鼻咽癌组织p53蛋白积聚与血清EB病毒抗体ⅠgAVCA的关系

1、鼻咽癌组织p53蛋白积聚与血清EB病毒抗体gA/VCA的关系【摘要】目的：研究鼻咽癌活检组织中p53积聚与患者血清EB病毒抗体gA/VCA滴度水平的相关关系。材料和方法：用免疫组化方法检测取自36例鼻咽癌组织中p53表达和细胞增生情况；用免疫酶标法检测患者血清gAVCA滴度。结果：鼻咽癌活检组织中p53蛋白表达与患者血清gA/VCA几何平均滴度(geometricmeantitre,GMT)和细胞增生核抗原(PCNA)表达程度正相关。10例p53高积聚(+)患者的gA/VCAGMT(519.882.53)明显高于12例无p53积聚患者(2262.84)。PCNA表达强度与gA/VCAGMT亦呈

2、正相关。结论：p53积聚强度与PCNA呈正相关提示鼻咽癌组织中积聚的p53已丧失阻止细胞从G1期进入S期的生理功能。而p53积聚强度与患者血清gA/VCAGMT升高呈正相关提示，鼻咽癌细胞中EB病毒随癌细胞增生加速而增多可能是患者gA/VCA滴度升高的原因。关键词：p53；鼻咽肿瘤；爱波斯坦巴尔病毒；血清学中图号：R739.63文献标识码：A文章编号：1000467X(1999)s0000103Relationship between p53 accumulation and immunoglobulin A against viral capsid antigen of Epstein Ba

3、rr virus( gA/VCA) in nasopharyngeal carcinoma(NPC)【Abstract】 Objective：To investigate the relationship between p53 accumulation of NPC tissues and patients serum gA/VCA titre. Material and Methods： Using immunohistochemistry to detect the p53 accumulation and ccll prolifcration muclcar antigen and i

4、mmunocnzymatic mcthod to assay the serum gA/VCA titre in 36 NPCs. Results：The p53 accumulation was positively correlated with both patients serum gA/VCA titre and NPC cell proliferation nuclear antigen expression. The geometric mean titre(GMT)of gA/VCA in 10 NPCs with marked p53 accumulation(+)(519.

5、88 2.53)was significantly highcr than that in 12 NPCs without accumulation( )(226.26 2.84). Conclusions： The correlation between p53 accumulation and PCNA expression in NPC tissues indicates that accumulated p53 in NPC cells has lost its physiological function to check the cells from G1to Sphase,and

6、 the phenomenon of p53 accumulation correlated to the serum gA/VCA GMT in NPC paticnts implies that EB virus in NPC cell replication following the increased carcinomous cell proliferation might be the reason of elevatlion of serum gA/VCA GMT in NPC patients. Key words： p53;Nasopharyngeal carcinoma;E

7、pstein? Barr virus;Scrology抗EB病毒壳抗原的血清免疫球蛋白(gA/VCA)滴度升高作为诊断鼻咽癌的辅助指标应用于临床已多年。晚期患者gA/VCA几何平均滴度(geometricmeantitre,GMT)常高于早期患者1。另外，鼻咽癌组织中常见p53积聚，且发现该现象与细胞增殖指标PCNA表达呈正相关2。Porter等曾观察鼻咽癌患者血清gA/VCA滴度与其癌组织中p53表达的关系，认为两者无关3。本文以鼻咽癌高发区广东省的36例鼻咽癌患者为研究对象，观察了两种现象之间的关系，现报告如下。1材料和方法1.1对象和材料随机收集36例就诊于中山医科大学肿瘤医院的鼻咽癌患

8、者血清和鼻咽活检组织，鼻咽癌组织用10中性福尔马林固定，石蜡包埋。1.2免疫组化方法采用LSAB免疫组化方法，DAB显色，甲基绿衬染。鼠抗人单克隆抗体p53(Do7；M7001)、PCNA(pc10；M0879)以及LSAB试剂盒均购自DAKO公司。抗p53抗体工作浓度为1100，组织经微波处理修复抗原10分钟。抗PCNA抗体工作浓度为150，组织不经微波处理。阳性结果判断：肿瘤细胞核中出现棕色颗粒为阳性。根据阳性细胞占肿瘤细胞数的比例进行半定量分级：1).p53：阳性细胞数10为()，1170为(+)，71为(+)，大于两个()者视为积聚。2).PCNA：阳性细胞25为()，2650为(+)

9、，51为(+)。1.3免疫酶标法检测患者血清中gA/VCA滴度根据曾毅等报道的方法4，以B958细胞为靶细胞，采用AEC作为显色底物，故抗原抗体复合物呈红棕色。玻片上有大于10的细胞呈红棕色为阳性。1.4统计学处理：t检验，2检验和等级相关分析。2结果2.1p53表达与患者血清gA/VCA滴度的关系p53表达率(13)和p53积聚率(23)分别为94?4(34/36)和66?7(24/36)。鼻咽癌组织中p53表达与患者血清gA/VCA滴度呈正相关（P0.05）（表）p53高积聚(3)的患者gA/VCAGMT(519.882.53)明显高于无p53积聚患者(2262.84)（P0.05）。表1

10、36例鼻咽癌组织中p53蛋白表达与患者血清gA/VCA滴度的关系P53 n IgA/VCA滴度 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 - 2 1 0 0 0 1 0 0 1+ 10 0 1 0 1 6 2 0 2+ 14 0 1 1 1 3 5 3 3+ 10 0 0 0 3 1 2 4 合计 36 1 2 1 5 11 9 72.2p53表达与PCNA表达的关系鼻咽癌组织中PCNA表达率100(36/36)。p53与PCNA表达呈正相关（P0.001）（表2）表236例鼻咽癌组织中p53蛋白与PCNA表达的关系P53 n PCNA + + + - 2

11、 1 1 0 + 10 3 5 2 + 14 0 10 4 + 10 0 2 8 合计 36 4 18 142.3PCNA表达与患者gA/VCA滴度的关系鼻咽癌组织中PCNA表达与gA/VCA滴度也呈正相关（P0.05）（表3）表3鼻咽癌组织中PCNA表达与患者血清gA/VCA滴度的关系PCNA n IgA/VCA滴度 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 1/640 1/1280 1+ 4 0 1 0 0 3 0 0 2+ 18 1 1 1 1 7 4 3 3+ 14 0 0 0 4 1 5 4 合计 36 1 2 1 5 11 9 73讨论鼻咽癌组织中p53积聚是常见现象2

12、。大多数鼻咽癌患者血清gA/VCA滴度升高5。本文结果再次证实上述结论。两者在鼻咽癌发生发展过程中有无关系是一个令人感兴趣的问题。野生型p53调节细胞生长的作用主要在于它能控制细胞从G1晚期进入S期6。鼻咽癌中虽有p53积聚，但其基因的58外显子突变率很低7，这种积聚的p53是否已丧失控制细胞进入S期的功能?本文结果显示鼻咽癌组织中p53蛋白表达与PCNA表达呈正相关，与本研究组以前用抗p53多抗CM1检测249例鼻咽癌组织中p53蛋白和PCNA表达的结果一致2。PCNA表达于增殖周期细胞，在细胞周期的S期合成最多。但不见于G0期细胞。故是反映细胞增殖的指标。上述研究结果说明鼻咽癌组织中积聚的

13、p53蛋白已丧失了抑制细胞生长的功能。p53可通过其下游基因p21WAF1调控PCNA的作用。失活的p53蛋白对一系列p53下游靶基因的调节作用丧失，最终可导致鼻咽癌细胞中PCNA升高8，9。本文p53蛋白和PCNA表达均与患者血清中gA/VCA滴度呈正相关的结果提示p53蛋白积聚增多与患者血清gA/VCA升高之间的正相关关系可能与p53失活后引起肿瘤细胞增殖加快有关。众所周知，EB病毒DNA片段的复制是与肿瘤细胞DNA合成同时进行的，因此子细胞与母细胞拥有同等数量的EB病毒基因拷贝10。其机理可能是EB病毒的延迟促进子(Qp)在细胞增生时被激活，打开了EBNA1mRNA的转录程序，而EBNA

14、1mRNA则启动了EB病毒DNA也就越多。这可为患者血清gA/VCAGMT与其癌组织中p53和PCNA的表达强度呈正相关提供理论上的依据。综上所述，鼻咽癌组织中p53高积聚和血清gA/VCA高滴度这两个指标可能具有临床意义。参考文献钟建明，曾毅，廖建，等.Epslein?Barr病毒gA/VCA抗体变动规律和鼻咽癌发病的关系J.中华实验和临床病毒学杂志，1996；10(3)：225228.钱洪流，宗永生，张昌卿.鼻咽癌中p53蛋白积聚的生物学特征和临床意义J.临床与实验病理学杂志，1996，12(1)：1518李锦添，宗永生.鼻咽癌的病理改变与血清中EB病毒VCA/gA抗体滴度的关系J.中山医

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