残留溶剂测定法检验标准操作规程

1、1 .目的：建立残留溶剂测定法（二部）检验标准操作规程，并按规程进行检验， 保证检验操作规范化。2 .依据：2.1. 中华人民共和国药典2010年版二部。3 .范围：适用于所有用残留溶剂测定法（二部）测定的供试品。4 .责任：检验员、质量控制科主任、质量管理部经理对本规程负责。5 .正文：5.1. 药品中的残留溶剂系指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机溶剂。药品中常见的残留溶剂及限度见附表1,除另有规定外，第一、第二、第三类溶剂的残留限度应符合表1中的规定；对其他溶剂，应根据生产工艺的特点，制定相应的限度，使其符合产品规 范、药品生产质量管理规

2、范（GMP）或其他基本的质量要求。5.2. 本法照气相色谱法（附录V E）测定。5.3. 色谱柱5.3.1. 毛细管柱：除另有规定外，极性相近的同类色谱柱之间可以互换使用。5.3.1.1. 非极性色谱柱：固定液为100%的二甲基聚硅氧烷的毛细管柱。5.3.1.2. 极性色谱柱：固定液为聚乙二醇（PEG-20M）的毛细管柱。5.3.1.3. 中性色谱柱：固定液为（35%二苯基-（65%）甲基聚硅氧烷、（50% 二苯基-（50%二甲基聚硅氧烷、（35%二苯基-（65%）二甲基聚硅氧烷、（14% 氟丙基苯基-（86%二甲基聚硅氧烷、（6%氟丙基苯基-（94%二甲基聚硅氧 烷的毛细管柱等。5.3.1.

3、4. 弱极性色谱：柱固定液为（5%）苯基-（95%）甲基聚硅氧烷、（5%） 二苯基-（95%）二甲基硅氧烷的毛细管柱等。5.3.2. 填充柱：以直径为0.180.25mm的二乙烯苯-乙基乙烯苯型高分子多孔小 球或其他适宜的填料作为固定相。5.4. 系统适用性试验。5.4.1. 用待测物的色谱峰计算，毛细管色谱柱的理论板数一般不低于5000;填充柱的理论板数一般不低于1000。1.5。5.4.2. 色谱图中，待测物色谱峰与其相邻色谱峰的分离度应大于5.4.3. 以内标法测定时，对照品溶液连续进样 5次，所得待测物与内标物峰面 积之比的相对标准偏差（RSD不大于5%;若以外标法测定，所得待测物峰面

4、积 的RSDS不大于10%。5.5. 供试品溶液的制备。5.5.1. 顶空进样：除另有规定外，精密称取供试品 0.11g,通常以水为溶剂； 对于非水溶性药物，可采用 N, N-二甲基甲酰胺、二甲基亚碉或其他适宜溶剂； 根据供试品和待测溶剂的溶解度，选择适宜的溶剂且应不干扰待测溶液的测定。 根据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测 定的需要。5.5.2. 溶液直接进样：精密称取供试品适量，用水或合适的有机溶剂使溶解；根 据各品种项下残留溶剂的限度规定配制供试品溶液，其浓度应满足系统定量测定 的需要。5.6. 对照品溶液的制备：精密称取各品种项下规定检查的有机溶剂适量

5、，采用与制备供试品溶液相同的方法和溶剂制备对照品溶液；如用水作溶剂，应先将待测有机溶剂溶解在50%C甲基亚碉或N,N-二甲基甲酰胺溶液中，再用水逐步稀释。 若为限度检查，根据残留溶剂的限度规定确定对照品溶液的浓度；若为定量测定，为保证定量结果的正确性，应根据供试品中残留溶剂的实际残留量确定对照品溶 液的浓度；通常对照品溶液的色谱峰面积不宜超过供试品溶液中对应的残留溶剂 的色谱峰面积2倍。必要时，应重新调整供试品溶液或对照品溶液的浓度。5.7. 测定法。5.7.1. 第一法（毛细管柱顶空进样等温法）。5.7.1.1. 当需要检查有机溶剂的数量不多，且极性差异较小时，可采用此法。5.7.1.2.

6、色谱条件：柱温一般为40100C；常以氮气为载气，流速为每分钟 1.02.0ml;以水为溶剂时顶空瓶平衡温度为 7085C,顶空瓶平衡时间为30 60分钟；进样口温度为200c ;如采用火焰离子化检测器（FID）,温度为250C。 5.7.1.3.测定法：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。5.7.1.4. 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参与附表 2进行初筛。5.7.2. 第二法（毛细管柱顶空进样系统程序升温法）。1.1. 2.1.当需要检查的有机溶剂数量较多，且极性差异较大时，可采用此法。1.2. 22色谱条件：柱温一般先在40c维持8分钟，再以每分钟8c

7、的升温速率 升至120C,巳t持10分钟；以氮气为载气，流速为每分钟 2.0ml ;以水为溶剂时 顶空瓶平衡温度为7085C,顶空瓶平衡时间为3060分钟；进样口温度为 200C ;如采用FID检测器，进样口温度为250C。5723具体到某个品种的残留溶剂检查时，可根据该品种项下残留溶剂的组成 调整升温程序。5.724. 测定法：取对照品溶液和供试品溶液，分别连续进样不少于2次，测定待测峰的峰面积。5.725. 对色谱图中未知有机溶剂的鉴别，可参考附表3进行初筛。5.7.3. 第三法（溶液直接进样法）。5.7.3.1. 可采用填充柱，亦可采用适宜极性的毛细管柱。5.7.3.2. 测定法：取对照

8、品溶液和供试品溶液，分别连续进样23次，测定待测 峰的峰面积。5.7.3.3. 计算法。5.7.3.3.1. 限度检查：除另有规定外，按品种项下规定的供试品溶液浓度测定。以内标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积与内标峰面积之比不得大于对 照品溶液的相应比值。以外标法测定时，供试品溶液所得被测溶剂峰面积不得大 于对照品溶液的相应峰面积。5.7.3.3.2. 定量测定：按内标法或外标法计算各残留溶剂的量。5.8. 【附注】。5.8.3. 除另有规定外，顶空条件的选择。5.8.3.1. 应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空平衡温度。对沸点较高的残留 溶剂，通常选择较高的平衡温度；但此时应兼顾供试

9、品的热分解特性， 尽量避免 供试品产生的挥发性热分解产物对测定的干扰。5.8.3.2. 顶空平衡时间一般为3045分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够 的时间达到平衡。顶空平衡时间通常不宜过长，如超过 60分钟，可能引起顶空 瓶的气密性变差，导致定量准确性的降低。5.8.3.3. 对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的顶空条件。5.8.4. 定量方法的验证。5.8.4.1. 当采用顶空进样时，供试品与对照品处于不完全相同的基质中，故应 考虑气液平衡过程中的基质效应（供试品溶液与对照品溶液组成差异对顶空气-液平衡的影响）。由于标准加入法可以消除供试品溶液基质与对照品溶液基质不 同所致的基质效应

10、的影响，故通常采用标准加入法验证定量方法的准确性；当标 准加入法与其他定量方法的结果不一致时，应以标准加入法的结果为准。5.8.5. 干扰峰的排除：供试品中的未知杂质或其挥发性热降解物易对残留溶剂的 测定产生干扰。干扰作用包括在测定的色谱系统中未知杂质或其挥发性热降解产 物与待测物的结构相同（如甲氧基热裂解产生甲醇）。当测定的残留溶剂超出限 度，但未能确定供试品中是否有未知杂质或其挥发性热降解物对测定有干扰作用 时，应通过试验排除干扰作用的存在。对第一类干扰作用，通常采用在另一种极 性不同的色谱柱系统中对相同供试品再进行测定，比较不同色谱系统中对相同供试品再进行测定，比较不同色谱系统中测定结果

11、的方法。如两者结果一致，则可以排除测定中有共出峰的干扰。对第二类干扰作用，通常要通过测定已知不含该 溶剂的对照样品来加以判断。5.8.6. 含氮碱性化合物的测定。5.8.6.1. 普通气相色谱仪中的不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性 化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低，应采用惰性的硅钢材料或 锲钢材料管路；采用溶液直接进样法测定时，供试品溶液应不呈酸性，以免待测 物与酸反应后不易汽化。5.8.6.2. 通常采用弱极性的色谱柱或其填料预先经碱处理过的色谱柱分析含氮碱 性化合物，如果采用胺分析专用柱进行分析，效果更好。5.8.6.3. 对不宜采用气相色谱法测定含氮碱性化合物，

12、如N-甲基叱咯烷酮等，可采用其他方法如离子色谱法等测定。5.8.7. 检测器的选择：对含卤素元素的残留溶剂如三氯甲烷等，采用电子捕获检 测器（ECD）,易得到高的灵敏度。5.8.8. 由于不同的实验室在测定同一供试品时可能采用了不同的实验方法，当测定结果处于合格与不合格边缘时，以采用内标或标准加入法为准。5.8.9. 顶空平衡温度一般应低于溶解供试品所用溶剂的沸点10c以下，能满足检测灵敏度即可；对于沸点过高的溶剂，如甲酰胺、2-甲氧基乙醇、2-乙氧基乙醇、乙二醇、N-甲基叱咯烷酮等，用顶空进样测定的灵敏度不如直接进样，一般不宜用顶空进样方法测定。5.8.10. 利用保留值定性是气相色谱中最常

13、用的定性方法。色谱系统中载气的流速、载气的温度和柱温等的变化都会使保留值改变，从而影响定性结果。校正相 对保留时间（RART只受柱温和固定相性质的影响，以此作为定性分析参数较可 靠。应用中通常选用甲烷测定色谱系统的死体积（ 益）RART= kzlst' R -t0式中tR为组分的保留时间；t'R为参比物的保留时间。附表1:药品中常见的残留溶剂及限度溶剂名称限度溶剂名称限度第一类溶剂第二类溶剂（应该避免使用）（应该限制使用）苯0.0002二氧六环0.038四氯化碳0.00042-乙氧基乙醇0.0161, 2-二氯乙烷0.0005乙二醇0.0621, 1-二氯乙烷0.0008甲酰胺

14、0.0221, 1, 1- 三氯乙烷0.15正己烷0.029第二类溶剂甲醇0.3（应该限制使用）2-甲氧基乙醇0.005乙睛0.041甲基基酮0.005氯本0.036甲基环己烷0.118三氯甲烷0.006N-甲基口比咤咯烷酮0.053环己烷0.388硝基甲烷0.0051,2-二氯乙烯0.187口比咤0.02二氯甲烷0.06四氢曝吩0.0161,2-二甲基乙烷0.01四氢化泰0.01N, N-二甲基乙酰胺0.109四氢吠喃0.072N, N-二甲基甲酰胺0.088甲苯0.0891,1,2-三氯乙烯0.008一甲苯0.217溶剂名称限度溶剂名称限度第三类溶剂（药品GMP第三类溶剂（药品或其他质量要

15、求限制使GMP或其他质量要用）求限制使用）醋酸0.5甲基异基酮0.5内酮0.5异丁醇0.5甲氧基苯0.5正戊烷0.5止醇0.5正戊醇0.5仲丁醇0.5止丙醇0.5乙酸酯0.5异丙醇0.5叔丁基甲基醍0.5乙酸丙酯0.5异丙基苯0.5第四类溶剂（尚无足二甲基业硼0.5够毒理学资料）乙醇0.51,1-二乙氧基丙烷乙酸乙酯0.51,1-二甲氧基甲烷乙醛0.52,2-二甲氧基丙烷甲酸乙酯0.5甲酸0.5异丙醒正庚烷0.5甲基异内基酮乙酸异酯0.5甲基四氢吠喃乙酸异丙酯0.5石油醒乙酸甲酯0.5三氯醋酸3-甲基-1-丁醇酮0.50.5三氟醋酸 通常含有60%间二甲苯、14%对二甲苯、9%邻二甲苯和17%

16、乙苯。 药品生产企业在使用时应提供该类溶剂在制剂中残留水平的合理性论证报 告。附表2常见有机溶剂在等温法测定时相对于丁酮的保留值参考值非极性色谱柱极性色谱柱溶剂名称tR/minRART溶剂名称tR/minRART柱温40 C柱温40c甲醇1.8280.126正戊烷1.6820.032乙醇2.0900.268正己烷1.7870.075乙睛2.1790.315乙醛1.8420.097内酮2.2760.3681.9260.131异丙醇2.3560.411异丙醒1.9430.138正戊烷2.4870.481叔丁基甲基醍2.0050.163乙醛2.4890.482正庚烷2.0210.169甲酸乙酯2.5

17、220.501环己烷2.1590.225二甲氧基甲烷2.5840.5341,1-二氯乙烯2.2090.2451,1-二氯乙烯2.6090.547二甲氧基甲烷2.2430.259乙酸甲酯2.6350.561甲基环己烷2.4050.324二氯甲烷2.6550.572内酮2.8760.515硝基甲烷2.8070.654甲酸乙酯2.9670.551止丙醇2.9820.748乙酸甲酯3.0000.5641,2-二氯乙烯3.109.8171, 2-二氯乙烯3.3470.705叔丁基甲基醍3.2520.894四氢吠喃3.4030.727.酮3.4491.000甲基四氢吠喃3.4810.758仲丁醇3.666

18、1.117四氯化碳3.6350.821正己烷3.8981.2421,1,1-三氯乙烷3.6530.828异丙醒3.9081.247乙酸乙酯3.8100.891乙酸乙酯3.9131.250乙酸异丙酯3.9800.960三氯甲烷3.9541.272甲醇4.0620.993四氢吠喃4.2641.439酮4.0791.000异丁醇4.2641.4401,2-二甲氧基乙烷4.6041.2121,2-二氯乙烷4.5171.576甲基异内基酮4.7161.2571,1,1-三氯乙烷4.8081.733二氯甲烷4.7581.274甲基异内基酮4.9761.823异丙醇4.8221.3001,2-二甲氧基乙烷4

19、.9851.828乙醇4.9751.362苯5.2811.988苯4.9771.362乙酸异丙酯5.3112.004乙酸丙酯6.0201.784止醇5.3402.019三氯乙烯6.6432.035四氯化碳5.4702.089甲基异基酮7.2022.261环己烷5.5832.150乙睛7.3682.328甲基四氢吠喃5.6762.201乙酸异酯7.4972.380三氯乙烯6.7602.785三氯甲烷7.9852.577二氧六环6.8232.819仲丁醇8.3902.7406.9572.8918.7462.884正庚烷7.4343.148止丙醇9.2383.083乙酸丙酯4.4783.172二氧六

20、环10.3353.526甲基环己烷8.6283.7921,2-二氯乙烷10.8273.724甲基异基酮8.7382.851乙酸丁酯11.0123.7993-甲基-1-丁醇8.8703.922甲基基酮11.4863.990口比咤9.2834.145甲烷1.60211.1805.168柱温80c正戊醇11.3825.276异丁醇3.5773.045甲烷1.594止醇4.4604.334柱温80 c硝基甲烷4.8854.948乙酸异酯3.6112.099异丙基苯5.2885.543甲基基酮3.8592.345口比咤5.6256.035乙酸丁酯4.2992.7783-甲基-1-丁醇5.9346.486

21、氯苯5.2533.726氯苯6.4397.223甲氧基苯7.4365.890正戊解7.3328.527异丙基苯8.1486.589.酮2.1761.000酮2.5021.000甲烷1.491甲烷1.493柱温120c柱温120c甲氧基苯3.8379.890四氢化泰8.06729.609四氢化泰7.42724.484酮1.6301.000酮1.6501.000甲烷1.405甲烷1.404附表3常见有机溶剂在程序升温法测定时相对于丁酮的保留值参考值非极性色谱柱极性色谱柱溶剂名称tR/minRART溶剂名称tR/minRART甲醇1.8460.127正戊烷1.6910.033乙醇2.1210.272

22、正己烷1.8070.076乙睛2.2010.314乙醛1.8560.094内酮2.3030.3671.9570.131异丙醇2.4010.419异丙醒1.9660.135正戊烷2.5120.477叔丁基甲基醍2.0530.167乙醛2.5190.481正庚烷2.0630.171甲酸乙酯2.5440.494环己烷2.2170.228二甲氧基甲烷2.6110.5291,1-二氯乙烯2.2670.2461,1-二氯乙烯2.6230.535二甲氧基甲烷2.3030.260乙酸甲酯2.6650.558甲基环己烷2.4880.328二氯甲烷2.6740.562内酮2.9880.513硝基甲烷2.8390.

23、649甲酸乙酯3.0940.552止丙醇3.0510.760乙酸甲酯3.1260.5641,2-二氯乙烯3.1280.8011, 2-二氯乙烯3.5110.707叔丁基甲基醍3.3020.892四氢吠喃3.5610.725.酮3.5071.000甲基四氢吠喃3.6530.759仲丁醇3.7561.131四氯化碳3.8210.822正己烷3.9661.2411,1,1-三氯乙烷3.8330.826异丙醒3.9710.244乙酸乙酯4.0170.894乙酸乙酯3.9811.249乙酸异丙酯4.2070.964三氯甲烷4.0050.262甲醇4.2950.997四氢吠喃4.3870.462酮4.3031.000异丁醇4.3971.4681,2-二甲氧基乙烷4.8751.2121,2-二氯乙烷4.61241.581甲基异内基酮5.0051.2601,1,1-三氯乙烷4.8431.702二氯甲烷5.0411.273甲基异内基酮5.0871.830异丙醇5.0691.2841,2-二甲氧基乙烷5.0991.83