探讨牛大力对小鼠免疫功能的影响

1、探讨牛大力对小鼠免疫功能的影响摘要： 【目的】观察牛大力水提液对小鼠免疫功能的影响。【方法】选用SPF级KM小鼠，通过计算小鼠脾脏指数、胸腺指数、廓清指数和采用血清溶 血素试验法、二硝基氯苯诱导小鼠迟发型变态反应试验法，观察高、中、低剂量 牛大力（剂量分别为20、10、5 g kg-1 d-l）对正常小鼠免疫调节的影响。通 过测定免疫抑制小鼠（灌胃给予40 mg kg-1 d-l醋酸泼尼松）脾脏指数、胸腺 指数以及廓清指数，观察高、中、低剂量牛大力（剂量同前）对免疫低下小鼠免疫 调节的影响。【结果】牛大力对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数以及廓清指数均无 显著性影响，但能不同程度地增加免疫低下小鼠的

2、脾脏指数、胸腺指数及廓清指数。【结论】牛大力能不同程度地提高正常小鼠和免疫功能低下小鼠的免疫功能。关键词：牛大力/药理学;免疫功能低下/中药疗法;溶血素/血液;疾病模型，动物;小鼠牛大力（Radix Millettiae Speciosae），载于陆川本草，为蝶形花科植物美 丽崖豆藤Milletia speciosa Champ勺干燥根。功能清肺止咳，清凉解毒，用于 治疗咳血，痢疾，温病身热口渴，头昏等。本实验观察了不同剂量牛大力水提液 对小鼠免疫功能的影响，现报道如下。1材料与方法11动物SPF级KM小鼠,体质量1822 g，雌雄各半;SPF级豚鼠，体质量250300 g，均由广州中医药大学

3、实验动物中心提供。合格证号：SCXK粤20XX 0001o1 2药物与制备醋酸泼尼松片由广东华南药业有限公司生产 （批号： 071104）。牛大力购于广州致信中药饮片有限公司（批号：070701）,制备方法：取 牛大力干燥药材，用10倍体积的蒸馏水浸泡1 h，加热煮沸2 h，趁热过滤，残 渣再加6倍体积的蒸馏水，加热煮沸1 h，合并2次滤液，浓缩至1 g /mL浓度 备用，用时加蒸馏水稀释至所需浓度。丨3试剂与仪器二硝基氯苯（DNCB由上海试剂一厂生产（批号：20XX0101）, 丙酮由天津市红岩化学试剂厂生产（批号：20XX730）。UNICO720型光栅分光光 度计由尤尼柯上海仪器有限公司

4、提供，LDZ5型离心机由北京医用离心机厂生产， .VikcTGI. IM型高速离心机由上海安亭科学仪器厂生产，爲卩150型隔水式电 热恒温培养箱由上海跃进医疗器械厂生产。1牛大力对正常小鼠免疫器官质量的影响1-2取KM小鼠60只，随机分为5组：空白组，醋酸泼尼松组（剂量为40 mg- kg-1 d-l），牛大力高、中、 低剂量组（剂量分别为20、10、5 g kg-1 d-l）。每天灌胃给药1次，连续给 药12 d。末次给药1 h后，将小鼠脱颈椎处死，称体质量，取脾脏和胸腺，用 电子天平称质量，计算脾脏和胸腺指数 ：w脾=时脾/mbody,w胸腺=m胸腺/mbody。15牛大力对正常小鼠单核巨

5、噬细胞吞噬功能的影响1-3分组及给药方法同1 4。于末次给药1 h后，各鼠尾静脉注射50 g/L中华墨汁生理盐水液10 mL/kg，于注射墨汁后2 min及12 min，用毛细玻璃管从小鼠眼眶后静脉丛取血 23滴，吸20卩L溶于1 g/L Na2CO3 mL溶液中，摇匀，于分光光度计 680 nm 处测吸光度（D）值，计算廓清指数（IK） : IK=（logD2-logD12）/（t12-t2）（D2、D12分别为2 min、12 min时的吸光度，t12、t2分别为时间12 min、2 min）。丨6牛大力对免疫低下小鼠免疫器官质量的影响取KM小鼠60只，随机分为5组：空白组，模型组，牛大力

6、高、中、低剂量组，给药剂量同项下。除空白组外，其他各组小鼠上午灌胃给予40 mg - kg-1 d-1醋酸泼尼松，空白组给予等容积的蒸馏水，下午牛大力组小鼠灌胃给予相应药物，空白组和模型组灌服等容积的蒸馏水，连续12 d。末次给药1 h后，处死小鼠，按1 4项下方 法计算脾脏指数与胸腺指数。丨7牛大力对免疫低下小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响4-5分组及给药方法同丨6项下。按13项下方法检测IK。丨8牛大力对鸡红细胞致小鼠血清溶血素抗体形成的影响在鸡血中加入5倍体积的灭菌Alsever溶液，离心洗涤，用生理盐水配成体积分数5%生理盐水鸡红细胞混悬液。补体的制备：将 2只豚鼠心脏采血，离心后分离血

7、清，用10倍生理盐水稀释。取KM小鼠72只，随机分为6组：空白组，模型组，醋酸泼尼 松组（剂量为40 mg - kg-1 d -1），牛大力高、中、低剂量组（给药剂量同1 -1 项下）。除空白组外，各组小鼠先腹腔注射体积分数5%生理盐水鸡红细胞混悬液0 2汕进行免疫，然后灌胃给药1次，连续12 d。末次给药后1 h，眼眶静脉 取血，3 000 r/min 离心10 min，取30卩L血清用生理盐水稀释100倍，取稀 释后的血清1 mL，与体积分数5%生理盐水鸡血细胞混悬液0 5认、体积分数 10%补体0 5iL混合,在37C恒温箱中保温30 min后，0C冰箱中止反应，然 后离心，取上清液于分

8、光光度计 540 nm处比色，测D值，另设不加血清的空白 对照，取其上清液作为比色时调零的基准。1 9牛大力对DNCB致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响1 ,7取KM小鼠60 只，随机分为5组：模型组，醋酸泼尼松组，牛大力高、中、低剂量组 （给药剂 量同1 项下）。首次给药后，用脱毛剂（硫化钡加水调成稀糊状）脱去背部颈毛，次日于脱毛的颈部皮肤上滴100 g/L DNCB丙酮溶液20卩L/只致敏。小鼠每天 灌胃给药1次，连续14 d。末次给药后1 h，各鼠脱去腹部毛后滴25 g/L DNCB 丙酮溶液30卩L/只进行攻击。24 h后,尾静脉注射10 g/L伊文斯蓝溶液10 mL/kg 30 min后

9、，脱颈椎处死小鼠，剪取腹部蓝染皮肤，剪碎，用1 ：1丙酮和生理盐水混合液5 mL浸泡24 h，3 000 r/min离心10 min，取上清液于分光光度计 610 nm处比色，测定D值。统计学方法采用SPSS丨15统计软件进行分析。用单因素方差分析进行统计学显著性分析。组间差异显著性采用单因素方差分析中的 LSD方法进行 多重比较检验。2结果2 1牛大力对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及廓清指数（IK）的影响表1结 果显示，牛大力高、中、低剂量组对正常小鼠脾脏指数、胸腺指数及IK无显著性影响，与空白组比较差异均无显著性意义汗汕05；。表1牛大力对正常小鼠 脾脏指数、胸腺指数及廓清指数的影响2 2牛

10、大力对免疫低下小鼠脾脏指数、胸腺指数及廓清指数的影响表2结果显示，与空白组比较，模型组小鼠的脾脏指数、胸腺指数与廓清指数均显著降低 【陀05）。牛大力高、中剂量组均能显著提 高模型小鼠的廓清指数汗0 05）。表3牛大力对鸡红细胞所致小鼠血清溶血素抗 体形成的影响2 牛大力对DNC致小鼠迟发型皮肤过敏反应的影响表 4结果显示，牛 大力高、中、低剂量组均能不同程度抑制小鼠迟发型变态反应，但与模型组比较 差异无显著性意义汗汕05； o表4牛大力对DNCBt小鼠迟发型皮肤过敏反应的 影响3讨论机体免疫功能状态对很多疾病有重要影响。研究表明清热药能增强免疫能 力，抑制变态反应。胸腺是T淋巴细胞分化成熟的

11、中枢免疫器官， 脾脏则是体内 最重要的外周免疫器官，也是 T、B淋巴细胞定居和接受抗原刺激后产生免疫应 答的重要场所，它们与机体的细胞免疫和体液免疫密切相关，在免疫功能低下时常有胸腺和脾脏萎缩，体积变小。本实验结果表明，在醋酸泼尼松致小鼠形成免 疫抑制的条件下，牛大力水提液能增加小鼠胸腺和脾脏指数，但对正常小鼠的胸腺指数、脾脏指数无显著性影响。本实验选用小鼠炭粒廓清实验，观察牛大力对正常小鼠及免疫低下小鼠非 特异性免疫的影响。中华墨汁作为颗粒状异物静脉注射进入血循环，能迅速被单核吞噬细胞清除。本实验结果表明，牛大力水提液对正常小鼠的廓清指数无显著 性影响，但可使醋酸泼尼松所致免疫低下小鼠的廓清

12、指数显著增加，即单核吞噬细胞功能明显增强。说明牛大力能增强机体的非特异性免疫功能。本实验选用血清溶血素实验，观察牛大力对特异性免疫的影响。经鸡红细 胞免疫的小鼠，可产生溶血素即抗鸡红细胞抗体，这种抗体在体外与鸡红细胞、 补体一起温育，即可使鸡红细胞溶解，释放出血红蛋白，使溶液成红色，根据颜 色的深浅，可反映红细胞溶出量的多少，而红细胞溶血与血清中抗体含量有关， 测定其上清液的光密度，则可间接判断血清中抗体形成的数量。本实验结果表明， 牛大力水提液能增加血清溶血素含量， 以中、低剂量组效果显著，说明牛大力能 增强机体的特异性免疫功能。DNCB是一种小分子半抗原，可透过上皮与角蛋白及胶原蛋白结合为

13、全抗原，从而刺激T淋巴细胞致敏，使实验动物对此类物质产生过敏性。当DNCB第 2次攻击时,T淋巴细胞与抗原反应释放淋巴因子而引起组织损伤，继而形成迟发性皮肤过敏反应11。本实验结果表明，牛大力水提液能一定程度抑制DNCBI起的小鼠迟发型皮肤过敏反应，抑制T淋巴细胞介导的特异性细胞免疫应答。【参考文献】徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学M.第3版.北京：人民卫生出 版社，20XX 934-935，945-946，1430.戴岳，杭秉茜，李佩珍，等.女贞子煎剂对小鼠免疫系统的作用J.中国药 科大学学报，1987，18(4) : 301.邓文龙，刘家玉，叶尚钧，等.人参对状内皮系统吞噬功能影响的研究J. 中医杂志，1983，24(7) : 546.张大方，金若敏.药理与中药药理实验M.上海：上海科学技术出版社，20XX 89.黄蕾,文昌凡.丹柏四逆颗粒剂抗炎免疫作用的实验研究J.中国中医药信 息杂志，20XX 1(2) : 120.李勇，夏翠英，章天寿，等.前列康对鸡红细胞致小鼠溶血素抗体生成的影 响J.安徽中医学院学报，20XX 23(6) :