芹菜降脂胶囊质量标准研究

1、芹菜降脂胶囊质量标准研究                             作者：孟青，郭晓玲，姜笑寒，冯毅凡【摘要】  目的 建立芹菜降脂胶囊的质量标准。方法 采用薄层色谱法鉴别芹菜胶囊中的芹菜甲素、芹菜素；采用高效液相色谱法测定胶囊中二者的含量。结果 在薄层色谱中检出了芹菜甲素、芹菜素；芹菜甲素平均回收率为9

2、8.90（n=6）,RSD=1.9；芹菜素平均回收率为97.97（n=6）,RSD=1.8。结论 所建立的方法可靠、准确、专属性强，可有效控制芹菜降脂胶囊的质量。 【关键词】  芹菜降脂胶囊；芹菜甲素；芹菜素；薄层色谱法；高效液相色谱法Abstract:Objective To establish the quality standard for Qincaijiangzhi capsules. Methods Thin Layer chromatography (TLC) and high performance liquid chromatography (HPLC) were

3、used to identify and determine butylphthalide and apigenin in Qincaijiangzhi capsules. Results Average recovery rate for butylphthalide：98.90（n=6）,RSD=1.9; and average recovery rate for apigenin:97.97（n=6）, RSD=1.8. Conclusion The method was reliable, accurate and specific, and could be used in qual

4、ity control of Qincaijiangzhi capsules.Key words:Qincaijiangzhi capsules; butylphthalide; apigenin ;TLC;HPLC芹菜籽为伞形科植物旱芹的干燥成熟果实，具有降血压、抗脑缺血、健脑益智、镇静催眠、抗惊厥作用13 。常用于治疗高血压症，脑卒中、老年性、血管性痴呆症。其主要含有黄酮及其苷类成分、苯酞类衍生物、挥发油、香豆精类成分 4,5。其中黄酮类、苯酞类成分显主要药理活性2，3，而黄酮类成分主要为芹菜素，苯酞类成分主要为芹菜甲素、乙素。芹菜降脂胶囊是由芹菜籽超临界CO2提取物(芹菜油)和芹菜籽黄酮

5、提取物加辅料按一定配比混匀制成，是一种新的预防动脉硬化的天然植物保健品。本文建立了制剂中芹菜甲素及芹菜素的TLC鉴别及HPLC含量测定方法。1  仪器与试药1.1  仪器      Waters2695?2996高效液相色谱仪；BP210 D型十万分之一电子天平（德国Sartorius公司）。1.2 试药       芹菜甲素对照品（自制 ，批号20051025，含量98.5%）、芹菜素对照品（上海友思生物技术有限公司，批号20050921，含量98.5%）；薄层层

6、析用硅胶G（青岛海洋生物制品厂）；甲醇、乙腈为色谱纯；其余试剂均为分析纯。芹菜降脂胶囊(自制，批号:070305、070306、070307)。2  薄层鉴别2.1  芹菜甲素的鉴别    取本品内容物1 g，加石油醚50 mL,超声(功率360 W，频率40 kHz)30 min，过滤，蒸干残渣,加甲醇制成200 mg/mL的溶液,作为供试品溶液。按处方取缺芹菜油提取物的阴性样品1 g，同法制成阴性对照溶液；另取芹菜甲素对照品适量，加甲醇制成1 mg/mL的溶液作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 L，分别点于同一硅胶G254板上，以石油醚?

7、惨宜嵋阴寤?比91）为展开剂，置预饱和15 min的展开缸内，展开，取出，晾干。在荧光254 nm下检视，供试品色谱中在与对照品相应的位置上显相同颜色斑点。阴性对照无干扰，见图1。2.2 芹菜素的鉴别    取本品内容物1 g，加甲醇140 mL，质量分数25盐酸20 mL，回流提取1 h，滤过，蒸干残渣，加甲醇制成200 mg/mL的溶液，作为供试品溶液。按处方取缺芹菜黄酮提取物的阴性样品1 g，同法制成阴性对照溶液；另取芹菜素对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液作为对照品溶液。吸取上述3种溶液各5 L，分别点于同一硅胶G板上，以苯?踩?氯甲烷?参匏?

8、乙醇?脖?醋酸?菜?（体积比25.510.51）的下层溶液为展开剂，置预饱和15 min的展开缸内，展开，取出，晾干，喷以0.8AlCl3溶液加热至斑点显色清晰。供试品色谱中在与对照品相应的位置上显相同颜色斑点，而阴性对照无干扰，见图2。3 芹菜甲素的含量测定3.1  色谱条件    色谱柱：Waters X Bbridge C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 m），流动相：甲醇?菜?(体积比5545)； 流速：1.0 mL/min； 检测波长：230 nm；柱温：30 ；进样量：20 L。理论塔板数以芹菜甲素峰计不低于3 000。3

9、.2  溶液的制备3.2.1  对照品溶液的制备    精密称取芹菜甲素对照品适量，加甲醇制成质量浓度为0.890 2 mg/mL的对照品溶液。3.2.2  供试品溶液的制备精密称取胶囊内容物50 mg，置10 mL的量瓶中，加入适量甲醇溶解，超声30 min，加甲醇定容至刻度，滤过，即得。3.2.3  阴性对照溶液的制备    取缺芹菜油提取物的阴性样品，按“3.2.2”项下制备，即得。3.3  专属性试验    分别吸取芹菜甲素对照品、阴性样品及胶囊内

10、容物供试品溶液各20 L，依法测定。在此条件下，阴性对照对芹菜甲素测定无干扰。说明本方法专属性强，且芹菜甲素与其相邻组分峰达到基线分离，理论塔板数以芹菜甲素计不低于3 000。见图3。3.4  标准曲线的制备      精密量取上述对照品贮备液分别用甲醇稀释制成质量浓度为8.902、35.61、89.02、106.8、142.4、178.0 g/mL的溶液,分别进样，以峰面积 (A)对质量浓度()进行回归分析,得回归方程:A=31520 -18130,结果表明芹菜甲素在8.902178.0 g/mL范围内线性关系良好（r=0.999

11、9）。3.5  精密度试验       精密吸取质量浓度89.02 mg/mL对照品溶液10 L, 重复进样6次，测定峰面积的RSD为0.7，表明精密度良好。3.6  重复性试验       精密称取同一批样品内容物6份，按“3.2.2”项下制备。依法测定芹菜甲素的含量为0.901%，RSD值为1.1，结果表明方法重复性良好。3.7  稳定性试验      取同一份“3.2.2”项下供试品溶液，每

12、隔2 h进样，测定芹菜甲素的含量，计算RSD值为0.3，表明样品溶液在8 h内稳定。3.8  加样回收率试验      精密称取同一批号胶囊内容物6份，每份25 mg，分别加入质量浓度为111.3 mg/mL芹菜甲素对照品溶液1、2、3 mL，按“3.2.2”项下制备，依法测定。测得芹菜甲素平均回收率为98.9（n6），RSD1.9，结果见表1。表1  芹菜甲素加样回收率试验（略）3.9  样品的测定      分别称取3批胶囊内容物（批号：070305、07030

13、6、070307），每批3份，按“3.2.2”项下制备成供试品溶液，依法测定，结果3批胶囊中芹菜甲素含量分别为：0.901%、0.909%、0.904%。4  芹菜素的含量测定4.1  色谱条件      色谱柱：Waters X Bridge C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 m），流动相：乙腈?菜?擦姿幔?按表2条件进行梯度洗脱；流速：1.0 mL/min； 检测波长：340 nm；柱温：30 ；进样量：20 L。理论塔板数以芹菜甲素峰计不低于3 000。表2  洗脱梯度条件（略）4.2&

14、#160; 溶液的制备4.2.1  对照品溶液的制备    精密称取芹菜素对照品适量，加甲醇制成质量浓度为64.03 g/mL的对照品溶液。4.2.2  供试品溶液的制备    称取胶囊内容物50 mg，精密称定， 置100 mL的圆底烧瓶中，加入甲醇7mL、25%盐酸1 mL，回流1 h，水解液滤过，挥干溶剂，用甲醇定容至10 mL容量瓶中，滤过，即得。4.2.3  阴性对照溶液的制备    取缺芹菜黄酮提取物的阴性样品，按“4.2.2”项下制备，即得。4.3 专属性试验&

15、#160;     分别吸取芹菜素对照品、阴性样品及胶囊内容物供试品溶液各20 L，依法测定。在此条件下，阴性对照对芹菜素测定无干扰，说明本方法专属性强。芹菜素与其相邻组分峰达到基线分离，理论塔板数以芹菜素计不低于3 000。见图4。4.4  标准曲线的制备      精密吸取上述芹菜素对照品溶液1、2、2.5、4、6、8 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成质量浓度为6.403、12.81、16.01、25.62、38.42、51.22 g/mL的溶液,分别进样，以峰面积 (A)对质量

16、浓度() 进行回归分析,得回归方程: A=49523 -14689,结果表明芹菜素在6.40351.22 g/mL范围内线性关系良好（r=0.999 9）。4.5  精密度试验       精密吸取16.01 g/mL芹菜素对照品溶液10 L,重复进样6次，测定峰面积的RSD为0.3，表明精密度良好。4.6  重复性试验       精密称取同一批样品内容物6份，按“4.2.2”项下制备。依法测定芹菜素的含量为0.182%，RSD值为1.5，表明方法重复性

17、良好。4.7  稳定性试验      取同一份“4.2.2”项下供试品溶液，每隔2小时进样，测定芹菜素的含量，计算RSD值为1.2，表明样品溶液在8 h内稳定。4.8  加样回收率试验      精密称取同一批号胶囊内容物6份，每份25 mg，分别加入质量浓度为25.05 mg/mL芹菜素对照品溶液1、2、3 mL，按“4.2.2”项下制备，依法测定。测得芹菜素平均回收率为97.97（n6），RSD1.8，结果见表3。表3  芹菜素加样回收率试验（略）4.9

18、0; 样品的测定      分别称取3批胶囊内容物（批号：070305、070306、070307），每批3份，按“4.2.2”项下制备成供试品溶液，依法测定。结果3批胶囊中芹菜素含量分别为0.182%、0.174%、0.174%。5  讨 论5.1  芹菜甲素在甲醇中有很好的溶解性，本实验分别考察了超声10、20、30、40 min的提取效果，结果表明超声30 min即可提取完全。5.2  芹菜素在植物体中以多种芹菜素苷及苷元的形式存在，故需酸水解后将其转化为芹菜素苷元方可准确测定其含量。分别考察了加入不同体积比的甲醇?25%盐酸（41、61、71、81）对芹菜素测定的影响，结果显示甲醇?25%盐酸（体积比71）的提取效果最佳。【参考