关于破坏实验的具体设计

1、关于破坏实验的具体设计存在问题：新药或仿制药申报时其中质量研究部分下专属性试验里的破坏试验该如何实施，比如：1 .强碱破坏试验，用多少浓度，加多少量，加完后需要加热破坏还是常温震摇？2 .破坏试验是将供试品预先加热还是配成供试品溶液再加热？3 .破坏试验是在多大的光强度照射下进行？4 .双氧水破坏用多大量，破坏后怎么取出双氧水？问题解答：1.碱降解采用0.1mol/L1mol/L的氢氧化钠溶液，具体浓度和量，视降解程度而定，对于采用HPLC法测定降解产物时，以主成分计算，一般降解10左右；为了加快反应或者提高降解强度，必要时可以加热或提高浓度；2 .对于原料药一般直接进行，有时可考虑水溶液或混

2、悬液的降解；3 .光照试验条件可采用4500LX；4 .氧化降解通常采用30%的过氧化氢溶液，用量也是视降解程度而定。首先你应该明确破坏性试验的目的：一是通过考察药品在一系列剧烈条件下的稳定性，了解该药品内在的稳定特性及其降解途径与降解产物。其二，这些试验也能在一定程度上对有关物质分析方法用于检查降解产物的专属性进行验证。既然试验的目的是确定可能出现杂质的来源，并证明分析方法专属性强，杂质与主峰分离度良好。因此对于强酸、强碱及强氧化剂的浓度及时间、取样方式等没有明确的规定。具体品种具体模索，初步试验了解样品对影响的因素，酸、碱、氧化等条件基本稳定情况后，进一步调整破坏试验条件，只要，使药物有一

3、定量的降解，并对可能的降解途径和降解机制进行分析，保证实验的意义即可。实验一般的浓度范围为：强酸：0.11.0mol/LHCL溶液或视情况调节强碱：0.11.0mol/LNaOH溶液或视情况调节强氧化剂：30%的H2O2或视情况配置不同浓度的溶液但在研究中应注意如下的问题：1、 破坏条件太剧烈，主药峰太低，提供的色谱图主峰与降解物或降解物间分离不好，甚至主峰消失，失去破坏性试验意义。一般样品含量控制在85%90%范围（归一化法）主成份含量占绝大部分，已产生一定量的降解产物与样品长期放置的降解情况较接近，此情况下，破坏性试验的结果更具有实际意义，像楼主所说的碱破坏主药基本没有的结果是不能采用的。

4、2、 在进行酸、碱、强氧化破坏试验时，每个试验最好都要做相应的空白破坏溶剂的试验作为辅助。用过氧化氢氧化过后，即使有峰，只要在在前3分钟左右出峰，不影响主药峰和降解产物峰就行。具体用量要试验摸索，一般用30%的浓度，同时要注意反应时间的长短。1、另外做破坏试验HPLC检测时应作空白溶剂的检测以做对照，正像楼主说的，双氧水是不用除去的，加一个同样条件下的双氧水空白检测其出峰情况，然后在主成分图谱里去掉该峰就可以了。2、楼主对破坏试验的目的不是很明确，建议阅读以下蒋琬博士的美国FDA的CGMP现场检查一书或ICH指导原则。或许对你的问题有所帮助。3、你的试验是按照CP标准还是EP或USP标准？是国

5、内还是国际注册，搞清楚这些再对你要做的试验方案重新设计。峰纯度要用DAD检测器吧。我做的破坏性试验时，原料很稳定，我都采用的6mol/l的盐酸和氢氧化钠，以及30%的双氧水，而且加入了水浴的条件。还有一些甚至需要回流的。其实破坏条件要根据药物的性质而定。采用酸碱氧化等破坏的强度以主峰面积归一化纯度达到85%90%为准二极管阵列，全波段扫描，有三维立体图，主峰纯度曲线要三个九才算合格破坏试验，也称为强制降解试验（stressingtest），在人为设定的特殊条件下，如酸、碱、氧化、高温、光照等，引起药物的降解，通过对降解产物的测定，验证检测方法的可行性，同时分析药物可能的降解途径和降解机制。破坏

6、性试验的设计常结合具体药物的特点，选择合适的条件，使药物在每种环境下尽可能都有一定量的降解，并根据剂型的特点充分分析药物的降解途径和降解机制，保证试验的意义。对于相对稳定的药物，可增强破坏的强度，至少在1种条件下的降解达到10%，很少有药物对所有条件都稳定。1 .酸破坏试验一般选择0.11mol/L的盐酸，在室温或加热条件下进行考察。一般配制2倍浓度溶液，测定时以方便用等浓度的碱溶液调节pH值至中性。2 .碱破坏试验一般选择0.11mol/L的氢氧化钠溶液，在室温或加热条件下进行考察。一般配制2倍浓度溶液，测定时以方便用等浓度的酸溶液调节pH值至中性。3 .高温破坏试验（热破坏）分别在固体和溶

7、液状态下进行考察。固体一般60或者80下1530天，溶液可水浴或者130c烘箱下放置数小时。4 .光破坏试验分别在固体和溶液状态下进行考察（考察1530天）。5 .氧化破坏试验主要在溶液状态下进行考察，氧化剂可采用饱和的氧气或不同浓度的过氧化氢（双氧水），分别在室温或加热条件下进行考察。需要同法进行空白试验，如为原料破坏可仅进行氧化破坏空白。试验结束后需要报告得出明确的结论：药品在各种条件下的稳定特性、降解途径与降解产物，有关物质分析方法是否可用于检查降解产物等。破坏试验常规要求：1 .对于采用HPLC法测定降解产物时，以主成分计算一般降解10即可。并需要采用有效的方法对降解产物进行检测，需要

8、报告测定的回收量，通常应达到90左右，以证明检测方法的有效性。2 .对于破坏性试验时降解量较大的降解产物，建议结合稳定性研究中加速试验和长期试验的具体杂质数据，参考ICH对新原料药中杂质的规定（每日服用最大剂量不超过2克时，鉴定阈值为0.10；每日服用最大剂量超过2克时，鉴定阈值为0.05），必要时进行定性分析，并作为已知杂质，根据安全性数据，采用已知杂质对照，确定合理的限度，订入质量标准。不能采用已知杂质进行对照时，可通过测定降解产物、主成分在测定波长处的吸收系数，分析两者的差异。若两者吸收系数相差较大时，建议采用响应因子校正后进行有效控制；如果两者吸收系数相差较小，建议采用自身对照法或峰面

9、积归一化法进行有效控制。3 .破坏性试验产生的降解产物的个数比较多，采用HPLC法测定时，需考虑主成分与降解产物之间、降解产物相互之间的分离度，保证降解产物峰与主峰、降解产物峰之间有良好的分离度。另外，对于原料药，分离度符合要求也应考虑到主药与起始原料、各合成中间体是否有良好的分离度；对于制剂，应注意辅料、辅料降解产物的干扰。需要值得一提的是色谱条件的确定通常以最难分离的两个降解产物或降解产物与主成分之间的分离度符合要求作为依据之一。4 .对于创新药物的破坏性试验来说，峰纯度分析非常重要，一是可以了解降解产物的特性；二是可以有效地检出和控制杂质。检测峰纯度通常采用二级管阵列检测器或者液质连用技

10、术分析测定各色谱峰的纯度，说明在主峰中、各降解产物峰中有没有包含其它峰。简单地通过观察峰形判断峰的纯度没有说服力。5 .如辅料破坏出峰，不能从样品破坏峰中扣除，溶剂峰除外（譬如双氧水的峰）。参考案例：破坏试验对本品进行酸破坏、碱破坏、氧化破坏、高温破坏及光破坏试验，了解本品的降解途径，同时考察破坏产物峰与主峰的分离情况，以验证方法的专属性。取本品10片，研细，备用；取按处方比例混合的辅料适量，备用。酸破坏：精密称取本品细粉适量（约相当于XXX15mg），置30ml刻度试管中，加入1mol/L盐酸溶液15ml，置水浴中加热5小时，调节pH值至中性，加流动相稀释至30ml，滤过，取续滤液作为酸破坏

11、溶液。碱破坏：精密称取本品细粉适量（约相当于XXX15mg），置30ml刻度试管中，加入1mol/L氢氧化钠溶液15ml,置水浴中加热5小时，调节pH值至中性，加流动相稀释至30ml,滤过，取续滤液作为碱破坏溶液。氧化破坏：精密称取本品细粉适量（约相当于XXX15mg），置30ml刻度试管中，加入5%双氧水溶液5ml，置水浴中加热1小时，加流动相稀释至30ml，滤过，取续滤液作为氧化破坏溶液。高温破坏：精密称取本品细粉适量（约相当于XXX15mg），置30ml刻度试管中，加水15ml，置水浴中加热5小时，加水稀释至30ml，滤过，取续滤液作为溶液高温破坏溶液；取本品细粉适量，于60下放置15天，精密称取适量，加流动相制成每1ml约含0.5mg的溶液，滤过，取续滤液作为固体高温破坏溶液。光破坏：精密称取本品细粉适量（约相当于XXX15mg），置30ml刻度