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1、高中生物选修一-DNA粗提取与鉴定一、基础知识:提取DNA的方法(1 1)蛋白酶:)蛋白酶:水解蛋白质水解蛋白质,不能水解不能水解DNADNA。(2 2)高温:)高温:大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受60608080的高温,而的高温,而DNADNA在在8080以上才会变性以上才会变性。(3 3)洗涤剂:)洗涤剂:瓦解细胞膜(瓦解细胞膜(主要破坏膜主要破坏膜中的蛋白质分子中的蛋白质分子),), 但对但对DNADNA没影响。没影响。2 2、DNADNA对酶、高温和洗涤剂的对酶、高温和洗涤剂的耐受性耐受性(1 1)二苯胺:)二苯胺:沸水浴条件下,沸水浴条件下,DNADNA遇二苯胺沸水浴遇二苯
2、胺沸水浴5min5min会染成蓝色会染成蓝色(2 2)甲基绿:将)甲基绿:将DNADNA染成染成绿色绿色3 3、DNADNA鉴定原理鉴定原理二、实验设计原则上只要含原则上只要含DNADNA的生物材料都可以,但是的生物材料都可以,但是选选取取DNADNA含量相对较高的生物组织含量相对较高的生物组织,成功率更大。,成功率更大。(一)实验材料的选取(一)实验材料的选取 本实验材料:新鲜本实验材料:新鲜鸡血细胞液鸡血细胞液和鸡全血相比,和鸡全血相比,鸡血细胞液中鸡血细胞液中DNADNA相对含相对含量高量高,保证实验能提取到足够量的,保证实验能提取到足够量的DNADNA。二、实验设计(二)破碎细胞,获取
3、含(二)破碎细胞,获取含DNADNA的滤液的滤液 1. 1.动物细胞:动物细胞:加蒸馏水加蒸馏水使细胞吸水胀破使细胞吸水胀破,玻璃棒,玻璃棒搅搅拌可加速细胞膜和核膜破裂拌可加速细胞膜和核膜破裂,过滤后过滤后收集滤液收集滤液 2. 2.植物细胞:植物细胞:切碎切碎后加后加洗涤剂洗涤剂和和食盐食盐,然后,然后充分充分搅拌、研磨搅拌、研磨,过滤后收集,过滤后收集滤液滤液;(;(P55P55问题)问题)二、实验设计(三)去除滤液中的杂质(三)去除滤液中的杂质 方案方案3 3:控制温度在:控制温度在60756075 方案方案2 2:滤液中加嫩肉粉(木瓜蛋白酶):滤液中加嫩肉粉(木瓜蛋白酶) 方案方案1 1:控制:控制NaClNaCl溶液的浓度,反复地溶液的浓度,反复地 溶解与析出溶解与析出DNADNA,去除杂质,去除杂质(四)(四)DNADNA的析出与鉴定的析出与鉴定此课件下载可自行编辑修改,仅供参考!此课
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