葡聚糖凝胶色谱法测定注射用头孢曲松钠他唑巴坦钠中聚合物

1、对?中国药典?注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质氨苄西林二聚体定位方法的建议姚永青，刘英* (河南省食品药品检验所，郑州450003)摘要 目的：对?中国药典?注射用氨苄西林钠舒巴坦钠有关物质氨苄西林二聚体定位方法进行完善。方法：选择3根不同色谱柱，分别采用药典方法和氨苄西林系统适用性对照品标准图谱方法定位氨苄西林二 聚体峰，考察两者结果是否一致。结果：采用药典方法与氨苄西林系统适用性对照品法定位结果不一致。结论：现行标准欠妥，建议对二聚体的定位方法修改为：取氨苄西林系统适用性对照品适量，加初始流动相溶解并稀释制成每1 ml中约含2 mg的溶液，取10 g l注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准

2、图谱一 致。关键词：氨苄西林钠舒巴坦钠；氨苄西林二聚体中图分类号：R921.2文献标志码：A文章编号：Suggestionabout the Locating Method of Ampicillin Dimer -Related Substance of Ampicillin Sodium and Sulbactam Sodium for Injection in Chinese PharmacopoeiaYao Yongqing， Liu Ying * ( Henan Institute for Food and Drug Control ，Zhengzhou 450003)Abstrac

3、t Objective: To improve the locating method of Ampicillin dimer - related substance of Ampicillin Sodium and Sulbactam Sodium for Injection in Chinese Pharmacopoeia. Methods: Three different chromatographic columns were examined by pharmacopoeia method and Ampicillin system suitability standard diag

4、ram method，their results were inspected for consistency ot . Results: The results of two methods were not consistent. Conclusion: The current standard is inappropriate, the dimer locating method should be amended as: take the right amount of Ampicillin system suitability CRS, plus the initial mobile

5、 phase dissolved and diluted to make per 1 ml containing about 2 mg of solution, take 10 g linjected to liquid chromatograph, the recorded chromatograms should be consistent with the standard diagram.Key words: Ampicillin Sodium and Sulbactam Sodium ； Ampicillin dimer注射用氨苄西林钠舒巴坦钠由氨苄西林钠和3-内酰胺酶抑制剂舒巴坦钠

6、组成，收载于?中国药典?2021年版其有关物质应来自两原料药， 主要有氨苄西林二聚体和舒巴坦青霉 胺等2。大量的研究已经证明氨苄西林二聚体等3内酰胺类抗生素中的高分子聚合物可引发严重的过敏反响3-5，其含量直接影响过敏反响发生率 ，故对高分子聚合物的准确定位直 接关系到产品的平安性。笔者在试验过程中发现用现行标准定位氨苄西林二聚体存在问题，标准中有关物质项下规定：供试品溶液置60 C水浴1 h后，取10 g注入液相色谱仪，与氨苄西林峰相对保存时间 约1.7倍处的较大杂质峰为氨苄西林二聚体峰；而某样品在与氨苄西林峰相对保存时间约1.7倍处和2.9倍处均有杂质峰，且2.9倍处的杂质峰远大于1.7倍

7、处的杂质峰，究竟哪个杂质峰为 氨苄西林二聚体值得商酌。也有文献报道某些抗生素通过相对保存时间对杂质峰进行定位由 于色谱柱的保存行为易受色谱条件的影响，可能导致相对保存时间定位杂质峰有误7-8。因此本试验尝试用氨苄西林系统适用性对照品来定位氨苄西林二聚体峰，先用氨苄西林色谱 条件9确定二聚体峰的位置，然后用氨苄西林舒巴坦色谱条件分别进样氨苄西林系统适用性 对照品溶液和供试品高温破坏溶液，考察该方法定位二聚体与现行标准方法是否一致。1仪器与试药Waters2695/2487高效液相色谱仪及 Empower色谱工作站(美国 waters公司)；Sartorius BP211D 电子天平；Orion

8、Star pH 计(Thermo 公司)。氨苄西林系统适用性对照品(中国食品药品检定研究院，批号130618-202102)；注射用氨苄西林钠舒巴坦钠 (厂家A，规格1.5 g,批号20210904)；乙腈为色谱纯，磷酸二氢钾、 磷酸二氢钠、醋酸、磷酸均为分析纯，水为纯洁水。2方法与结果2.1色谱条件I 9色谱柱为 Agela Venusil XBP CL) (4.6 mm >250 mm, 5 询；流动相 A 为 12%醋酸溶 液-0.2 mol L-1磷酸二氢钾溶液-乙腈-水(0.5 : 50 : 50 : 900),流动相B为12%醋酸溶液-0.2 mol L-1磷酸二氢钾溶液-乙

9、腈-水(0.5 : 50 : 400 : 550),先以流动相 A-流动相B (85 : 15)等度洗脱，待氨苄西林峰洗脱完毕后立即按表 温35 C；检测波长254 nm ;进样量10卩。1表1色谱条件I梯度洗脱程序1进行线性梯度洗脱；流量1.0 ml min-1;柱时间/min流动相A/%流动相B/%085153001004501005085156085152.2色谱条件n色谱柱为 Agela Ven usil XBP Cj8(L) (4.6 mm > 250 mm , 5 卩 m)；流动相 A 为 0.02 mol-L-1磷酸二氢钠溶液(用 按表2进行线性梯度洗脱，1 mol L 1

10、磷酸溶液调节pH值至4.0 ±.1),流动相B为乙腈， 流量1.0 ml min-1;柱温35 C；检测波长230 nm；进样量10卩。表2色谱条件n梯度洗脱程序时间/min流动相A/%流动相B/%09371093740604050604051937609372.3溶液的制备2.3.1 溶剂氨苄西林系统适用性对照品溶液取氨苄西林系统适用性对照品适量，加初始流动相0.02 mol - L-1磷酸二氢钠溶液(用1 mol-L-1磷酸溶液调节pH值至4.0 ±.1)-乙腈(93 : 7)溶解并稀释制成每 1 ml中约含2 mg的溶 液，即得。2.3.2 供试品高温破坏溶液取供试品

11、适量，加初始流动相溶解并稀释制成每1 ml中约含氨苄西林3 mg的溶液，置60 °C水浴中加热1 h，取出，放冷，即得。2.4 试验结果色谱条件I取氨苄西林系统适用性对照品溶液，采用“ 2的色谱条件依法测定，记录色谱图，结果见图 1A。色谱条件H -1分别取氨苄西林系统适用性对照品溶液和供试品高温破坏溶液，采用“ 2.2的色谱条件依法测定，色谱柱为Agela Venusuil XBP C 18(L) (4.6 mm >250 mm , 5 m ,记录色谱图，结果见图 1B1C。比照图1A和图1B结果，供试品高温破坏溶液的色谱峰依次为氨苄西林(10.631 min )、峰5 (1

12、8.766 min )、氨苄西林开环二聚体(27.072 min )、氨苄西林闭环二聚体(29.598 min ) 和氨苄西林三聚体( 34.628 min )；依据药典，峰 5 应判为氨苄西林二聚体峰；而通过氨苄 西林系统适用性对照品定位结果可知峰 2和峰 3分别是闭环二聚体与开环二聚体， 与药典规 定不一致。3 'SKDDOCTI5on64 5U7.4937/90403 HY271.70.00 10.0020.0030.00u140.0050.0060'001分钟Iv1|1 1 |1 f1 | 1 1 1 1 |1 1|1|1 1 1 |1 I 1r)|ifir-jivi

13、Ifiv|0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.0060.00分钟=BCI1 1 11 I1 1 11 I1 1 1 1 91 1 1 I"1 1 1 1 B1 I1 1 BI1 11 1 I1 11 1 I1 1 1 1 I1 11 1 1 1 1"1 I0.005.0010.0015.0020.0025.0030.0035.0040.0045.0050.0055.0060.00分钟A.氨苄西林系统适用性对照品(色谱条件I) ； B.氨苄西林系统适用性对照品(色谱条件H) ; C.供试品 高温破坏(

14、色谱条件H) ； 1.氨苄西林；2.氨苄西林开环二聚体；3.氨苄西林闭环二聚体；4.氨苄西林 三聚体；5.峰5图 1 HPLC 色谱图(Agela Venusuil XBP C 18 色谱柱)2.4.3 色谱条件 n -2 更换色谱柱为 Thermo BDS HYPERSIL C 18 (4.6 mmX250 mm , 5 m), 其余操作同“ 项下，记录色谱图，结果见图2。供试品高温破坏溶液的色谱峰依次为氨苄西林(9.616 min )、氨苄西林闭环二聚体(28.695min )和氨苄西林三聚体(33.246 min)，与药典规定方法判断二聚体的结果不一致。I"0.00i|i10.

15、00r p 1 '20.001F|1HH1|H4130.0040.00r 1'50.00" i60.00分钟0.00 10.00620 9ri t | r i i20.0030.0040.0050.0060.00分钟64MZ 03A.氨苄西林系统适用性对照品； B.供试品高温破坏；1.氨苄西林；2.氨苄西林开环二聚体；3.氨苄西林闭环二聚体；4.氨苄西林三聚体图 2 HPLC 色谱图(Thermo BDS HYPERSIL C 18色谱柱)2.4.4 色谱条件n -3 更换色谱柱为 Agile nt HC-C 18(2) ( 4.6 mmK 250 mm , 5 m)

16、,其余操 作同“ 项下，记录色谱图，结果见图3。供试品高温破坏溶液的色谱峰依次为氨苄西林(12.219 min )、杂质1 (21.416 min )、氨苄西林开环二聚体(30.286 min)、氨苄西林闭环二聚体(32.678 min)和氨苄西林三聚体(37.886 min ),与药典规定方法判断二聚体的结果不一致。0.007008000O1 nsHz/ .210.00 20.00IIIIIIIII1II30.0040.0050.0060.00分钟I 1' F I0.00 10.0020.0030.0040.0050.0060.00分钟A.氨苄西林系统适用性对照品；B.供试品高温破坏

17、；1.氨苄西林；2.氨苄西林开环二聚体；3.氨苄西林闭环二聚体；4.氨苄西林三聚体；5.峰5图3 HPLC 色谱图(Agilent HC-C 18色谱柱)3讨论与小结3.1药典中对药品特定杂质的控制，目前常采用相对保存时间进行峰定位8。药典中的色谱方法通常不给出色谱柱的具体品牌而仅对其通用信息进行描述，由于不同品牌型号色谱柱选择性的差异，应用中溶质的保存值、色谱峰的别离度甚至色谱峰顺序都可能出现较大差异10-11。氨苄西林丙磺舒颗粒1121、氨苄西林钠、除注射用氨苄西林钠舒巴坦钠外， 其他记录的色谱图与标准图谱相比拟， 以此3根不同厂家不同型号的色谱柱，取氨苄3.2药典收载的与氨苄西林相关的品

18、种有氨苄西林、 注射用氨苄西林钠冋及注射用氨苄西林钠舒巴坦钠。 各品种均为取氨苄西林系统适用性对照品溶液进样， 定位二聚体等杂质。分别按药典方法和氨苄西林系统适 致。因此建议对本品二聚体峰的定位3.3参考上述品种项下定位二聚体方法，本文选用 西林系统适用性对照品溶液和供试品高温破坏溶液进样， 用性对照品标准图谱方法定位二聚体峰，两者结果不方法进行修改，建议修订为：取氨苄西林系统适用性对照品适量，加初始流动相溶解并稀释 制成每1 ml中约含2 mg的溶液，取10 注入液相色谱仪，记录的色谱图应与标准图谱 致。参考文献1 中国药典S. 2021 年版.二部.1426-14272 姚蕾，施亚琴，胡昌

19、勤.注射用氨苄西林钠舒巴坦钠中有关物质HPLC检测方法的改良J.中国抗生素杂志，2021, 34 (12): 734-7383 胡昌勤.抗菌药中高分子杂质的特性及抗菌药过敏反响(上)J.中国药师，2006, 9 ( 3): 238-2404 胡昌勤.抗菌药中高分子杂质的特性及抗菌药过敏反响(下)J.中国药师，2006，9 ( 4): 321-3235 金少鸿，胡昌勤.3内酰胺类抗生素过敏反响研究进展J.中国新药杂志，1994, 3 (4): 38-41 霍秀敏.3内酰胺类抗生素高分子杂质的研究J.药品评价，2005，2( 5)： 324-3267 张静霞，徐明琴，张春然 ，等.抗生素杂质的检测方法研究进展J.中国新药杂