1型原胶原氨基末端前肽

1、文件已阅声明表«Procedurecirculationform»文件名称：总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书表号:KM-MP03?02?02已阅声明：本人承诺已了解此文件中的相关内容，今后的工作中将严格按照此文件执行，不随意对外传阅此文件，如有因与文件不相符的操作，责任由本人承担。（Ihaveunderstoodtherelevantcontentofthedocument.!willkeepthedocumentsecretandberesponsibletoproperlyperformprocedure）阅读人签名表姓名（NAME）职务(POSITION)签名(S

2、IGNATURE)签名日期（DATE）文件修改记录页«Procedureamendmentform»表号:KM-MP03.02.03顶俏内容更改说明（Descriptionof审批人批准生效日期NO.(PageModifiedcontents)(Approv(Approved)edby)date)1换版文件信息表(Procedureinformationform)表号：KM-MP03?02?04文件名称(Titleofdocument)(Doc.Code)总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书(KM-SOP-0300?363)版本号(EditionNo.)Edition3.0

3、生效日期(Operativedate)2008-03-13文控部门(Doc.ControlDept.)头验至义控至回顾日期/签名(Reviewdate/signature)回顾日期(Reviewdate)回顾人员签名(Signature)替代文件（Replaces）总1型胶原氨基端延长肽检测作业指导书（Edition2.0)存放地点（Location）/持有人（Holder）No.Location（Holder）1实验室文控室（陈彬）2化学发光室（段学成）No.Location(Holder)作者签名/日期(Authorsignature/date)付正乾审批人签名/日期(Authorized

4、by:Signature/Date)陈建波接收人签名/日期（Receiptor/Date）副本数(CopyNo.)八件是第个文件拷贝/共发放2个文件拷贝。总1型胶原氨基端延长肽检测检测作业指导书(Totalprocollagentype1amino-terminalpropeptide(t-p1np)byRochecobase601)原理(Testprinciple)“三明治”法，总检测时间：18分钟。第一次孵育：20M标本和一份生物素抗P1NP特异性单克隆抗体一起孵育。第二次孵育：在加入链亲和素包被的微粒和一份钉复合体标记的P1NP特异性单克隆抗体后，反应形成一“三明治”样抗原-抗体复合体，

5、复合体在链亲和素和生物素相互作用下形成固相。将反应液吸入检池中，检测池中的微粒通过电磁作用吸附在电极表面。未结合的物质通过ProCell除去。在电极上加以一定的电压，使复合体化学发光，用光电倍增器检测发光的强度。1 样本收集和储存(SpecimenCollectionandStorage):样本类型(sampletype):血活(serum)必须用标准试管或内有分离胶的试管收集。使用肝素锂和EDTA-K3血浆(plasma)。拒收标本(Specimenrejection)：严重溶血、脂血、或用叠氮钠防腐标本。标本用量(volume):200uL血活/血浆储存条件(samplestorageco

6、nditions):在15-25°C可保存24小时；在2-80可保存5天，C在-20°C可保存6个月。样品最多可以冻融5次。2 试剂(Reagent):2.1 Rochecobase601原装试剂。2.1.1 试剂内组份(components):I链霉亲和素包被的微粒nR1生物素化的抗totalP1NP抗体mR2三联毗噬钉标记的抗totalP1NP抗体IV使用说明书，分英语、法语、德语、葡萄牙语、西班牙语各一份。3.1.2未随试剂盒提供的组分-ElecsystotalP1NP定标液(P1NPCalSet)-Elecsys骨标志物质控品(PreciControlBone)-E

7、lecsys系统缓冲液(ProCellM)-Elecsys测量池活洗液(CleanCellM)-Elecsys系统缓冲液/测量池活洗液预热杯(PC/CC-Cup)-Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTipsCombimagazineM)-Elecsys废物盒(wasteliner)-Elecsys系统活洗液支架(SysCleanAdapterM)-Elecsys系统活洗液(SysClean)3.2试剂准备：将试剂从冰箱中取出并平衡至室温；不同批号的试剂不能混用；新试剂与前一批号试剂不同，则需做样本结果的比对，并记录，差异在允许范围内方可使用oPutreagentfr

8、omrefregeratorytoroomtemperatureforpropertime;Newreagentlotsmustbetestedinparallelwitholdlotsbeforeorconcurrentlywithbeingplacedinservicetoensurethatthecalibrationofthenewlotofreagenthasmaintainedconsistentresultsforpatientspecimens.Recodtheresults.3 仪器(Instrument):Rochecobase601。3.1 仪器准备(prepareapp

9、aratus)：使用前确保仪器水通道、液体垃圾通道畅通，保证系统活洗液(SysClean)、测量池活洗液(CleanCellM)、反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTipsCombimagazineM)、废物盒(wasteliner)、系统缓冲液(ProCellM)的足够。然后开机，在仪器的试剂盘中加入所需的试剂。4 安全防范(SafetyPrecautions):操作时必须穿戴手套和工作服；工作后的台面应消蠹擦洗；用过的加样枪头等耗材应作为医用垃圾处理；为了避免形成气溶胶，所有样品尽可能不要在空气当中暴露太长时间；遇到样本洒出，被污染的区域应立即用次氯酸钠溶液活洗，擦拭用的物品

10、应丢弃在标有生物污染的垃圾筒中。5 校准(CalibrationifApplicable):校准品储存和使用(calibrationmaterialstorageandusage):Rochecobase601原装校准品。要求在有效期内使用，过期的校准液应停止使用，保存丁2-8C可稳定至U有效期。Stopusingoverduecalibrationmaterial.useitwithinexpirationdate,storagein2-8C配制(calibrationmaterialredissolve):用复溶专用加样枪准确吸取1mL去离子水丁瓶中，溶解静置3小时，混匀并用有盖小子弹头分

11、装200此/个，标明配制日期，校准品批号，配制人以及有效日期，丁20C冻存备用。Labelconfectingdate,calibrationlot,personwhoconfected,expirationdate.then复溶后校准品成分的稳定性：保存丁(-20)C,可稳定2个月。6.2每批试剂必须用新鲜试剂(试剂经仪器注册24小时以内)标定一次，如再次标定即根据下列要求：试剂批号改变(Reagentlotchanges)同一批号的试剂盒在分析仪上使用超过1个月(28天)同一试剂盒在分析仪上使用超过7天根据需要：如质控数据超过额定的限度。Recalibrationbasedonqualit

12、ycontrolproblem6.3步骤：当使用新批号试剂之前，都需要对试剂盒进行校准。在校准(clibration)菜单中编辑校准液的资料，在两个样本管中分别加入至少200ul的1,2校准品并放到已指定位置的校准架中，放入样本通道中。然后在计算机屏幕上选择START项，再次点击START界面中的绿色START健。6.4结果判断：仪器会自动提示是否通过校准。如果未通过会有相应的原因解释以及解决方法的指导。校准后必须及时做质控且须获得通过6.5校准周期：质控在控的情况下一个月内对同批号试剂有效。如果质控值提示有需要校准时，应重新校准。6 操作过程(ProceduralSteps):7.1样本准备

13、：先检查标本是否合格(标本与作业指导书上标本要求是否一致)，核对验单上的条码和标本上的条码是否一致，按样本每天唯一号原则进行编号。将带有编号的标本离心取血活/血浆，将待测物加入相应的样本管。7.2取出空样本架，将含有血活/血浆样本管按先后顺序加入样品架中，将样品架推入样品槽中。因需要一定量样本做底，每个样品管至少加入样品200ul(样本用量75ul)。7.3在WORKLIST界面中输入实验号，指定totalP1NP项目。结果出来后，在WORKLIST菜单中选择需要打印的结果，打印后作为原始记录加以保留，并且操作者要签上名字及操作日期。7.4数据联机入系统(senddatatoLIS):计算机：

14、设备管理T接口管理T点击罗氏全自动化学发光仪T点击开始，出现预处理窗口t仪器：选择需要传送结果TSEND传送T回到计算机预处理窗口T传送。7.5数据审核(datacheckup):在确保仪器与电脑数据处理系统正常联机的情况下(即数据传送和接收无中断)，仔细核对每一个数据有无错误(如：误传、漏传)，是否与临床诊断相吻合，如发现异常情况，应仔细核对实验号与样本架号，原始导出结果与系统结果是否对应等，如有必要，复查该结果。7 质量控制（Qualitycontrol）:室内质控：使用罗氏骨代谢通用质控品（PCBONE）做质控，每天至少做两个浓度的值。两个浓度要求符合本项目要求。当质控达不到要求时，分析

15、原因，或重新定标；仍不能满足要求时，则做期间核查，检查仪器是否正常。室内质控操作过程。提前在仪器内设定好质控的靶值，SD值，在CONTROL菜单中指定质控架号、申请质控项目，质控品每管至少200ul质控品。拒绝标准：P1NP最大允许误差ALE为25%,室内质控CV为2.09%（低值），2.13%（高值），偏移为（低值）SD=1.52g/L高值）SD=18.42g/L根据公式计算SEc=（ALE-Bias）/CV-1.65，选择的质控规则为1-3s,2-2s,R4s,10x,当质控失控时，应按照室内质量控制程序处理。9.1 9线性范围分析测试范围（AMR）:5-1200g/L-51200g/L）

16、病人结果报告范围（CRR）:5-6000g/L-6000g/L）当结果超过AMR时，需要稀释，稀释材料（dilutionmaterial）:采用罗氏通用稀释液最大稀释倍数（dilutiontimes）:1:5超出检测限度需要稀释的样品，要重新申请该项目在Dilution中指定并指定稀释倍数（最大1:5）,.仪器会自动稀释检测按项目打出结果，作为原始记录加以保留。10 计算(CalculationsifApplicable)：无需人工计算。11 参考范围(ExpectValues):12 绝经前：15.1358.59pg/ml绝经后：所有女性：16.2773.87g/L接受HRT治疗：14.28

17、58.92g/L未接受HRT治疗：20.2576.31g/L结果解释(InterpretationofResults):可以直接报告所检测结果，无须进行结果解释。13 方法的局限性(MethodLimitations):接受过小鼠单抗治疗或体内诊断的病人会出现假阳性反应。检测结果可能与一些影响骨吸收的临床状况相混淆，如甲状旁腺功能亢进或甲状腺功能亢进。在预测骨质疏松进程、骨折危险度、甲状旁腺功能亢进或甲状腺功能亢进等方面，本试验的应用尚待证实。13.1 精密度(Precision)：批内精密度CV%<2.67、批问精密度CV%<2.130(批内精密度CV%<2.9、批间精密度

18、CV%<3.7)灵敏度(Sensitivity):<5.00ng/ml(<5.00ng/ml)13.3特异性(Specificity):所使用的单克隆抗体与如下项目交义反应均<1%：6-CrossLaps,N-MID?Osteocalcin,parathyroidhormone(PTH),and25-OHvitaminD。13.4 分析测试范围(AMR):5-1200g/(5-1200g/L)病人结果报告范围(CRR):5-6000g/L四000g/L)干扰物质(InterferingSubstances):胆红素影响(bilirubin):样本中胆红素的浓度小丁650mg/L,在实验允许的精密度范围内对结果没有影响。溶血影响(hemolysis):样本中血红蛋白的浓度小丁1.8g/dl,在检测允许的精密度范围内对结果没有影响。脂血影响(Lipemia):样本中内脂的浓度小丁2000mg/dL,在检测允许的精密度范围内对结果没有影响生物素影响(biotin):样本中生物素的浓度小丁50ng/ml,在检测允许的精密度范围内对结果没有影响13.5 注意事项(Notices):仅供体外诊断使用(useonlyforinvitrodiagnosis)试剂：28