湖北省监利县第一中学高中生物 土壤中分解尿素细菌的分离与计数

1、课题2 土壤中分解尿素细菌的分离与计数 【学习目标】： 1、巩固培养基对微生物进行选择的原理；巩固统计微生物数量的方法2、能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析与评价3、领悟生物与环境相适应的观点，体会微生物分离计数过程的严谨性、科学性。【使用说明及学法指导】1.先回忆教材内容，构建知识流程图；通过导学案，完善知识系统。2.本节重难点：学会统计微生物数量的方法，能进行实验设计与操作，并对实验结果进行分析与评价。进一步形成无菌技术的意识。基础回顾一、植物能够利用的氮元素主要以什么形式存在，农田施用尿素能直接被农作物吸收吗？二、筛选菌株的思路。渗透生物与环境相适应的观点。1、PCR技术需要什么

2、酶，从什么生物中提取，从哪里获得？这提示我们，到自然界中筛选目的菌株需要怎么做？2、实验室中如何进行目的菌株的筛选？什么是选择培养基？对于尿素分解菌的培养基要注意些什么？三、分离与计数1.要分离微生物你如何选择所用的培养基类型和接种方法2微生物的计数方法有几种？统计菌落数目是什么方法？菌落计数要注意些什么要求？四、分离与计数的实验流程设计，各步骤中你认为要注意哪些小知识。五、实验的计划性1、做好标记： 2、制定计划：能力提升一、请结合P24的三则资料设计表格，比较与几种微生物有关的数据。二、如果知道尿素分解菌的稀释倍数为1046设置对照 ：你如何设置对照，能达到什么目的，一共需要几个平板？三、

3、（联系课题三）1.土壤中分解尿素细菌的分离与计数实验中如何鉴定分离到的细菌是分解尿素的细菌呢，这与纤维素分解菌的鉴定方法有区别吗？2.本实验中为什么没有使用液体培养基进行选择培养？四、（联系课题一）你认为如何进行无菌操作？课后练习：一、选择题 1.可以鉴定出分解尿素的细菌的方法是()。A.以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂B.以尿素为唯一氮源的培养基中加二苯胺试剂C.以尿素为唯一氮源的培养基中加入苏丹试剂D.以尿素为唯一氮源的培养基中加入双缩脲试剂2.关于微生物的培养,下列叙述错误的是()。A.细菌一般在3037 的温度下培养12 dB.放线菌一般在2528 的温度下培养57 dC.霉菌

4、一般在2528 的温度下培养34 dD.不同种类的微生物,一般需要相同的培养温度和培养时间3.在培养基中加入尿素(唯一氮源),以分离出能分解尿素的细菌,这种加入尿素的培养基在功能上属于()。A.选择培养基B.固体培养基 C.液体培养基D.半固体培养基4.需要在火焰旁操作的有()。土壤取样称取土壤稀释土壤溶液涂布平板微生物的培养A.B.C.D.5.以下关于分解尿素的细菌的说法,正确的是()。A.能分解尿素的原因是能合成分泌蛋白酶B.以尿素作为唯一的碳源C.环境中含有大量的尿素诱导该细菌产生了分解尿素的特性D.以尿素为唯一氮源且添加了酸碱缓冲剂的培养基培养该菌后不会使酚红指示剂变红6.稀释涂布平板

5、法分离分解尿素的细菌时使用的涂布器应保存在体积分数为70%的酒精中,取出后又要放在酒精灯火焰上引燃,这两步分别属于什么技术?()A.灭菌、灭菌B.消毒、消毒 C.灭菌、消毒D.消毒、灭菌7.通常用来作为菌种鉴定的重要依据是()。A.菌落B.细菌形态 C.细菌体积D.细菌结构8.下列关于微生物分离和培养的叙述,错误的是()。A.微生物培养前,需对培养基进行消毒B.测定土壤样品中的细菌数目,常用菌落计数法C.分离土壤中不同的微生物,要采用不同的稀释度D.分离能分解尿素的细菌,要以尿素作为培养基中唯一氮源9.实验测定链霉素对3种细菌的抗生素效应,用3种细菌在事先准备好的琼脂平板上画3条等长的平行线(

6、3条线均与图中的链霉素带接触),将平板置于37 条件下恒温培养3天,结果如下图所示。从实验结果分析,以下叙述不正确的是()。A.链霉素能阻止结核菌的生长B.链霉素对结核菌比对霍乱菌更有效C.链霉素对结核菌比对伤寒菌更有效D.链霉素可以用于治疗伤寒病人10.下列有关土壤中微生物的分离与计数的说法,错误的是()。A.因为土壤中各类微生物的数量不同,所以,为获得不同类型的微生物要按不同的稀释倍数进行分离B.测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量,选用的稀释范围不同C.如果得到了3个或3个以上菌落数目在30300的平板,则说明稀释操作比较成功,并能够进行菌落的计数D.牛肉膏蛋白胨培养基

7、的菌落数目明显小于选择培养基的数目,说明选择培养基已筛选出一些细菌菌落二、非选择题11.马丁培养基是实验室常用的培养基之一。下表为马丁培养基的化学成分,据此回答下列问题。成分含量成分含量KH2PO4·3H2O0.1 g葡萄糖1 gMgSO4·7H2O0.05 g蛋白胨0.5 g0.1%孟加拉红溶液0.33 mL琼脂1.52 g2%去氧胆酸钠溶液2 mLH2O100 mL链霉素溶液(1×104 /mL)0.33 mL(1)该培养基中加入了链霉素,能抑制细菌和放线菌,但真菌可以在上面生长,因此培养基是一种培养基。 (2)葡萄糖能给微生物生长提供和。 

8、;(3)蛋白胨能给微生物生长提供和。 (4)培养基中KH2PO4·3H2O可给微生物提供含的无机盐。 (5)琼脂的作用是作为。 12. 苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如图所示，为土壤样品。请回答下列问题： 1）中培养目的菌株的选择培养基中应加入 作为碳源，中不同浓度碳源的培养基 （A影响；B不影响）细菌的数量，如果要测定中活细菌数量，常采用 法。（2）为对照，微生物在中不生长，在中生长，与培养基的主要区

9、别在于 ；使用 法可以在上获得单菌落。采用固体平板培养细菌时为什么进行倒置培养？（3）如何比较不同菌株降解苯酚能力的大小（苯酚显酸性）？13.某化工厂的污水池中,含有一种有害的、难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基,成功地筛选到了能高效降解化合物A的细菌(“目的菌”)。请分析回答下列问题。(1)培养基中加入化合物A的目的是筛选,这种培养基属于培养基。 (2)“目的菌”生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的,实验需要振荡培养,由此推测“目的菌”的代谢类型是。 (3)培养若干天后,应选择培养瓶中化合物A含量的培养液,接入新的培养液中连续

10、培养,使“目的菌”的数量。 (4)可采用的方法将“目的菌”接种到固体培养基上,通过法对“目的菌”的数量进行统计,通常需要对菌落数为的平板进行计数。 (5)实验结束时,使用过的培养基应该进行处理后,才能倒掉。 14.为了调查某河流的水质状况，某研究小组测定了该河流水样中的细菌含量，并进行了细菌的分离等工作。回答下列问题：（1）该小组采用稀释涂布平板法检测水样中的细菌含量。在涂布接种前，随机取若干灭菌后的空平板先行培养了一段时间，这样做的目的是 ；然后，将1mL水样稀释100倍，在3个平板上用涂布法分别接入0.1mL稀释液；经适当培养后，3个平板上的菌落数分别为39、

11、38和37。据此可得出每升水样中的活菌数为 。（2）该小组采用平板划线法分离水样中的细菌。操作时，接种环通过 灭菌，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。这样做的目的是 。（3）示意图A和B中， 表示的是用稀释涂布平板法接种培养后得到的结果。（4）该小组将得到的菌株接种到液体培养基中并混匀，一部分进行静置培养，另一部分进行振荡培养。结果发现：振荡培养的细菌比静置培养的细菌生长速度快。分析其原因是：振荡培养能提高培养液的 的含量，同时可以使菌体与培养液充分接触，提高 的利用率。知识梳理参考答案基础回顾三2每隔24小时统计一次菌落数目，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，原因是以防止因培

12、养时间不足而导致遗漏菌株的数目。如果得到了2个或2个以上菌落数在30-300的平板（一般选择菌落数在30300的平板进行计数。稀释程度太低，一个菌落可能来自多个细菌；稀释程度太高，可能培养基上没有菌落），说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数。统计的菌落数比活菌的实际数目低 。这是因为当两个或多个细胞在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果一般用菌落数来表示。平板计数公式：每克样品中的菌落数(C÷V)×M，其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。五1制定计划。第一天进行实验器材和培养基制备；

13、第二天进行稀释接种；第三四五天进行实验结果的观察和记录。2做好标记。稀释操作后的试管按顺序摆在试管架上；标记培养基的种类、培养日期、平板上培养样品的稀释度等。能力提升一 土壤中含量 稀释倍数 适宜PH 适宜温度/ 培养时间/ 天细菌 70-90% 104、105、106接近中性6.5-7.5 30-3712放线菌  104、105、103 7.5-8.5 25-2857真菌  104、102、1035.0-6.0 25-2834 二需将空白培养基（选择培养基不接种）同时在相同条件下培养作为对照，对照的培养皿在培养过程中没有菌落生长，说明培养基没有被杂菌污染。 完全（或牛肉膏蛋白胨）培养基接种相同稀释度的稀释液在相同条件下培养作为对照组，牛肉膏培养基的菌落数目明显大于选择培养基的数目，说明选择培养基已筛选出一些菌落。13个三1.有些微生物可以利用其他微生物的代谢产物生长繁殖，因此能在选择培养基上生长的微生物不一定是所需要的微生物，还需要进一步鉴定。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。2.便于计数。四无菌操作：取土样的用具在使用前都需要灭菌。应在酒精灯火焰旁称取土壤，并在酒精灯火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在