓性感染EX:毛囊炎等临床表现：脓汁金黄,病灶界限清楚,多为局限性2.各种器官的化脓性感染EX:气管炎,肺炎3.全身感染EX:败血症,脓毒血症.2 .毒素性疾病：1.食物中毒2.烫伤样皮肤综合征3.毒素休克综合征H一.链球菌致病物质及其所致疾病A群链球菌1 .致病物质：细胞壁成分1.粘附素.包括脂磷壁酸及F蛋白一定植与繁殖2.M蛋白.抗吞噬与反抗吞噬细胞胞内杀伤作用,与超敏反响有关3.肽聚

7、糖.致热,溶解血小板,提升血管通透性,诱发试验性关节炎外毒素类：1.致热外毒素：又称红疹毒素或猩红热毒素,人类猩红热,具有超抗原作用2.链球菌溶素：活动性风湿热,SLS对白细胞和多种组织细胞有破坏作用.3.侵袭性酶类：1透明质酸酶一分解细胞间质透明质酸,便于细菌扩散2链激酶一或溶纤维蛋白酶一溶解血块或阻止血浆凝固,有利于细菌扩散3链道酶一降解脓汁中粘稠的DNA,使脓液变稀薄2 .所致疾病：1.化脓性感染：1.皮肤和皮下组织感染2.其他系统感染2中毒性疾病：猩红热,链球菌毒素休克综合征3 .超敏反响性疾病：风湿热,急性肾小球肾炎十二.破伤风防治原那么1 .非特异性防治举措：正确处理伤口,及时清创

8、扩创,预防厌氧微环境产生；应用抗生素杀灭破伤风梭菌,以消除毒素的产生2 .特异性预防举措：3-6M儿童接种百白破三联疫苗一婴儿出生后3.4.5个月连续免疫三次,2.7Y各增强一次建立根底免疫.今后有可能引发破伤风时立即接种一针类毒素.未经根底免疫者,立即注射破伤风抗毒素以获得被动免疫3 .特异性治疗：已发病者早期足量使用破伤风抗毒素,先皮试,必要时可脱敏注射法或用人破伤风免疫球蛋白.抗菌治疗可用红霉素.十三.结核菌素试验原理和试剂：人感染结核分枝杆菌后,产生免疫力的同时会有四型超敏反响,再次注射观察有无四型反响炎症,可用于检测可疑患者及疫苗接种效果试剂OT含有结核分枝杆菌的肉汤培养物加热过滤液

9、,主要成分是结合蛋白,PPD纯蛋白衍生物是OT经三氯醋酸处理后的纯化物分PPDC-人结核分枝杆菌提取以及BCGPPD-卡介苗制成方法：PPDC&BCGPPD各5单位,两臂掌侧皮内注射,48-72H后红肿硬结小于5mm为阴性,大于为阳性,大于15mm为强阳性.PPDC侧大于BCGPPD为感染,反之为接种卡介苗所致结果分析：阳性一一疫苗接种成功,有特异性免疫力强阳性一一活动性结核病,尤其婴儿,阴性未感染过结核分枝杆菌或接种过卡介苗原发感染早期,正患严重结核病如全身粟粒样结核和结核脑膜炎无反响水平,或细胞免疫功能低下也可以为阴性.应用：1.诊断婴幼儿结核病2.测定接种卡介苗后效果3.在未接种

10、卡介苗的人群中进行结核分枝杆菌的流行病调查4.测定肿瘤患者的细胞免疫功能.十四、病毒的增殖过程以dsDNA为例1 .吸附：主要通过病毒外表的吸附蛋白与易感细胞外表的特异性受体相结合2 .穿入：1.吞饮-无包膜病毒2.融合-有包膜病毒3 .脱壳：在细胞的溶酶体酶的作用下脱壳释放出核酸4 .生物合成：dsDNA细胞核内合成DNA,细胞质内合成病毒蛋白.痘病毒例外因其本身携带DNA聚合酶,故都在胞质内合成.1利用细胞核内依赖DNA的RNA聚合酶转录出早期mRNA2 .于细胞质内用核糖体译成早期蛋白一非结构蛋白,DNA多聚酶等3 .利用子代DNA分子为模板大量转录晚期mRNA4 .继而译出晚期蛋白一结

11、构蛋白,主要为衣壳蛋白.5 .装配与释放：除痘病毒外DNA病毒均在核内组装,除正黏病毒外,大多数RNA病毒在胞质内组装.装配完后,裸露病毒随宿主细胞破裂而释放,有包膜的DNA&RNA病毒以出芽的方式释放到胞外.十五.持续性感染病毒在机体持续存在数月至数年,可出现病症,也可不出现病症而长期携带病毒,成为重要的传染源.原因：1.机体免疫功能弱,无法彻底去除病毒2.病毒存在于受保护部位,逃预防疫作用3.某些病毒抗原性差,机体难以产生免疫应答完全5.去除4.有些病毒产生缺损性干扰颗粒,改变了病毒增殖过程,形成持续性感染病毒基因整合到宿主细胞基因中,长期与宿主细胞共存.常见类型：1.潜伏感染,唇

12、疱疹2.慢性感染,HBV,HCV3.慢发病毒感染,HIV.十六.IFN干扰素：病毒或其他干扰素诱生剂刺激人或动物细胞所产生的一种糖蛋白,具有抗病毒,抗肿瘤和免疫调节等多种生物学活性.IFN具有广谱抗病毒的作用,但是只能抑制而无法杀灭病毒.具有相对的种属特异性,同种细胞活性最高,异种细胞无活性.种类：一型干扰素,第9对染色体短臂上基因编码,抗病毒作用强于免疫调节作用：IFN-%一人白细胞产生IFN-3人成纤维细胞产生.二型干扰素,第12对染色体长臂上基因编码免疫调节作用强于抗病毒作用：IFN-丫-T细胞以及NK细胞产生.抗病毒活性：IFN不直接灭活病毒,而是通过诱导细胞合成抗病毒蛋白AVP发挥效

13、应.作用机制：25-A合成酶途径：25'-A合成酶可导致病毒mRNA的降解机制1.由dsRNA激?S25'-A合成酶,使ATP多聚化,形成不定长度的寡聚腺甘酸25'-A225'-A再活化RNA酶LRNaseL3活化的RNaseL可切断病毒mRNA.PKR途径：PKR使蛋白译起始因子eIF磷酸化失去活性机制1.PKR在dsRNA存在下产生自身磷酸化而被激活2.活化的PKR作用于译起始因子eIF的亚基,使之磷酸化3.磷酸化后的eIF失去启动蛋白质译的水平,病毒多肽链的合成受阻.免疫调节及抗肿瘤活性：IFN具有免疫调节的功能,上调细胞免疫,下调体液免疫,尤其以IFN-

14、丫为重要.激活巨噬细胞,活化NK细胞,促进细胞MHC抗原的表达,增强淋巴细胞对靶细胞的杀伤作用,直接抑制肿瘤细胞的生长.但是IFN有流感样副作用,譬如冷战,发热和疲劳.十七.HBV传染源HBV患者或无病症HBV携带者.传播途径：1.血液或血制品传播2.母-婴传播3.性接触及密切接触传播HBV抗原,抗体检测用ELISA法主要检测HBsAg抗一HBs,HBeAg抗一Hbe及抗一HBc两对半必要日t也可检测PreSIAg和PreS2Ag和相应抗体.HBsAg抗一HBs：是感染HBV后最早出现的血清学标志.HBsAg阳性是HBV感染标志之一,也是筛选献血员的必检指标.HBsAg阴性并不能完全排除HBV

15、感染,由于S基因变异或低水平表达会使其难以检出.抗一HBs出现表示机体对HBV有免疫力.见于HBV恢复期,既往感染或接种疫苗后.HBcAg抗一HBc:HBcAg阳性说明病毒颗粒存在,但仅存在于肝细胞内,不易在血清中检测出.抗一HBc产生早,阳性提示HBV正处于复制状态,具有极强的传染性.抗一HBcIgG是感染过HBV的标志,检出低滴度提示既往感染,滴度高提示急性感染.HBeAg抗一Hbe：HBeAg与HBV的DNA多聚酶消长一致,阳性提示HBV在体内复制活泼,传染性强,转为阴性表示病毒复制减弱或停止,持续阳性有开展为慢性肝炎的可能.抗一Hbe阳性表示有一定免疫力,复制水平减弱,传染性降低,但对

16、抗一Hbe阳性还应该检测血液中HBV的DNA以全面了解病毒的复制情况.PreSIAg和PreS2Ag：与病毒活动性复制有关,且与血中HBVDNA勺含量成正比,故可作为病毒复制的指标.抗一PreSI及抗一PreS2见于急性乙肝恢复期的早期,检出提示病毒正在或已经被去除,预后良好.HBsAgHBeAg抗-HBs抗-HBe抗-HBcigM抗-HBcigGAnti-HBc结果分析+一一一一-HBV染者或无病症携带者+一一+-+急性或慢性乙肝传染性强,俗称-大三阳+-+-+急性感染趋向恢复俗称-小三阳+-+-急性或慢性乙肝或无病症携一一+一+-既往感染一一一一一+既往感染或窗口期-+-既往感染或接种过疫苗+-+急性感染+一+一一一+亚临床HBV染早期+-+-亚临床型或非典型感染一+一+一一+急性HBV感染中期一+一一一一+非典型急性感染实际用途1 .乙肝的诊断2 .判断传染性及HBM染的预后及转归.3 .筛选献血员4 .判断疫苗接种效果5 .流行病学调查血清HBV-DN能测一一病毒存在和复制最可靠的指标应用核酸杂交技术和常规PCR技术或荧光定量PCR技术直接检测血清中的HBV-DNA可测出极微量的