治疗乙型肝炎新药肝龙胶囊的药效学初步研究

1、治疗乙型肝炎新药肝龙胶囊的药效学初步研究 作者：杜一民， 陈鸿珊 ， 李树楠， 李壮， 李小兵， 张华明， 方春生 【关键词】 肝龙胶囊；,鸭乙型肝炎病毒；,鸭乙肝动物模型；,实验性肝损伤；,美洲大蠊摘要：目的观察肝龙胶囊对鸭乙型肝炎病毒的抑制效果和对实验性肝损伤的保护作用。方法（1）以鸭乙型肝炎病毒（DHBV）静脉注射感染雏鸭为模型，于感染第7天后分组灌胃肝龙（GL）胶囊浸膏0.5，1.5，3.0 gkg1d1，阳性对照组给予无环鸟苷(ACV)或磷羧基甲酸钠(PFA)。采用斑点杂交方法检测鸭血清DHBVDNA，以病毒抑制率为疗效指标；（2）以昆明种小鼠腹腔注射CCl4肝损伤为模型，给予GL浸

2、膏(200 mgkg1)。测定SGPT值，并取肝脏作病理形态学观察。结果（1）GL三个不同剂量组对DHBV均有不同程度的抑制作用，有一定的量效关系；（2）GL降低CCl4肝损伤小鼠血清SGPT值并减轻肝细胞损伤。论文论文参考网结论肝龙胶囊可抑制雏鸭体内DHBVDNA的复制并能保护CCl4所致的小鼠肝损伤。关键词：肝龙胶囊； 鸭乙型肝炎病毒； 鸭乙肝动物模型； 实验性肝损伤； 美洲大蠊The Hepatic Pharmacological Effects of Ganlong Capsules in vivo.Abstract：ObjectiveTo observe the antiviral

3、activity of Ganlong Capsule against duck Hepatitis B virus( DHBV) and its protective effects on experimental liver injury in vivo.Methods(1) Experimental researches on antiviral activity of Ganlong Capsules against duck hepatitis B virus: The duck Hepatitis B model was made by injecting DHBV into th

4、e veins of one-day-old Beijing duck on the seventh day after infected by DHBV, Ganlong Capsule was given by intragastric administration for 10 days to group I (0.5 gkg1d1), group II(1.5 gkg1d1), group III(3.0 gkg1d1), bid10 d, and detected the levels of DHBV-DNA in the duck blood sera obtained separ

5、ately on the day before giving Ganlong Capsule, the fifth day and tenth day after giving Ganlong Capsule, and the third day after withdrawing Ganlong Capsule, by serum dotblot hybridization. The trial was compared with acyclovor(ACV) or phosphonoformate(PFA). (2) Protective effects of Ganlong capsul

6、e on experimental liver injury in mice: Acute hepatic injury was induced by intraperitoneal injection of 0.2% CCl4 10 mlkg1, Ganlong(200 mgkg1) was given by intragastric or intraperitoneal administration for 2 days, bid. The serum SGPT were examined and the histopathological changes of hepatic tissu

7、e was measured.Results(1)The results of three experiments showed that the levels of sera DHBVDNA decreased in the treatment groups of Ganlong, and in a dose-effect manner. The group III(3.0 gkg1d1) inhibited (P0.01) the serum DHBVDNA significantly, and after stopping the treatment for 6 days, serum

8、DHBV-DNA level did not return significantly, and the inhibit effects were no different,compared with the treatment group of phosphonoformate(PFA) or acyclovor(ACV). (2) Ganlong(200 mgkg1) could obviously inhibit the increase of serum SGPT, and histological examination showed that hepatic damages of

9、Ganlong treated mice were less severe than those of CCl4 control group.ConclusionThese results suggested that Ganlong Capsule markedly inhibited duck hepatitis virus replication and had protective effects on experimental hepatic injury in vivo.Key words：Ganglong Capsule; Hepatitis B virus; Animal he

10、patitis model; Experimental hepatic injury； Periplaneta americana L. 我国是乙肝高发国之一，乙型肝炎感染率高、危害严重。目前，用于治疗乙肝的药物有数百种，但仍缺乏理想的防治药物。云南大理学院研制的治疗乙肝的新药肝龙胶囊，是国家实行新药研究开发登记备案制以来，国家食品药品监督管理局正式登记在案的抗肝炎中药新药1，具有疗效较好、价廉、给药方便、无副作用等优点2，目前已经完成临床试验，正在申请试生产。该药由提取自昆虫美洲大蠊Periplaneta americana L.的活性成分研制，对实验性肝损伤有一定的保护作用，并能抑制雏鸭体

11、内鸭乙型肝炎病毒的复制。现将研究结果报道如下。1 材料1.1 药物 肝龙胶囊和肝龙浸膏由云南大理医学院药理教研室研制，浸膏干粉用生理盐水配成所需浓度或制成注射液；阳性对照药物无环鸟苷(ACV)粉剂由湖北医药工业研究院提供，磷羧基甲酸钠（PFA）粉剂由上海第十二制药厂提供，临用前均生理盐水配成所需浓度。1.2 鸭乙型肝炎病毒 自然感染鸭乙型肝炎病毒的上海麻鸭血清，选用DHBVDNA强阳性者(+)，70保存备用。1.3 动物 1日龄北京鸭，购自北京禽蛋养鸭场；昆明种小鼠，购自云南医学实验动物中心，体重1822 g，雌雄兼有。1.4 主要试剂DHBVDNA探针：克隆自安徽庐江鸭DHBV全基因组（LJ

12、76株）质粒，由中国医学科学院生物技术研究所提供，32PdCTP标记探针，购自北京福瑞生物技术工程公司；缺口翻译药盒购自普洛麦格公司(Promega Co.)；Sephadex G50、Ficoll、PVP，购自瑞典Pharmacia公司；SDS为西德Merck公司产品；鱼精DNA、牛血清白蛋白为中国科学院生物物理所产品。硝酸纤维膜(0.45 m)，美国MSI公司产品。四氯化碳(CCl4)溶于芝麻油，浓度为0.2%。2 方法2.1 抑制雏鸭体内鸭乙型肝炎病毒的复制实验2.2 对CCl4所致小鼠肝损伤的保护作用实验2.3 结果处理和统计分析鸭血清DHBVDNA OD490 nm值和SGPT值均采

13、用均值(s)。计算每组鸭不同时间血清DHBVDNA OD490 nm均值，并将每组鸭用药后第5天、第10天和停药后第3天血清DHBVDNA水平与给药前比较，计算每组鸭用药后不同时间和停药后血清DHBVDNA的抑制率。DHBVDNA抑制率(I)=(给药前OD值给药后OD值)/给药前OD值100；统计学采用SPSS10.0软件，单因素方差分析（OneWay ANOVA）。其中鸭血清DHBVDNA OD490 nm值将各给药组不同时间DHBVDNA抑制率分别与病毒对照相同时间的同一指标比较，计算P1值，以确定疗效。将各给药组不同时间DHBVDNA抑制率分别与阳性药物对照组相同时间的同一指标比较，计算

14、P2值，比较GL与阳性药物之间的药效差别。3 结果3.1 GL对雏鸭体内鸭乙型肝炎病毒的抑制效果论文论文参考网 表1 肝龙胶囊（GL）对DHBV感染雏鸭体内DHBVDNA的抑制作用(略)给药组治疗不同时间的DHBVDNA抑制率分别与病毒对照组相应时间DHBVDNA的抑制率比较： P10.05, P10.01；阳性对照组不同时间DHBVDNA的抑制率分别与GL各剂量组相应时间DHBVDNA的抑制率比较, P20.05, P20.01从实验结果可见，雏鸭感染DHBV后第7天血清DHBVDNA均呈阳性，在整个实验过程中，病毒对照组鸭血清DHBVDNA水平虽有一定程度的波动，但无显著性差异。说明数值差

15、别为鸭个体差异所致自然波动。3.2 GL对CCl4所致小鼠肝损伤的保护作用表2 预先给予肝龙浸膏对CCl4所致小鼠SGPT及其肝脏病理形态学的影响(略)* P0.05； ip: 腹腔注射给药；ig: 灌胃给药表3 肝龙浸膏对CCl4肝损害的治疗作用及其肝脏病理形态学的影响(略)* P0.05； ip: 腹腔注射给药；ig: 灌胃给药4 讨论参考文献：1 肖小河，赵艳玲，袁海龙，等. 21世纪抗肝炎中药研究开发的机遇与挑战J.中国中药杂志，2001，26（10）：662.2 谢荣慧，刘云华，赵玉蓉. 肝龙胶囊治疗慢性乙型肝炎疗效分析J. 中西医结合肝病杂志，2003，13（6）：366.3 陈渊卿，顾建人，蒋惠秋，等. 斑点杂交实验直接检测血清中乙型肝炎病毒DNA.中华传染病学杂志J.1983，1（2）：63.4 上海市医学化验所.临床生化检验，上册M.上海：上海科技出版社，1982：332.5 沈 杰. 几种常见肝毒剂致肝损伤机制的研究现况J.生理科学进展，1990，（1）：70.6 Motoyukis,Hiromasa I,Tamony Y,et al. Induction of antibacterial activity in the haemolymph of the silkworm,Bomby